Mikro-Forum

Bibliothek => Mikro-Know-How => Thema gestartet von: Rawfoto in September 23, 2010, 18:42:30 NACHMITTAGS

Titel: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 23, 2010, 18:42:30 NACHMITTAGS
Liebe ForumskollegInnen

Koennt Ihr mir bitte Bildbeispiele zu dieser Technik zeigen, bzw. Eure Erfahrungen zu diesem Thema schreiben ...

Ich habe zwar eine wage Vorstellung, ob diese real ist???

Ich kanns auch noch nicht austesten da mir diese Lichtart im Auflicht fehlt ...

Unterschiedliche PHAKO-kondensoren fuer das OLY-bh-2 und ein Schmuckstuek (40er D-Plan APO UVPL oel) kann ich schon mein Eigen nennen :-)

Was ich jetzt suche sind Anregungen um zu entscheiden wie intensiv ich in diese Nische einsteigen soll und welche Prioritaet ich den weiteren Anschaffungen zuordne.

Danke fuer Rueckmeldungen, ich bin schon sehr gespannt :-)


Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Werner Jülich in September 24, 2010, 09:13:35 VORMITTAG
Auflichtfluoreszenz ist schon fast klasssicher Standard, da gibt es jede Menge Beispiele im Forum.
Wenn Sie einen speziellen Wunsch haben ( spezieller Filtertyp) dann schau ich mal, was wir haben oder tun können.
Werner Jülich
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 10:21:51 VORMITTAG
Lieber Herr Juelich

Ja, danke - genau diese Beispiele haben ja auch mein Interesse erweckt. Ich habe aber kein Bildbeispiel in Kombination mit PHAKO gefunden. Zu allem Überfluss gibt es da ja auch noch 4 unterschiedliche Möglichkeiten der Kombination mit PHAKO (Quelle Gerhard Göke, Moderne Methoden der Lichtmikroskopie). Mir schwebt die erste vor, dabei wird auflicht Flureszenz mit Durchlicht PHAKO kombiniert ...

Dazu finde ich weder Bildbeispiele noch Erfahrungsberichte, spannend währe natürlich auch der Vergleich der 4. Methoden ==> aber da müsste Weihachten & Sylvester zusammenfallen, wobei, möglicherweise hat sich ja gerade damit wer im Forum beschäftigt ...

:-)

Gerhard

PS: wenn ich weiß was ich will und in Folge dessen brauche komme ich gerne auf Ihr Angebot zurück.
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Klaus Herrmann in September 24, 2010, 15:11:29 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

wenn Du mit Dir damit im Reinen bist:

Zitatwenn ich weiß was ich will und in Folge dessen brauche komme ich gerne auf Ihr Angebot zurück.

Dann würde ich vielleicht auch noch was Fundiertes dazu sagen.

Aber im Moment hört sich das für mich so an: Kann mir mal jemand sagen, was ich wollen sollte?

Nix für ungut! :D
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 16:29:54 NACHMITTAGS
Hallo Klaus

Was ich will ist fuer mich im ersten Schritt schon bekannt, dazu muss ich im ersten Schritt nichts kaufen (damit meine ich Hardware und nicht Chemie). Ich habe Beispielbilder in Kombination mit Dunkelfeld und DIC gesehen, leider aber noch keine mit PHAKO. Die Betonung liegt dabei auf "Kombination" und ich habe bei der Antwort von Hrn. Juelich das gefuehl das dieses Wort untergegangen ist.

Was noch offen ist, aber in dieser Phase noch nicht von Bedeutung, ist meine Entscheidung LED oder Quecksilber Brenner und wenn es die zweite wird kann ich die Dienste von Hrn. Juelich gut brauchen. Unterschiedliche Leds hätte ich schon zu Hause ...

