Ein herzliches Hallo in die Runde!
Im Rahmen meiner Promotion beginne ich allmählich mich mit der Histologie des Hodenparenchyms der Maus zu beschäftigen. Insbesondere geht es mir darum bei Hoden-Schnittpräparaten innerhalb der Tubuli (Hodenkanälchen)-Querschnitte die verschiedenen Zelltypen unterscheiden zu können, mit dem Zweck die Zellzusammensetzung der Hoden zu quantifizieren.
Ich muss also möglichst exakt zwischen den verschiedenen Keimzellstadien (Spermatogonien, Spermatozyten, Spermatiden u. Spermatozoen) sowie den somatischen Zellen im Testis (v.a. Sertoli-Zellen u. Leydig-Zellen) differenzieren können.
Natürlich habe ich mir schon die hervorragenden Beiträge von Ronald Schulte und Dieter Stoffels zur Gemüte geführt und mir dabei insbesondere die Abbildungen von D. Stoffels angeschaut, auf welchen die unterschiedlichen Zellen zu erkennen sind. Dies sind Abb4. und Abb5. seines Beitrages:
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures004/133157_36095484.jpg) (http://www.bilderload.com)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures004/133157_60464509.jpg) (http://www.bilderload.com)
Im selben Beitrag findet man auch tatsächlich einige Hinweise, die einen beim Betrachten von Hoden-Schnitten helfen sollen, die verschiedenen Zelltypen voneinander abzugrenzen. Zusammengefasst hab ich folgende gefunden:
- Spermatogonien liegen der Lamina propria limitans direkt an
- Spermatozyten I = rundes Erscheinungsbild u. dunkel angefärbte, hoch kondensierte Chromatinstruktur
- Spermatozyten II = größer als Spermatozyten I, Chromatinstrukturen sind aber aufgelockerter
- frühen Spermatiden = kleiner als andere Keimzellen, kugelrunder Zellkern
- reifende Spermatiden = spindelförmig, intensive blauschwarze Färbung
- Sertoli-Zellen:
- schlanker, basaler Anteil (Fuß) sitzt Lamina propria limitans unmittelbar auf
- transparenter, nahezu runder Zellkern u. evtl. kleine Vesikel basal
- setzen sich nach apikal pyramidal/tulpenförmig bis zum Lumen fort
- im apikalen Bereich evtl. große Vesikel zu beobachten
- Verteilung d. Keimzellen durch spiraligen Versatz gekennzeichnet (gleiche Höhe v. reifenden Spermatiden u. Spermatozyten I u. II)
Natürlich kann ich mit diesen Kriterien schon eine ganze Menge anfangen, aber gerade die Unterscheidung zw. Sertoli-Zellen und Spermatogonien finde ich noch äußerst knifflig, auch wenn der Unterschied, v.a. in obigen Abbildungen sehr gut zum Tragen kommt. Diese sind auch einfach mal spitze in der Qualität und damit der Auflösung von feinsten Strukturen. Meine ersten Bilder lassen da noch sehr zu wünschen übrig und machen einem die Sache entsprechend schwerer, wie ich finde. Hier mal ein Beispiel, wo ich mich an die Zell-Bestimmung gewagt habe:
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures004/133157_22594334.jpg) (http://www.bilderload.com)
Ich weiß, es ist sehr schlecht aufgelöst. Ist mir irgendwie beim Beschriften in Power Point passiert. Aber ich hoffe, für die erste Betrachtung hier im Forum reichts aus.
