Hallo Mikrofreunde,
ich habe heute einen Tropfen " Olivenöl " mit Durchlicht - Dunkelfeld - Fluoreszenz , Violett-Anregung und Halogen-Beleuchtung 12 V 100 W untersucht.
Das Olivenöl zeigt eine interessante Primärfluoreszenz ! Nachstehend zeige ich 3 Bilder davon.
Viel Vergnügen beim Anschauen.
Mit herzliche Mikrogrüßen
Jürgen aus Hemer
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192299_58389659.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192299_10288998.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192299_60351743.jpg)
Hallo Jürgen,
das würde ich aber als Dunkelfeld interpretieren und nicht als Fluoreszenz.
Hallo Jürgen,
ich schließe mich zu 100% meinem Vorredner an, das ist nie Fluoreszenz. Sind schöne Bilder, aber Dunkelfeld in Blau ! Wieso leuchten nur die Ränder ? Wenn Olivenöl eine Primärfluoreszenz hätte, dann sollten auch Ölflächen leuchten. Oder wo liegt mein Denkfehler?
Schöne Ostern
Peter
Hallo,
naja, es ist "Durchlicht - Dunkelfeld - Fluoreszenz" wie er selbst geschrieben hat. Wenn Dunkelfeld heller Ränder erzeugt, warum nicht auch bei der Kombination von Fluoreszenz mit Dunkelfeld ?
Viele Grüße,
Johannes
Liebe Fluoreszenzler,
ich will kein Spielverderber sein, aber wenn ich lese Halogenleuchte und Violettanregung, so muß ich sofort an die Strahlungsleistung denken. Es wird also der verschwindend kleine Anteil unterhalb von 400nm genutzt.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192316_64190774.jpg)
Wie leicht können dann Störungen und Falschlicht bei unzureichendem Sperrfilter eine falsche Deutung entstehen lassen.
Kritische Gedanken am Ostersonntag.
Peter
Hallo,
jetzt ist der Zeitpunkt für die Frage der Belichtungsdauer.
Viele Grüße,
Johannes
Zitatjetzt ist der Zeitpunkt für die Frage der Belichtungsdauer.
Und nochmal die Frage: wieso fluoresziert dann das Öl nicht? Es leuchten DF-typisch die Ränder sonst nix! Ich bin aber gerne bereit mal Olivenöl bei verschidedenen Anregungswellenlängen anzuschauen!
Hallo Klaus,
jetzt habe ich es verstanden.
Viele Grüße,
Johannes
ZitatHallo Klaus,
jetzt habe ich es verstanden.
Damit sind wir schon zu dritt lieber Johannes! :D
Ist nicht das, was im Olivenöl fluoreszieren kann das Chlorophyll? Und müßten dann diese Ränder nicht rot sein, falls es fluoresziert?
Herzlich
Martin
ZitatIst nicht das, was im Olivenöl fluoreszieren kann das Chlorophyll? Und müßten dann diese Ränder nicht rot sein, falls es fluoresziert?
Ich habe gerade mal geoogelt nach Olivenöl Fluoreszenz:
http://link.springer.com/article/10.1007%2FBF01413886#page-1
Native Öle fluoreszieren gelb bis grün, rectifizierte zeigen blaue Fluoreszenz. Werd ich doch glatt mal überprüfen!
Hallo Mikrofreunde,
vielen Dank für euer Interesse an meinem Beitrag und die Anmerkungen dazu.
Leider kann ich erst jetzt darauf antworten, da von gestern Abend bis heute Nachmittag mein Zugang zum Mikroskopie-Forum wegen einer Warnung
blockiert war.
Ich habe einen Tropfen Olivenöl auf den Objektträger aufgebracht und mit einem Deckglas abgedeckt. Dann habe ich mit meiner Filterkombination
für Violett-Anregung mit Durchlicht-Dunkelfeld-Fluoreszenz mikroskopiert, wie in meinem Beitrag beschrieben. Diese Kombination hatte ich mit
Peters Negativtest geprüft und sie war von Peter als brauchbar gemessen worden. Siehe folgender Link:
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=25613.0
Anregungsfilter: BG 3/3 + BG 38/4 • Sperrfilter: K 490 ≈ GG 495/2
Die dabei mit vollen 12 V ≈ 3400 K, ISO 1600 und 1 s Belichtungszeit fotografierten Bilder mit den leuchtenden Rändern habe ich als Primärfluoreszenz
des Öls interpretiert.
