Liebe KollegInnen
Nach einem Wochenende mit der Mikroskopie bin ich, wie koennte es denn anders sein, an meine Grenzen gestossen.
Ich habe versucht Astchen der Weissen Mistel im Paraffinblock zu schneiden. Dazu habe ich wie immer ueber ISO ins Paraffie uebergefuehrt und dem ganzen 14 Tage Zeit gegeben. Dann habe ich in einen Buchenblock ein Loch mit dem Holzbohrer gebohrt, den Block mit einem Tesatape umwickelt und das Paraffin hineingegossen. So wurde ein sehr gut bearbeitbares Bloeckchen draus ...
Die Paraffinschicht ist also weicher wie das zu schneidende Objekt!!!
Am Jung HN-40 mit einem B-Messer bin ich damit voll gescheitert! Der Messerhalter am Schlitten ist zu leicht, ich konnte keine konstante Bewegungsgeschwindigkeit erreichen, beim Auftreffen auf die harte Schicht ist es zu Stauchungen gekommen!
Dann bin ich auf das Leitz Grundschlittenmikrotom umgestiegen und habe ein A-Messer eingesetzt, besser, aber immer noch nicht gut. Nach Spielerei mit den Messerwinkeln hatte ich optimale Schnitte im Paraffin, die Schnittbaender laufen wie im Lehrbuch gerade das Messer hinauf ==> die A-Messer sind total verkannt ...
Ich habe aber immer noch feine Risse im Gewebe der weissen Mistel, also ab in den Gefrierschrank damit! Eine Stunde spaeter ging es dann weiter, immer noch optimale Schnittbaender, ich musste aber noch langsamer schneiden. Dieses Vorgehen brachte wieder eine Verbesserung, die Quote der vorausgewaehlten Schnitte (mit 100x) ist jetzt zwar bei ueber 30%. Das ist aber immer noch deutlich schlechter wie bei Schnitten wo das objekt der Begirde gleich hart oder weicher wie das Paraffin ist ...
Welche Erfahrungen habt Ihr dabei?!? Gibt es Tipps ...
Mir geht es dabei um das Erlernen der Technik, natuerlich habe ich Weisse Mistel auch schon uneingebettet geschnitten. Die ist aber bei mir noch nicht gut unter 0,030mm gelungen, mit Parrafin bin ich jetzt auf 0,020 und das Ziel liegt bei 0,012 bis 0,015mm fuer UV-Anregung. ==> ich bin also noch nicht am Ziel ...
Dass ich PEG durch Mischung auf unterschiedliche Haerte einstellen kann ist mir bekannt, ich muss mir aber erst etwas ueber 2000 besorgen. Da ich Paraffin aber in der Zwischenzeit lieben gelernt habe wuerde ich eine derartige Loesung vorziehen ...
Bin schon auf Eure Rueckmeldungen gespannt, liebe Gruesse
:-)
Gerhard
Lieber Gerhard,
ich habe die Weiße Mistel einmal uneingebettet mit 10 µm geschnitten. Das ging recht gut und wie ich es gemacht habe ist hier beschrieben: http://www.mikroskopie.de/mikforum/read.php?2,40506,40506#msg-40506
Bei den Schnitten bin ich von Stückfixierung ausgegangen. Nicht fixierte Stücke müssten sich so um die 20 µm bis 25 µm schneiden lassen.
Wenn Du bei Paraffin bleiben möchtest hilft eigentlich nur Block kühlen (wie ich es verstanden habe, hast du das aber schon gemacht) oder die Stücke mit AGE-Fixierung weicher einstellen.
Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter
Hallo Rolf-Dieter
Danke, jetzt habe ich die Idee wie ich weiterteste, ich werde vor der Ueberfuehrung in ISO zur Einbettung die Stuecken in einer Wasser/Glyzerinloesung weich kochen. Ein Teil kommt dann in einen Buchenblock und der andere ins Paraffin. Schade das das Wochenende schon wieder um ist ...
Auf das Weichkochen vor dem Einbetten habe ich noch gar nicht gedacht ...
Fuer AGE brauche ich neues Material, meine Teilchen sind alle durch AFE gegangen und ruhen in Strassburger Loesung ...
:-)
Gerhard