Was mich bei "nur Flureszenzauflicht" stoert sind die hohen Kontraste (z.b. Schwarz zu Rot/Gruen/...) und dieser ist mit der Mischung mit einer zweiten Beleuchtungsart steuerbar. Diese Ueberlegung wurde mit den Beispielen, welche ich gesehen habe bestätigt (DIC und Dunkelfeld). Die Kombination mit PHAKO habe ich noch nicht bewusst gesehen, bei den meisten Bildern steht ja auch nicht dabei wie sie gemacht werden ...

Daher meine Bitte um Beispielbilder und Erfahrungen!

Also kurzfristig will ich ein Gefuehl bekommen was in diesem Bereich geht, im zweiten Schritt eigene Versuche starten und möglicherweise die Ausruestung komplettieren (weitere Objektive, Lichtquelle, weitere Filter, ...).

Aus meiner Sicht ist also mein Ziel fix (fuer den ersten Schritt).

Ein entsprechender Dunkelfeldkondensor habe ich ueber dieses Forum gerade gekauft und der befindet sich im Versand, dort bin ich schon ein Stueck weiter ...

Ein Kollege aus der Mikroskopischen Gesellschaft wie ferfuegt ueber den entsprechenden flureszenzfreien DIK-Schieber, da sind Tests fuer mich also auch möglich ...

:- )

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Klaus Herrmann in September 24, 2010, 18:10:48 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

ich bin mir noch nicht sicher, ob Du bislang schon mal normale Feld-Wald-Wiesen-Fluoreszenz gemacht hast? Sprich entweder - einfach - im Durchlicht, oder - etwas aufwändiger - in Auflicht (die heute übliche Methode).

Damit würde ich einfach mal anfangen!

Die bei Göke beschriebenen Varianten (Kombination PH, DF, DIC, Pol sind sicher nette Spielereien. Aber wenn Dir der Kontrast zu hart ist (den man normalerweise beabsichtigt, weil man nur die fluoreszierende Struktur sehen will) dann kannst Du bei AL-Fluoreszenz ein wenig Hintergrund-Licht von unten geben, lässt sich auch durch Farbfilter beliebig "verschönern". Muss aber ein fein abgestimmte Poti sein, weil die Fluoreszenz ein lichtscheues Pflänzchen ist.

Und da jetzt PH, Pol; DF, DIC von unten zuzumischen ist ja kein Hexenwerk!

Wobei Pol ausschließlich im DL ist für den Polarisator nicht so zuträglich. Mit einer HBO ist der in Nullkommanix durchgeschossen.
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 20:05:24 NACHMITTAGS
Hallo Klaus

Nur in der Gruppe an einem der Themenabende und da nur im Auflicht. Wie das geht habe ich verstanden und zu diesem Thema habe ich schon viele Bildbeispiele gesehen. Aber Bildbeispiele mit zwei Lichtquellen haben mich angesprochen, leider kennt ich aber keine Bildbeispiele in Kombination mit PHAKO ...

Daher mein Wunsch nach Beispielbildern, ich kenne leider keinen der mir Beispiele zeigen kann!

Ich funktioniere anders wie die meisten Mikroskopiker, die wollen ihr Thema bestmöglich sehen. Ich bin Schritt fuer Schritt dabei kennen zu lernen was geht, zuerst Beispiele, dann selbst versuchen ... mein Schwerpunkt ist die Photografie, meine Objekte (noch) sehr breit gestreut ...

Also weiter auf der Suche nach Bildbeispielen ...

:-)

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Klaus Herrmann in September 24, 2010, 21:04:06 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

am nächten Donnerstag machen wir mit der TMG in Tübingen einen Fluoreszenzabend, wenns passt mach ich mal ein paar Bilder. Wenn nicht kann ich wenigstens begeistert berichten! ;)

Kannst ja vorbeikommen; Gäste werden nicht nur toleriert, sondern mit Freuden empfangen! :D

Ich hab hier übrigens mal Durchlicht DF-Fluoreszenzbilder gezeigt, ist schon etwas her. Das war eine Zecke. Ich finde aber mit der Suchfunktion nix hier im Forum - vielleicht schaffst Du es ja. Dann wäre zumindest die eine Frage schon mal abgehakt!