Es wär echt super, wenn sich jemand finden würde, der anhand dieses Bildes eine erste Einschätzung vornehmen kann, ob man bei meinem Schnitt grundsätzlich genügend Zelltypen unterscheiden kann und gar auch meine erste Beurteilung schon in die richtige Richtung geht? Dazu hab ich gezielt auich die Fragen: Wie sieht es mit den Spermatogonien und Sertoli-Zellen aus? Ist eine transparente Struktur am basalen Rand des Tubulus ein sicheres Indiz für einen Zellkern einer Sertoli-Zelle? Muss immer ein deutlich dunkles Kernkörperchen (Nukleolus) erkennbar sein und der Zellkern generell amorph geformt sein, um sicher von einer Sertoli-Zelle sprechen zu können? Kann ich wiederum ein Spermatogonium daran erkennen, dass es einen kugelrunden, komplett blau angefärbten Zellkern hat, ohne dass man einen Nukleolus offensichtlich ausmachen kann? Gibt es bei mir im Schnitt eigentlich Spermatozyten 1. Ordnung (primäre Spermatozyten) und auch Spermatozoen? Wie kann ich Spermatozoen von reifenden Spermatiden unterscheiden? Geht das überhaupt mit meiner Aufnahme?
Ich wäre äußerst dankbar, wenn mir da jemand mit zytologischer Erfahrung unter die Arme greifen kann. Vielleicht ja fürs erste Max? ;)
Ist es sonst auch möglich mit Dieter Stoffels in Kontakt zu treten? Weiß da jemand, wie ich ihn erreichen kann, denn er scheint ja ausgewiesener Experte im Bereich der Hoden-Histologie zu sein, wie man gemäß seines Beitrages schlussfolgern kann, und kann hoffentlich bestimmt dazu was sagen. :-) Wär mir ne mega Hilfe, aber auch natürlich von anderen, die dazu was beisteuern können!
Des Weiteren sind mir auch die Dapi-Färbungen von Ronald in seinem Beitrag "HISTOLOGIE: Hoden der Maus, Spermatogonese und Fluoreszenz" nicht entgangen. :-) Beim Betrachten der Bilder, kam es mir und meinem Betreuer so vor, als ob sich in der Dapi-gefärbten Form die Zelltypen noch besser, einfacher und damit eindeutiger differenzieren lassen? Hat da jemand ne Meinung zu, ob das tatsächlich mit den Bildern, gerade in der Qualität von Rolands, noch besser klappt? Kann auch diesbezüglich, jemand sagen, ob ganz bestimmte Eigenschaften der Kerne nach der Dapi-Färbung zum Tragen kommen, die man besonders ausmachen und unterscheiden kann?
Auch bei solch einem Tubulus-Dapi-Bild war ich mal so frei nach meinem Kenntnisstand zu beschriften. Auch hierbei hoffe ich, dass jemand sein Urteil dazu abgeben kann? Zytologen an die Front! :-)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/133157_65354168.jpg) (http://www.bilderload.com)
Gerade bei den Spermatogonien (Sg) war ich mich hier sehr unsicher und habe immer den leisen Verdacht, dass es sich dabei auch eher um Spermatozyten 1. Ordnung (SzI) handeln könnte?! Wie ist da die Meinung? Und wie siehts mit den Spermatiden aus? Sind tatsächlich so viele frühe Spermatiden (fSt; runde Spermatiden) im Schnitt, so wie ich sie bestimmt hab oder sind das ganz andere Zellen, wie z.B Spermatozyten 1. Ordnung (primäre Spermatozyten, SzI)? Gehören vllt die ganz kleinen runden, etwas dunkleren Zellkerne eher zu den frühen Spermatiden? Tja, sind leider sehr viele Fragen. :-( Ich hoffe, ich finde einen, der dazu was sagen kann und vor allem auch die Muße dazu hat: :-)
Ich danke schon mal allen, die sich überhaupt die Mühe machen, meine umfangreiche, sicherlich nicht leicht zu beantwortende Anfrage zu lesen und erst recht denjenigen, die mir tolle Antworten auf meine reichlichen Fragen liefern können! Und dabei ist jede Antwort für mich toll! ;D
Grüße, Alex
Alex,
Dann erstmal herzlich willkommen ins Forum!
Die fragen sind aber wirklich nicht alle einfach zu beantworten.