Da jetzt von Klaus und Peter Zweifel an der Fluoreszenz geäußert wurden, habe ich das gestrige Präparat vorhin mit Dunkelfeld ohne Filter untersucht.
Die Bilder zeigen wirklich die gleichen Strukturen, zwar bei ISO 1600, 1/25 s, nicht so schön blau gefärbt wie bei DL-DF-FLUO, aber daraus ist ersichtlich,
dass es sich wirklich eindeutig nur um ein mit Fluoreszenzfiltern schön gefärbtes Dunkelfeld handelt und nicht um Primärfluoreszenz.
Zum Vergleich stelle ich noch nachstehend zwei vorhin fotografierte und wenig bearbeitete Dunkelfeldbilder ein.
Nochmals vielen Dank für die kritische Betrachtung des Beitrags, die zur Klärung meiner Fehleinschätzung geführt hat.
Mit herzlichen Mikrogrüßen
Jürgen aus Hemer
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192344_31473901.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192344_7039434.jpg)
Hallo Klaus,
für eventuelle Überprüfungen gebe ich hier noch die Daten des von mir verwendeten bei Aldi gekauften Olivenöls ein:
GUT BIO Olivenöl nativ extra • Erste Güteklasse • Natives Olivenöl aus extra-Mischung von Olivenölen aus Spanien, Griechenland und Italien • Aus ökologischer Landwirtschaft • KONTROLLIERT ÖKOLOGISCHE ERZEUGUNG •
je 100 ml : 3389 kj / 824 kcal.
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Mikrofreunde,
ich habe nochmals über die blauen Linien bei der Fluoreszenz nachgedacht. Wahrscheinlich ist die Blaufärbung, wie Peter schon angedeutet hat, durch die Durchlässigkeit des Sperrfilters K490 entstanden.
Es ist daher sicherer zur Vermeidung von Fehleinschätzungen den Sperrfilter OG 515/2 mm bei der Violett-Anregung zu verwenden !
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen -
es gibt noch ein Indiz aus eigener praktischer Erfahrung: Eine blaue Fluoreszenz ist mit den benutzten breitbandigen Filtern höchstens bei Verwendung einer Lichtquelle mit schmalen Banden im UV-Bereich (z.B. die Hg-Banden 365 bzw. 403 nm einer HBO-Lampe) klar zu demonstrieren. Diese lassen sich auch noch mit einem breitbandigen Erregerfilter separieren, obwohl der kontinuierliche Anteil der HBO-Lampe im Blaubereich immer noch bei etwa 5% des Bandenmaximums liegt.
Bei einer Anregung mit kontinuierlicher Lichtquelle wäre für die Violettanregung bei 435 nm auf jeden Fall ein sehr schmalbandiges Interferenzfilter notwendig.
Allerdings schließe ich bei Deiner Versuchsanordnung eine blaue Fluoreszenz trotzdem nicht aus, nur dass sie eben damit nicht von der Dunkelfeldbeleuchtung zu trennen ist.
Viele Grüße
Rolf
Hallo Rolf,
vielen Dank für deine informativen Anmerkungen. Ich werde den Dingen mal mit meiner Xenon-Hochdrucklampe 150 W für Durchlicht und Auflicht nachgehen, da ich keine HBO-Lampe mehr habe. Vielleicht lässt sich auch damit
eine bessere Trennung erreichen.
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen -
vom Spektrum her bringt die XBO-Lampe hier wenig, weil sie im sichtbaren Bereich ein relativ kontinuierliches Spektrum hat. Allerdings bei 460 nm sogar ein leichtes Maximum, also gerade im für Dich kritischen Bereich, wo sich Erreger- und Sperrfilter überschneiden.
Viele Grüße
Rolf
Hallo Rolf,
vielen Dank für deinen Hinweis.
Ich habe mir die spektrale Strahlungsverteilung meiner XBO-Lampe daraufhin nochmals angesehen, Du hast recht, bis auf die nicht brauchbare Spitze bei 460 nm, ist die Verteilung sehr gleichmäßig.
