Hallo Forum,
zur Zeit verwende ich das Chemlab Safeline Kit FCA Färbung nach Etzold für botanische Präparate.
Obwohl ich genau nach der beigefügten Anleitung vorgehe habe ich nach ca. 5-8 Stunden im Ergebnis Blasenbildungen.
Zitat aus der Anleitung: " Den gefärbten Schnitt kurz auf saugfähigem Papier ablegen und dann auf den Objektträger geben, Deckglas auflegen, vorsichtig andrücken, das Einschlussmittel soll die ganze Fläche unter dem Deckglas ausfüllen."
Die ersten Stunden kann man das Präparat störungsfrei klar und ohne Beeinträchtigung ansehen. Dann bilden sich kleine Blasen und Erhebungen die das Dauerpräparat in Teilen unscharf und wertlos machen.
Gibt es eine vernünftige Alternative?
Gruß
Joachim
Hallo Jochen
ZitatGibt es eine vernünftige Alternative?
ich kenne das Inkludal nicht aber ich habe gute Erfahrungen mit Euparal gemacht. Mit Entellan habe ich schlechte Erfahrungen, mit Malinol gute.
Aber Euparal hat den Vorteil, dass man nur Isopropanol benötigt zum Entwässern.
Hallo Joachim,
zeig doch mal ein Foto von den Blasen.
Kommen die vom Rand her? hast Du das Includal verdünnt?
Grüße
Timm
Hallo Klaus, hallo Timm,
hat etwas gedauert. Zwei Bilder!
Includal nicht verdünnt. Ist praktisch bei allen meinen Präparaten. Mülltonne. Nur sofortige Beobachtung möglich.
Ich tropfe ausreichen auf. Drücke ich etwas fester an bilden sich gleich Bläschen. Man sieht nach ein paar Stunden aber schon, dass sich das Includal irgendwie zusammenzieht bzw. verfestigt.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures003/97280_1106534.jpg) (http://www.imgbox.de/)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures003/97280_45367897.jpg) (http://www.imgbox.de/)
Würde halt schon gern Dauerpräparate herstellen.
Klaus, wenn Du einverstanden bist schicke ich Dir eine Liste mit den Agenzien und Farblösungen, die ich ohne große Überlegung so als Grundvorrat zugelegt habe. Das meiste habe ich noch gar nicht gebraucht.
Dann wäre ich beim Schwerpunkt Pflanzen dankbar für eine Beurteilung was fehlt oder besser ausgewechselt wird.
Gruß Joachim
Hallo Joachim,
das erinnert mich an meine Versuche mit PVP (Polyvinylpyrrolidon) ein wasservedünnbares Polymer. Da hatte ich nach Wechsel der Type von K 60 auf K 90 das selbe Fiasko. Alles zum Wegschmeißen!
Ist das Inkludal wasserverdünnbar? So wie ich die Vorschrift verstehe trocknest du den wasserfeuchten gefärbten Schnitt auf saugfähigem Papier?
Und das ohne den Schnitt nach der Färbeprozedur mit Wasser auszuwaschen?
Wenn das auch ein wasserverdünnbares Harz ist dann könnte der Polymerisationsgrad nicht stimmen so wie bei dem PVP, das bei mir die schlechten Ergebnisse gebracht hat.
Bei Euparal wir dir das nicht passieren!
Für deine Liste hab ich mir schon die Brille abgesetzt ;) (ich bin kurzsichtig!)
Hallo Klaus,
richtig. Trocknen nur kurz auf dem saugfähigen Papier ( Kosmetiktuch). Mit Löschpapier war das Ergebnis nicht besser. Auf der Flasche steht nicht ob es verdünnt werden kann. In der Anleitung steht auch nichts.
Das 5-teilige Kit besteht aus Spüllösung 1, Spüllösung 2, Fixiermittel, Färbelösung und Einschlussmittel.
Nach der Anleitung erfolgt im Schritt 5 die Fixierung und das Ausspülender Farbe mit der Spüllösung 2 in einem Zug.
Der Schritt Fixiermittel wird nicht ausdrücklich genannt.
Versuche, nach Schritt 5 logischerweise das Fixierbad zu verwenden, brachten aber auch keine anderen Ergebnisse.
Habe Dir eine PN zukommen lassen (wollen?). Habe aber keine Erfolgskontrolle ob das ausgeführt wurde.
Schicke es nochmals an Deine eMail Adresse.
Gruß
Joachim
Hallo Joachim,
hört sich an wie eine Beschreibung aus dem Zauberkasten: ein paar kleine Geheimnisse behalten wir für uns ;D
Die "Fixierung" ist mir ein Rätsel - nach der Färbung?