ZitatIch muss also möglichst exakt zwischen den verschiedenen Keimzellstadien differenzieren können.
Meine Theorie kommt aus Histologische Bücher und Artikel. Da lese ich immer wie Zellen Histologisch aussehen und so werden aussagen gemacht. Kann aber durchaus sein das z.B. mit Immunhistochemische Bearbeitungen eine bestimmte Proteine angefärbt werden kann so das sicher ist welche Zelle es ist. Dafür aber kenne ich mich nicht aus und muss mehr in die Zytologie gesucht werden denke ich.
Zitatwie man Bilder in die Forenbeiträge hochladen kann
Das ist sehr einfach. Das Bild muss irgendwo hochgeladen werden (also nicht in dieses Forum) und mit die Bildlink taste kann einfach ein Link nach die Stelle gemacht werden wo das Bild gespeichert ist.
ZitatDapi-Färbungen........, dass man die Zelltypen noch besser differenzieren kann?
Ist auch für mich nicht gut zu beantworten. Diesen Schnitt war in Kunststoff aber habe zufällig letzte Woche was mit Dapi in Bouin Fixiertes Gewebe gemacht und das Funktioniert auf jeden Fall Prima. Gut ist das Dapi nicht so schnell ausbleicht so hat Mann auch zeit um die Zellen gut an zu schauen vor das die Farbstoff ausbleicht.
Du hast also nicht so viele antworten bekommen aber vielleicht kann ein Zytologe nochmal was hier zu schreiben!
Grusse Ronald
Willkommen im Forum!
Wenn du Bilder von Zellen hast die differenziert werden sollen kann ich dir da helfen ich habe lange Zytologie gehabt.
Da muss ich dir recht geben Ronald, DAPI hält sich sehr lange.
Ich friere meine Schnitte die ich mit DAPI gefärbt habe immer ein, dadurch halten sie sich Jahre lang.
Ich habe ein DAPI gefärbtes Präparat von einem Schnitt durch ein Auge der Ziege (fixiert in Müller´scher-Lösung, eingebettet in Paraplast plus xtra und als Intermedium Methylbenzoat (statt Xylol, Methylbenzoat bringt bei weitem bessere Ergebnisse).
Den Schnitt habe ich 2010 gefärbt und es sieht im Floureszenzmirksokop noch aus wie erst heute gefärbt.
Ich taue die Schnitte dazu auf und mikroskopiere sie normal.
Viel Spass noch im Forum!
Ganz vielen Dank erstmal an Roland und Max für die erste Beantwortung meiner Anfrage! :-)
Ich hab mich noch mal hingesetzt und das ganze stark und umfangreich überarbeitet und mit den entsprechenden Bildern "aufgehübscht" und habe dabei auch gleich meinen jetzigen Kenntnissstand in Form einer versuchten Bestimmung einfließen lassen.
Dabei hoffe ich insbesondere, dass mir alle im Bereich des Hodens zytologisch bzw. histologisch erfahrenen Leute unter die Arme greifen können. Auch über eine erste Einschätzung von Max wäre ich sehr dankbar! :-)
Natürlich bin ich bisher mit meinen Bestimmungsfragen und der evtl. besseren Eignung von Dapi für die differenzierende Beurteilung noch nicht allzu weit gekommen. Deshalb hoffe ich, dass sich hier noch ganz viele einklinken und was beisteuern können!
Gruß, Alex
Hey Alex,
weisst du auf welche Kriterien du beim Differenzieren der Zellen achten musst?
Diese sind vor allem:
-Zellgröße
-Zellform
-Chromatindichte
-Chromatinstruktur
-Nukleolen
-Kernform
-Plasmaeinschlüsse (Vakuolen und anderes)
-perinukleäre Aufhellungen
-basophilie am Plasmasaum
-Plasmaausläufer
und noch mehr.
Für DAPI lassen sich dabei natürlich nicht alle Kriterien berücksichtigen da man ja nur die DNA floureszieren sieht.