Edit: sag ich doch ich gebe "Zecke" ein und was kommt:

ZitatSie wollten vielleicht nach folgendem suchen Zeche.

Der fröhliche Zecher! ;D
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 21:33:38 NACHMITTAGS
Lieber Klaus

Danke fuer die Einladung, leider kann ich nicht einfach Mal nach Deutschland kommen (zumindest dieses Mal nicht) ... ueber Bilder wuerde ich mich natürlich freuen :-)

Wenn's da Mal ein Themenwochenende zu diesem geben wuerde, wenn's irgend möglich ist wuerde ich mich in den Zug setzen ...

Ich hoffe immer noch auf ForumskollegInnen die die von mir gesuchte Lichtmischung auf Lager haben ...

Schoenen Abend

:-)

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Klaus Herrmann in September 24, 2010, 22:01:06 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

damit Du schlafen kannst hab ich bei mir geforstet: das sind Durchlicht DF Fluoreszenzbilder: Weisse LED  P4 Seoul mit Kristallviolett-Filter von CZ als Anregungsfilter. Kardioid-DF-Kondensor immergiert Neofluar 16. Präparat vom Robin Wacker in W 3A gefärbt. Sperrfilter LP 520

Zecke ist ungefärbt. Bei der Zecke hab ich das Sperrfilter nicht vermerkt, kann aber nicht 520 sein, weil Blau durchgelassen wird.

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/47817_22609179.jpg)

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/47817_54561114.jpg)
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Nomarski in September 24, 2010, 22:42:58 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

ZitatDaher mein Wunsch nach Beispielbildern, ich kenne leider keinen der mir Beispiele zeigen kann!

Ich hatte vor einiger Zeit mal damit rumgespielt, den Phasenkontrast mit Fluoreszenz zu überlagern.
Mit der entsprechenden Einrichtung geht das sogar stufenlos:
http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=4433.0
Ich hatte das auch mal hier gezeigt, wie du entnehmen kannst, sind dabei nur komische Fragen aufgekommen, deswegen wurde das auch nicht weiter vertieft.

Viele Grüße
Bernd
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 22:58:58 NACHMITTAGS
Danke Klaus

Ja, tolle Aufnahmen, wenn ich die Zecke sehe stelle ich mir vor wie sie mit zwei Lichtquellen aussieht. Dabei sehe ich einen farbigen Hintergrund vor. Der entsteht durch Filterung des Lichts, welches durch DF-Durchlichtbeleuchtung. Um die Regelung/Anpassung der Helligkeit durchführen zu koennen muss man dann aber Auflicht fuer die Fluoreszenz einsetzen oder auch die zweite Lichtart von unter einspiegeln ...

Wie wuerden sich die Farben der Zecke durch das Auflicht veraendern, gleiche Filterung vorausgesetzt. Ich tippe auf die gleichen Farben (bedingt durch den Einsatz der gleichen Filterung), aber mit welchem Fluorochrom wurde die Zecke behandelt?

Uebrigens, schlafen kann ich sicher gut, habe noch ein paar Mikrokosmos neben mir liegen und liebe es vor dem Einschlafen noch darin zu lesen ...

Auch Dir und natürlich Euch allen eine gute Nacht

:-)

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 24, 2010, 23:15:22 NACHMITTAGS
Danke Bernd

Da gewinnt Heute der iPad gegen den Mikrokosmos :-)

Was ich nicht herauslesen kann, ist das die von mir angestrebte
Mischung von Auflicht und Durchlicht oder kommen beide als Durchlicht ...

Spannend ist die Leuchtkraft ohne Einwirkung von Chemie beim gezeigten Objekt, das hätte ich nicht erwartet.