Das bedeutet man benötigt nach der Färbung eine Speziallösung?
Bei allen Färbevorschriften, die ich kenne wird am Schluss mit Wasser gespült bis keine Farbe mehr abgeht; danach wenn erforderlich differenziert und über Ethanol/Isopropanol entwässert; dann in Euparal eingedeckt oder im Falle der Xylol-löslichen Eindeckharze kommt nach dem Isopropanol noch Xylol oder Rothihistol, wenn man Xylol unbedingt vermeiden will.
Aber fixiert - wird höchstens das Deckglas durch Beschweren mit einem Gewicht.
Wenn wir uns demnächst mal treffen zeige ich dir den Ablauf ohne Zaubermittel. Den Deckglasheber kenne ich nicht, habe ich noch nie bei irgendwem gesehen und halte ihn für entbehrlich. Nicht entbehrlich dagegen ist 100%iges Isopropanol! 70%iges habe ich noch nie gebraucht.
Hallo Joachim,
Includal A ist mit Wasser verdünnbar.
Könnte es sein, dass es wegen rel. hoher Viskosität den Schnitt einfach nicht
befriedigend durchdringt und später dann Luft aus dem Schnitt nach oben sickert?
Wie genau trägst Du das Includal auf? Gibst Du Includal A unter den Schnitt, oder
obendrauf, oder beides?
Probiere doch mal, es ein klein wenig zu verdünnen?
Grüße
Timm
Hallo,
laut Romeis, Rezept 812, handelt es sich um ein Einschlussmittel auf der Basis von Gummi arabicum und Rohrzucker, also wasserlöslich. Nach dieser Beschreibung ist es wohl für pflanzliche Schnitte nicht unbedingt geeignet.
Der Präparationsweg, wie ihn Bernd Heim vorgiebt, liegt mir momantan nicht vor. Man könnte ihn aber fragen.
Ich persönlich bevorzuge für Pflanzenschnitte in jedem Fall die nicht wässrige Einbettung in einem Kunstharz. Leider gibt es die nicht mehr im freien Handel, auch nicht das gelobte Euparal. Allerdings das Inkludal CB, das aber leider bei Thorns nicht aufgeführt wird. Das müsste man bei Dr. Heim direkt bestellen. Ich hoffe, er liest mit und wird antworten.
Herzliche Grüße
Detlef
Nachtrag:
die aktuelle WWW-Adresse von Dr. Bernd Heim: http://www.chemlab-mikroskopie.de. Allerdings sehe ich gerade, dass Includal CB (synthetisches Kanadabalsam in Buthylactetat) nicht aufgeführt ist. Er führt es aber - fragen!
Detlef
Liebe Mikroskopiker,
wie schon in einem vorherigen Beitrag erwähnt ist INCLUDAL A wasserverdünnbar. Eine nachträgliche Blasenbildung tritt dann auf, wenn das Einschlussmittel nicht genügend Zeit hatte in das Präparat einzudringen. Das tritt häufig dann auf wenn die Schnitte zu dick sind. Die Viskosität von INCLUDAL A kann durch Zugabe weniger Tropfen destillierten Wassers verringert werden, somit ist die Eindringzeit kürzer, allerdings verlängert sich dann auch die Abtrocknungszeit. INCLUDAL CB ist die nicht wasserlösliche Alternative, zum Einschluss erfolgt die Entwässerung über Isopropanol. INCLUDAL CB ist lieferbar, ich habe es allerdings versäumt in die Homepage aufzunehmen, danke für den Hinweis. Die Frage zur Fixierung verstehe ich nicht. Vielleicht ist hier ein Missverständnis. Das FCA Färbekit besteht aus folgenden Lösungen: Fixierlösung für Schnitte, Spüllösung 1, Färbelösung FCA, Spüllösung 2 und dem Einschlussmittel und der Arbeitsanleitung, diese ist wie folgt:
ARBEITSANLEITUNG
FCA Färbung und FSA Färbung nach ETZOLD für botanische Präparate
Schritt 1
Die Färbebecher mit ca. 5 ml Spüllösung 1, ca. 1 ml FCA Färbelösung und ca. 5 ml Spüllösung 2 füllen.
Schritt 2
Von dem Präparat möglichst dünne Schnitte abschneiden und diese in die Spüllösung 1 für ca. 3 – 4 Minuten geben.
Schritt 3
Mit beiliegenden Holzstäbchen die Schnitte entnehmen und in die FCA Färbelösung geben und für ca. 5 – 8 Minuten belassen.
