Hallo Forumsmitglieder,
neulich fertigte ich mal wieder ein Präparat einer Fichtennadel an. Die Schnitte blich ich zuerst in Chlor, dann wurden sie mit FCA kalt gefärbt und in mit Aqua dest. verdünnten Includal A eingebettet.Der Freihandschnitt wurde manuell durchs Okular fotografiert. Hier also die Bilder:
200x
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures001/12021_46431654.jpg)
200x mit Blitz
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures001/12021_24649639.jpg)
400x, verschiedene Eindrücke aus dem Leitbündel
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures001/12021_4002278.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures001/12021_29875673.jpg)
Kommen wir nun zu meinem eigentlichen anliegen: Ist das Präparat überfärbt? Besonders im ersten Bild scheint dies so.
Vielen Dank für eure Hilfe!
Grüße, Sebastian
Beitragsinhalt auf Wunsch des Autors gelöscht
Hallo Christian, hallo Mike,
mh, das sehe ich etwas anders. Beim Etzold FCA muss - im Gegensatz zum alten Etzold FSA - nicht mehr differenziert werden.
Eine Überfärbung mit Fuchsin würde sich m.E. darin äußern, dass eigentlich blaue Regionen lila gefärbt wirken. Das ist hier nicht der Fall.
Der Schnitt ist - typisch für einen Freihandschnitt - mehrere Zelllagen dick und erscheint daher im Vergleich zu z.B. dünneren Mikrotomschnitten zu kräftig gefärbt. Dies im Hintergrund, würde ich bei Christians Schnitt nicht von einer Überfärbung sprechen.
Mir fällt allerdings auf, dass er an zwei Stellen eingerissen und leicht verschoben ist. Auch ist links noch ein Fizelchen abgespaltener Epidermis unter dem Harzkanal zu sehen.
Christian, wenn Du Deine Schnitte mit der Lupe oder unter dem 4er Objektiv prüfst, kannst Du solche Kandidaten frühzeitig aussortieren.
Schöne Grüße
Jörg
Hallo,
ich hatte den Schnitt bereits in Ethanol (90%) ausgespült. Dennoch (Mike sei dank) vermute ich in diesem Schritt den Fehler: der Alkohol ist sehr alt.
Vermutlich ist er für dieses Vorhaben nicht mehr stark genug konzentriert. Ich werde es mit diesem Lösungsansatz versuchen.
Das FCA ohne Nachspülung verwendet werden kann,erscheint mir äußerst fremd (nach meinem Informationsstand).
Dennoch vielen Dank für eure Hilfe!
Gutes Gelingen wünscht Sebastian
Hallo Sebastian,
ohne 'Nachspülen' ist etwas schwammig formuliert.
Nach dem Färben mit Etzold FCA solltest Du den Schnitt in Wasser (Aqua dest.) spülen, um überflüssige Farbe abzuschwemmen.
Auch musst Du den Schnitt vor der Überführung in ein Einbettungsmittel in das dazu passende Lösungsmittel bringen.
Das ist bei Euparal Isopropanol (100%), bei Entellan z.B. Xylol (auch dieses rein) oder bei wasserlöslichen Eindeckmitteln eben Wasser - ein Schritt gespart.
Was Du bei Etzold FCA nicht musst, ist mit Ethanol 70% differenzieren.
Die anderen beiden Arbeitsschritte sind nach wie vor notwendig.
Wenn Du ein Freund von Kurzanleitung bist, wirst Du bei den Berlinern fündig (siehe Link-Sektion des Forums).
Wenn Du lieber Text mit genaueren Erläuterungen und Tipps magst, schau doch mal hier (http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=1278.0).
Schöne Grüße
Jörg