Frisch geschnitten und gefärbt - Pinus nigra aus der Dillmulde *

Rolf-Dieter Müller · Mai 02, 2012, 08:25:38 VORMITTAG

Liebe Mikroskopiegemeinde,

ich hatte das Glück an der hochinteressanten geologischen Exkursion in die Dillmulde teilnehmen zu können. Einen ausführlichen Exkursionsbericht von Jörg (Fahrenheit) finden Sie auf der Webseite des Mikroskopischen Kollegiums Bonn: http://www.mikroskopie-bonn.de/

Neben den verschiedenen Gesteinen gab es auch hinreichend Gelegenheit andere dem Mikroskopiker interessierende Proben zu sammeln. Mir sind zum Beispiel die umfangreichen Schwarzkiefer-Bestände in der Dillmulde aufgefallen und so war es naheliegend, einige Nadeln für Schnitte mitzunehmen.

Eine besondere Veranstaltung bedarf auch einer besonderen Nachbearbeitung und so entschloss ich mich, eine hier noch nicht gezeigte Färbung vorzustellen.

Es ist eine Zweifachfärbung mit Rhodamin B und Alcianblau. Hierfür habe ich das Nadelblatt im Rasierklingenmikrotom quer geschnitten, die Schnitte weitestgehend in Rotihistol entharzt, gefärbt und über Glycerinwasser in Glycerin eingeschlossen.

Zwei Aufnahmen mit 16x PlanNeofluar (immergiert mit Glycerin) wurden mit Photoshop Elements 10 zu dem nachstehenden Übersichtsbild zusammengesetzt.

Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter Müller

Eckhard · Mai 02, 2012, 09:18:38 VORMITTAG

Guten Morgen Rolf-Dieter,

sehr schön, Schnitt, Färbung und Aufnahme. Du scheinst Deine rosa Phase zu haben

Herzliche Grüsse
Eckhard

Klaus Herrmann · Mai 02, 2012, 09:27:46 VORMITTAG

Lieber Rolf-Dieter,

schöner Schnitt und neue ungewöhnliche Färbung!

Das rosa ist gewöhnungsbedürftig, aber da das Rhodamin B ein Fluoreszenzfarbstoff ist wird sich auf jeden Fall lohnen eine Fluoreszenzaufnahme nachzuschieben. Robin Wacker hatte seine W3A auch mal modifitziert mit Rhodamin B. W3B

Jan Kros · Mai 02, 2012, 09:45:35 VORMITTAG

Lieber Rolf-Dieter

Sehr schöne Schnitt und aucheine schöne Färbung
Liebe Gruss
Jan

Hans-Jürgen Koch · Mai 02, 2012, 15:21:29 NACHMITTAGS

Lieber Rolf-Dieter,

der Schnitt ist super, an den Farbton der Zweifachfärbung mit Rhodamin B und Alcianblau muss ich mich gewöhnen.

Gruß
Hans-Jürgen

Fahrenheit · Mai 02, 2012, 18:02:51 NACHMITTAGS

Lieber Rolf-Dieter,

ein wie gewohnt perfekter Schnitt! Was Du so aus dem kleinen Haga heraus holst, überrascht mich immer wieder.

Danke für die interessante Färbung! Könntest Du vielleicht noch einige Bilder mit dem 40er zeigen? Die Leitbündel und die Epidermis mit den Stoma würden mich besonders interessieren.
Auch das "Entharzen" mit Rotihistol finde ich spannend. Hast Du es vor oder nach der Fixierung eingesetzt und wie lange ist die Einwirkdauer?

Herzliche Grüße
Jörg

Rawfoto · Mai 02, 2012, 22:43:05 NACHMITTAGS

Hallo Rolf-Dieter,

Der Tipp mit dem Entharzen ist genial, besten Dank dafuer. Die Faerbung mag ungewoehnlich sei, das Ergebnis ist aber beeindruckend ...

Liebe Gruesse

Gerhard

Rolf-Dieter Müller · Mai 03, 2012, 20:39:30 NACHMITTAGS

Erst einmal vielen Dank für die zahlreichen Anmerkungen, die ich hiermit im einzelnen beantworten möchte.

Zitat von: Eckhard in Mai 02, 2012, 09:18:38 VORMITTAG
... Du scheinst Deine rosa Phase zu haben. ...