Schritt 4
Auf einen Objektträger 1 Tropfen INCLUDAL A geben.
Schritt 5
Die Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben. Es erfolgt die Fixierung und das Ausspülen überschüssigen Farbstoffes. Verweilzeit ca. 3 – 4 Minuten.
Schritt 6
Den gefärbten Schnitt kurz auf saugfähigem Papier ablegen und dann auf den vorbereiteten Objektträger geben, Deckglas auflegen, vorsichtig andrücken, das Einschlussmittel soll die ganze Fläche unter dem Deckglas ausfüllen.
Das Präparat kann nun unter dem Mikroskop bestimmt werden. Nach ca. 5 – 6 Stunden ist das Einschlussmittel gehärtet, der Objektträger kann nun senkrecht gelagert werden.
Bestimmung
Unverholzte Zellwände sind blau gefärbt, cutinisierte Zellwände rot.
Grüsse Bernd Heim
Hallo Herr Heim,
ZitatDie Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben. Es erfolgt die Fixierung und das Ausspülen überschüssigen Farbstoffes. Verweilzeit ca. 3 – 4 Minuten.
Also die Verwunderung auf meiner Seite ist schon berechtigt: in allen Vorschriften wird entweder das Frischmaterial fixiert oder direkt nach dem Schnitt des Frischmaterials, aber
nie nach der Färbung. So verstehe ich die Vorschrift.
Aber die Etzoldfärbung muss nicht fixiert werde!
Hallo Herr Herrmann,
danke für den Hinweis. Die Anleitung ist da missverständlich, ist mir nicht aufgefallen. Sie haben natürlich recht, die Reihenfolge ist: Fixierung des frischen Schnittes, spülen, färben, spülen und dann einschliessen. werde die Anleitung diesbezüglich überarbeiten.
Grüsse Bernd Heim
Hallo Herr Heim,
danke für Ihre Hinweise. Durchaus kann es sein, dass ich hier Fehler mache.
Die identische Anleitung ist ja dem Färbekit beigelegt. Aber wann kommt das beigefügte Fixiermittel zum Einsatz?
Ich habe das so verstanden:
Schritt 5: Die Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben.
Dann erfolgt die Fixierung und das Ausspülen................, dazu nehme ich doch dann das Fixiermittel?
Liegt da der Fehler?
Empfehlen Sie die Verdünnung?
Bezüglich Schnittdicke werde ich noch einige Versuche durchführen.
Gruß
Joachim
Hallo miteinander,
mein letzter Beitrag ist bereits überholt. Entschuldigung!
Joachim
Nachtrag
Hallo Timm,
bin Dir noch eine Antwort schuldig. Bisher habe ich den Schnitt in das Includal gelegt.
Includal - Schnitt - Deckglas
Werde mal beides ausprobieren.
Gruß
Joachim
Hallo Joachim,
ZitatDurchaus kann es sein, dass ich hier Fehler mache.
scheint aber wahrscheilich, dass der Fehler nicht bei dir lag! ;)
# Herr Heim: wir helfen gerne! Aber zu weiterer Hilfe fehlt mir die Lüftung des Rätsels: was sind denn das für geheimnisvolle Spüllösungen. Wenn ich spüle, dann mit Wasser, und eigentlich immer mit Bodenseewasser aus dem Wasserhahn. Das ist preiswert und in ausreichender Menge vorhanden.
Und die Etzoldfärbung verlangt nicht nach mehr - also was steckt dahinter - vielleicht könnte man das Kit ja vereinfachen?
Wenn ihr Eindeckharz PVP ist, dann liegt das Problem eventuell am zu hohen Polymersiationsgrad.
Hallo Klaus,
das hat mir jetzt keine Ruhe gelassen. Habe jetzt von einem Geraniumspross mehrere Schnitte gefertigt.
Mit dem SHK-Klingenhalter nebst Leica Klinge müssten die auch dünn genung sein. ;D ;D ;D
Nun in der Reihenfolge Fixiermittel , Spüllösung 1, Färbung, Spüllösung2, Includal.
Wie seither nach dem Eindecken jetzt nach ca. 30 Minuten noch alles noch bestens klar ;D.
Mal sehen, wie es in ein paar Stunden aussieht.
Ich mache nachher noch von ein Bild von dem frischen Material. Wenn sich dann etwas ändert werde ich es hier zeigen.
Viel falsch kann man da ja normalerweise nicht machen.
