STORM (Technik der "Highresolution microscopy") an Zeiss lsm exciter 5

[CaDi]

Hallo,

ich würde gerne am Konfokalmikroskop an der Uni die "STORM"- Technik nutzen. Diese Technik wird wunderbar
in diesem Video vorgestellt:
http://www.youtube.com/watch?v=w2Qo__sppcI

Farbstoffe, die eine lange "off- Phase" haben, werden ständig mit einem Laser (optimal) oder vielleicht auch einer
anderen Quellen angeregt. Durch die lange off- Phase blinken die Farbstoffe als kleine Punkte ständig kurz auf.
Diese Informationen kann man mit einem Detektor, am besten einen empfindlichen CCD- Chip wie an einer
TEM- Kamera, aufnemen.
Durch diese Technik überblenden sich die Signale nicht, wie es der Fall bei konstant leuchtenden Farbstoffen wäre.
Die Auflösung bei optimaler Umsetzung liegt bei bis zu 20nm!

Die nötige Software kann man von der Ag der Frau Zhuang bekommen. Vielleicht kann man einfach eine DSLR an einen
Ausgang am LSM adaptieren?

Hat jemand Erfahrungen mit dieser Technik? Und evtl. auch dem Umbau?

Eine TEM- CCD- Kamera ist finanziell leider nicht drin, aber vielleicht eine DSLR ;-)

Viele Grüße,
Carsten

[wilfried48]

Hallo Carsten,

ich fürchte mit einer DSLR Kamera wird das auf keinen Fall gehen. Selbst eine gekühlte CCD TEM Kamera wird das nicht bringen, weil sie ja keinen Elektronenmultiplier beinhaltet, was man ja zum Nachweis einzelner Elektronen nicht braucht, da ein einzelnenes 100 KV Elektron ja viele Photonen generiert.
Für den Nachweis von einzelnen fluoreszierenden Molekülen in sehr kurzer Zeit (was ja die Superresolution Verfahren wie PALM oder STORM nutzen) braucht man aber Einzelphotonenempfindlichkeit bei sehr geringem Rauschen also eine EMCCD Kamera (cooled electron multiplying CCD)
siehe z.B. hier:
http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/superresolution/palm/introduction.html

Ich denke auch nicht das ein LSM5 eine geeignete Basis zum Umbau auf Superresolution ist.
Aber du kannst ja mal bei Zeiss anfragen, ob es überhaupt ginge und was es kostet. Wahrscheinlich werden sie dir den Kauf eines neuen ELYRA
Superresolution Mikroskops empfehlen

viele Grüsse
Wilfried