Eckhard, das ist nicht gewollt und nur der Problematik geschuldet, das Chrysoidin nicht bleibend aufzieht und Acriflavin den Farbeindruck verschmutzt. Ich wollte ja bei diesem Schnitt das Grün des Chlorophylls halten, deshalb wurde er nicht fixiert. Bei fixierten Schnitten sieht das alles wieder ganz anders aus.

Zitat von: Klaus Herrmann in Mai 02, 2012, 09:27:46 VORMITTAG
... aber da das Rhodamin B ein Fluoreszenzfarbstoff ist wird sich auf jeden Fall lohnen eine Fluoreszenzaufnahme nachzuschieben. Robin Wacker hatte seine W3A auch mal modifiziert mit Rhodamin B. W3B

Klaus, als ich mir seinerzeit die ,,Wackerfarben" bevorratete, hatte ich mir auch Rhodamin B als Pigment zugelegt. Für die Wackerfärbung gefiel es mir nicht so ganz, denn es wirkt eine Idee abgestumpfter als das lebhafte Acridinrot. Zwar unmerklich, aber sichtbar. Vielen Dank für den Hinweis Rhodamin B als Farbstoff für Sekundärfluoreszenz zu nehmen. Ich werde dieses bei einem neuen Schnitt nachholen. Was aber auch recht gut gehen dürfte und soweit ich mich erinnere hast gerade Du dieses für die Mikrofotografie in diesem Forum eingeführt, die Farbwirkung mittels Polfiltern brillianter einzustellen.

Zitat von: Jan Kros in Mai 02, 2012, 09:45:35 VORMITTAG
... Sehr schöne Schnitt und auch eine schöne Färbung ...

Jan, als ich das Färbeergebnis zum ersten Mal im Uhrgläschen gesehen hatte, musste ich an Deinen Dujardin-gefärbten Rubecca-Schnitt denken, dessen Mikrofoto Klaus Henkel auf der Webseite der Mikrobiologischen Vereinigung München zeigt. Wenn als dritte Farbe noch Chrysoidin hinzukommt, könnten wir von einer Variante der Dujardin-Färbung sprechen.

Zitat von: Hans-Jürgen Koch in Mai 02, 2012, 15:21:29 NACHMITTAGS
... an den Farbton der Zweifachfärbung mit Rhodamin B und Alcianblau muss ich mich gewöhnen. ...

Hans-Jürgen, da stimme ich Dir zu, ich muss mich auch daran gewöhnen und brauchte schon mehr als zwei Tage für den Entschluss, die Färbung zu zeigen.

Zitat von: Fahrenheit in Mai 02, 2012, 18:02:51 NACHMITTAGS
... Könntest Du vielleicht noch einige Bilder mit dem 40er zeigen? Die Leitbündel und die Epidermis mit den Stoma würden mich besonders interessieren.
Auch das "Entharzen" mit Rotihistol finde ich spannend. Hast Du es vor oder nach der Fixierung eingesetzt und wie lange ist die Einwirkdauer? ...

Jörg, den Schnitt gibt es nicht mehr und daran ist Eckard nicht ganz unschuldig. In einem Telefonat hatte er mich gedrängt, das 16x-Objektiv mit Glycerin zu immergieren, was ich dann auch zwei Tage später gemacht habe. Obwohl ich bisher mit der Trockenanwendung recht zufrieden war (n.A.(trocken)=0,35, n.A.(Öl)=0,5) ist das Ergebnis recht überzeugend. Nur ist der nachfolgende Reinigungsvorgang nicht zu unterschätzen. Das 16x-Objektiv benötigt doch erheblich mehr Immersionsflüssigkeit als zum Beispiel bei einem 100er-Objektiv. Und bei der Reinigung war ich einfach zu unvorsichtig, das Präparat ist verdorben. Es ist aber kein Problem neue Präparate zu machen, einige Nadeln von der Dillmulden-Pinus habe ich noch und dann bekommst Du die gewünschten Ausschnitte. Den gezeigten Schnitt habe ich übrigens nicht fixiert, denn ich wollte noch die Farbwirkung des Chlorophylls halten (Alkoholvermeidung). Die Einwirkzeit des Rotihistols betrug ca. eine Stunde. Ich könnte mir aber auch vorstellen, die Behandlung auf geschätzte 5 bis 10 Minuten zu verkürzen, wenn auf ca. 40° C erwärmt wird (Achtung: nur im Wasserbad erwärmen!).