Gruß
Joachim
Hallo Klaus,
hier das Bild. Mit den wenigen Blasen kann ich "noch" leben. Das kommt wohl wenn und wie ich das Deckglas auflege. Deckglas mit Pinzette leicht schräg ablegen.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures003/97380_39178406.jpg) (http://www.imgbox.de/)
Gruß
Joachim
Hallo Joachim,
das sind Luftblasen, die fast immer bei solchen wässrigen Eindeckmitteln zu sehen sind.
Der Trick Luftblasen zu vertreiben ist Alkohol auf das Objekt zu tropfen und dann noch feucht vom Alkohol das Eindeckharz auftropfen.
So macht man es zwangsläufig beim Euparal.
Ich weiß nicht, ob das Gummiarabikumgemisch alkoholverträglich ist. Dann wäre das eine Lösung, sonst wirst du immer mit Luftblasen kämpfen.
Lieber Joachim und Klaus
Das Problem ist das er die Schnitt trocknet.
Ich habe vom Dr Krautergelernt man darf die Schnitte nie austrocjnen lassen sonst ist sie kaput oder dort entwickeln sich viele luftblasen im Präparat
Herzlichen Gruss
Jan
Hallo Klaus,
diesen Versuch werde ich durchführen. Danke.
Nur zu meinem Verständnis, die Luftblasen kommen aus dem Präparat. Wie entstehen sie dann in dem Bereich, wo kein Präparat ist. Dort sind sie besonders groß.
Von den 10 Proben sind 1-2 brauchbar. Diese beiden Schnitte habe ich in einen Tropfen Includal gegeben und dann noch ein- bis zwei Tropfen darüber.
Definitiv funktioniert es nicht nach der Beschreibung. Bei nur einem Tropfen verdichtet? oder zieht sich das Includal beim Trocknen so wie im Bild zusammen oder es entsteht halt der Blasenbrei.
Außerdem verstehe ich nicht, weshalb das erst nach 2-3 Stunden geschieht.
Bin aber nicht abgeneigt einen Fehler bei der Durchführung zu suchen.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures003/97397_25105139.jpg) (http://www.imgbox.de/)
Nachsicht bei der Bildqualität. Meine Auflicht/Durchlicht Ausrüstung ist nur zur Schnittauswahl gedacht.
# Hallo Jan, guter Einwand. Danke. Werde das ebenfalls berücksichtigen.
Gruß
Joachim
Hallo Joachim,
eventuell ist es so, dass die Viskosität zu hoch war, deshalb wurde mit Wasser verdünnt. Und dann ist die Konzentration zu gering, was zur Folge hat, dass der " Schrumpf" sehr groß wird.
Ein Dilemma bei dem Material.
Hallo Klaus, hallo Jan,
also der Hinweis von Euch war sehr gut. :-*
Zuerst den Schnitt, dann Alkohol , dann das Includal aufgetropft. Den Schnitt also nach dem Spülen mit Alkohol feucht gehalten.
Die sonst kritische Zeit ist schon überschritten und das Präparat sieht noch gut aus.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures003/97447_45711022.jpg) (http://www.imgbox.de/)
Gruß
Joachim
Hallo Joachim,
blasenfrei aber auch rot-frei oder ist das eine Färbung nur mit Astrablau?
Und du hast nach der Färbung nicht mit Wasser ausgewaschen, jetzt hast du das blaue Wunder erlebt! ;)
Aber du bist auf der richtigen Spur!
Hallo Klaus,
irgendwas geht immer schief. Nein, die Färbelösung verwendet, aber zu lang in Spüllösung 2 belassen.
Morgen suche ich mir geignete Pflanzen zusammen.
Hallo Joachim,
Zitatirgendwas geht immer schief. Nein, die Färbelösung verwendet, aber zu lang in Spüllösung 2 belassen.
Und was ist "Spüllösung 2"? Wie soll man denn vernünfttige Ergebnisse erzielen, wenn man keine Ahnung hat womit man da überhaupt agiert.
In jeder ordentlichen Versuchsbeschreibung steht drin womit man spült und womit man entwässert, man muss doch wissen was da passiert.
Vielleicht ist die "Spüllösung 2" schlicht weg nur verdünnter Brennspiritus, der zieht natürlich wie der Blitz das Rot raus.
# Herr Heim: ich denke, da müsste schon noch was mehr überarbeitet werden - so etwa in Richtung der in allen Büchern sorgfältig beschriebenen Methoden!
Hallo Klaus,
das ist die Frage. Aber ich war halt zu bequem und habe diese kompletten Angebote deswegen gekauft.
Künftig lasse ich mich von Dir beraten bevor ich einkaufe. 8)
Dann geht es mir besser und Du hast einen ausgefüllten Tag. ;D