:-)

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Nomarski in September 24, 2010, 23:31:44 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

ZitatWas ich nicht herauslesen kann, ist das die von mir angestrebte
Mischung von Auflicht und Durchlicht oder kommen beide als Durchlicht ...
Es kommt beides im Durchlicht, zum einen das kurzwellige Licht für die Fluoreszenz und zum anderen das Weißlicht für den Phasenkontrast. Über einen teilddurchlässigen Spiegel und einem Lichtregler bestehend aus zwei Polarisatoren wird das zusammengemischt. Die Phasenblende ist allerdings nicht schwarzer Lack auf Glas aufgetragen, sondern eine Polarisationsfolie.

Viele Grüße
Bernd.

P.S.: Die passage aus dem Göke dazu habe ich auch schon durch, leider wird dabei nicht auf Anwendungsbeispiele eingegangen. So mußt du dir selber was suchen, was mit Phasenkontrast geht und außerdem noch fluoresziert.
Im Tümpel gibt es jedefalls einiges:
http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=4456.0
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Klaus Herrmann in September 25, 2010, 00:18:36 VORMITTAG
Hallo Gerhard,

wenn ich mir schon die Mühe mache.... dann musst Du Dir auch die Mühe machen, das was ich schreibe, aufmerksam zu lesen! ::)

Zitataber mit welchem Fluorochrom wurde die Zecke behandelt?
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 25, 2010, 02:40:56 VORMITTAG
O.k. Klaus

Jetzt wird die Nacht doch noch schlaflos :-) Nun, es ist eBay schuld, 2 Stunden habe ich ja schon geschlafen. Aber immerhin - Zuschlag :-)

Sorry, am Lesen lags nicht, mir hat nur die Faerbung nichts gesagt. Es hat mir also mein Verstaendnis einen Streich gespielt ...

So, jetzt geht's wieder weiter ans Schlafen & der "goeke" liegt unterm Polster. Ich hoffe das hilft ...

:-)

Gerhard
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 25, 2010, 06:47:37 VORMITTAG
Danke Bernd

Da gibt es also doch auch zur Mischung von Lichtarten in diesem Zusammenhang schon Artikel. Den habe ich bei meiner Suche gar nicht gefunden ...

Übrigens, ein sehr gelungener Vergleich, finde ich topp :-)

Schönen Tag

:-)

Gerhard

Ps: wenn jetzt noch jemand in Zusammenhang mit PHAKO hätte ... Naja mein Interesse zu diesem Thema (mischen von Lichtarten) ist stark im Steigen :-))
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 25, 2010, 13:26:55 NACHMITTAGS
http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=1684.0 habe ich von Ole gemault bekommen, danke :-)

Es gibt also in diesem Forum drei Bildbeispiele zur gewünschten Mischung, einfach unglaublich :-)

Allerdings nicht leicht zu finden, aus diesem Grund habe ich zwecks Doku den Link aufgenommen.

Gibt nich weitere Beispiele? Ich vermute, dass bei diesen Beispielen auch beide Lichtarten von unten kommem, ist das richtig??

:-)

Gerhard

Ps: das unglaubliche, den Artkel ueber die Killerstrahlen habe ich seinerzeit sogar gelesen, aber natürlich unter einem anderen Gesichtspunkt ...
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Nomarski in September 26, 2010, 18:54:43 NACHMITTAGS
Hallo Gerhard,

extra für dich ein weiteres Beispiel zum Vergleich:

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/47957_42639572.jpg)
Phasenkontrast

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/47957_3392026.jpg)
Fluoreszenz

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/47957_4855356.jpg)
Überlagerung von Phasenkontrast mit Fluoreszenz

Viele Grüße
Bernd
Titel: Re: Auflicht UV und Durchlicht PHAKO
Beitrag von: Rawfoto in September 26, 2010, 19:59:23 NACHMITTAGS
Besten Dank Bernd,

Das geht schon absolut in die Richtung meiner Vorstellung, also ich finde die "Mischvariante" deutlich besser. So wie es bei uns mit dem Wetter aussieht kommen ja bald die langen Winterabende vor dem Mikroskop ...

:-)

Gerhard