Zitat von: Rawfoto in Mai 02, 2012, 22:43:05 NACHMITTAGS
...
Der Tipp mit dem Entharzen ist genial, besten Dank dafuer. ...

Gerd, wie ich Jörg schon antwortete, ist der frische unfixierte Schnitt direkt in Rotihistol überführt worden und nach der Behandlung in Wasser. Alkohol habe ich vermieden, um das Blattgrün zu halten, was ja auch für drei Tage bis zu meinem Reinigungsmissgeschick gut ging. Als Dauerpräparat sehe ich das aber nicht, denn mit der Zeit wird das Chlorophyll (vermutlich!) braun.

Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter

Rolf-Dieter Müller · Mai 06, 2012, 09:56:18 VORMITTAG

Liebe Forumsgemeinde,

zu diesem Beitrag schrieb mir Martin (beamish) und bat das Bild in Originalgröße zur Verfügung zu stellen, um damit ein T-Shirt als Geschenk für seine Tochter bedrucken zu lassen.

So einer netten Idee folgt man gerne und so habe ich ihm das Bild (jedoch ohne Beschriftung, das macht sich auf einem T-Shirt dann doch nicht so gut) zu gesandt. Er selbst hat das Bild dann nach seinen Vorstellungen für das Geschenk und Erfordernissen für den Stoffdruck nachbearbeitet.

Ich finde das Ergebnis einfach nur gut und sehr gelungen.

Und so bat ich Martin um Genehmigung das Bild des Pinus nigra-T-Shirt's in diesem Beitrag ergänzen zu dürfen, was ich hiermit nach seiner Zustimmung auch tue.

Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter

Mila · Mai 06, 2012, 10:44:16 VORMITTAG

Lieber Rolf-Dieter,

das ist ja stark, das T-Shirt sieht toll aus!

Herzliche Grüße
Mila

Tausendblatt · Mai 06, 2012, 15:46:39 NACHMITTAGS

Hej,

klasse T-Shirt! :-)
Wo macht man so was?

Es grüßt

Jens

Zitat von: Rolf-Dieter Müller in Mai 06, 2012, 09:56:18 VORMITTAG
Liebe Forumsgemeinde,

zu diesem Beitrag schrieb mir Martin (beamish) und bat das Bild in Originalgröße zur Verfügung zu stellen, um damit ein T-Shirt als Geschenk für seine Tochter bedrucken zu lassen.

Klaus Herrmann · Mai 06, 2012, 16:23:14 NACHMITTAGS

Hallo Jens,

ZitatWo macht man so was?

man lässt machen bei: Schlecker, DM, Photoplanet usw. Der erste ist zu bevorzugen, damit wir ihn nicht auch noch sanieren müssen!

beamish · Mai 06, 2012, 16:53:05 NACHMITTAGS

Ich habs online gemacht. Einfach "T-Shirt Druck" googlen. Da gibt es zahllose Anbieter. In meinem Fall war es wichtig, daß als Vorlage GIF-Bilder akzeptiert werden, da ich das Motiv vor transparentem Hintergrund freigestellt hatte.

Nochmals Dank an Rolf-Dieter für die großzügige Überlassung seines Fotos!

Grüße Martin

Tausendblatt · Mai 06, 2012, 17:45:19 NACHMITTAGS

Hallo Martin, hallo Klaus!

Danke für Eure Antworten, da werde ich mal weitersehen.
Das mit dem Alpha-Kanal wäre mir auch wichtig...
Auf einem weissem T-Shirt habe ich auch schon ein Mikromotiv -
nur sagte man mir damals auf Schwarz ginge es nicht/nicht gut.

Schönen Tag noch

Jens

Zitat von: beamish in Mai 06, 2012, 16:53:05 NACHMITTAGS
Ich habs online gemacht. Einfach "T-Shirt Druck" googlen. Da gibt es zahllose Anbieter. In meinem Fall war es wichtig, daß als Vorlage GIF-Bilder akzeptiert werden, da ich das Motiv vor transparentem Hintergrund freigestellt hatte.

Nochmals Dank an Rolf-Dieter für die großzügige Überlassung seines Fotos!

Grüße Martin