Untersuchungen mit der XBO-Lampe werden daher außer der höheren Strahlungsleistung gegenüber der Halogen-Glühlampe wahrscheinlich nicht viel bringen.
Viele Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Mikrofreunde,
im Internet habe ich zur Fluoreszenz von Speiseölen folgenden interessanten Fachartikel (1983) gefunden.
Siehe Link: http://link.springer.com/article/10.1007%2FBF01202914#page-2
Hier werden Anregungswellenlängen und Emissionswellenlängen angegeben. Dabei wird in einen nicht sichtbaren UV-Teil
und einen sichtbaren VIS-Teil unterschieden. Die angehängte Tabelle 1 enthält eine Übersicht.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192453_44202356.jpg)
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen,
nun wollte ich es einmal mit einem Zeiss Filtersatz 09 für Auflicht an Rapsöl testen. Mit viel gutem Willen erkenne ich auch eine sehr geringe Fluoreszenz im gelb/grün Bereich.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192469_17344969.jpg)
Rapsöl unter einem Deckglas, Objektiv Zeiss Neofluar 6,3/0,2 , Zeiss Filtersatz 09 , blaue LED @ 455nm , Canon 450D bei 1600ISO 1sec. Kamerafaktor 1,67x
Eine Anregung mit der UV-LED @365nm und entsprechendem Sperrfilter 410nm zeigt auch nicht viel mehr.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192469_42326129.jpg)
Bei Durchlicht Dunkelfeld Fluoreszenz bin ich mit Aussagen sehr vorsichtig.
Zur sicheren Sperrung mußte ich bei Blauanregung @455nm ein OG515 nehmen. Es leuchten dann nur die Ränder durch Streulicht auf. Im Öl absolut keine Fluoreszenz nachzuweisen.
Gruß
Peter
Ergänzung:
Mit reinem Olivenöl ist nur bei zu geringer Sperrfilterwirkung im Durchlicht der Übergang Luft-Öl erkennbar.
In Auflichtfluoreszenz absolut, ob 455nm oder 365nm Anregung keine Anzeichen.
Hallo Peter,
vielen Dank für deine Bemühungen die Primärfluoreszenz von Speiseölen auf verschiedenen Wegen nachzuweisen.
Ich habe den Fachartikel " Charakterisierung von Speiseölen mit Hilfe der Fluoreszenztopographie " durchgearbeitet.
Wir werden mit unseren mikroskopischen Möglichkeiten die in der Tabelle 1 angegebenen Daten nicht nachvollziehen können.
• Zur Aufnahme der Topogramme wurden die Öle im Bereich der Anwendungswellen mit 1 : 20 in n-Hexan auf eine optische Dichte ≤ o.2 verdünnt.
• Die Fluoreszenzspektren wurden mit einem Aminco SPF 500 Spektralfluorimeter aufgenommen, das mit einer 250 Watt-Xenonlampe ausgerüstet war.
• Die dreidimensionalen Darstellungen ( Anregungswellenlänge - Emissionswellenlänge - Intensität ) wurden mit Hilfe eines modifizierten Programms
von Kalcher, Computers & Chemestry 6, 39 ( 1982 ) gezeichnet.
Die Sache ist nicht so leicht zu lösen wie bei der Primärfluoreszenz von Vogelfedern.
Da mich das Problem jedoch reizt, habe ich mir nachstehendes Untersuchungsprogramm ( Workflow ) überlegt und werde damit
in der nächsten Zeit versuchen, den Speiseölen die Primärfluoreszenz zu entlocken. Über Erfolg oder Misserfolg werde ich dann berichten.
Achtung ! Der Workflow ist verbessert und ergänzt bei den späteren Antworten zu finden .
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen,
bitte nur als kleine Anregung verstehen !
Bei der Violettanregung befürchte ich dass zwischen dem BG3 und dem Sperrfilter ein zu kleiner Abstand ist und es zu Fehlinterpretationen kommt.
Weit besser wäre von Baader das U-Filter, oder wenigstens von Schott ein UG 11 3mm oder mehr. Kostet zwar etwas, aber dann wird es sauber.
Viele Grüße
Peter
Hallo Peter,
vielen Dank für die schnelle und kritisch konstruktive Durchsicht meines Workflows.
Der BG 3/3 mm öffnet nach dem Schott Filterrechner genau bei 260 - 490 nm.
Damit liegt er dicht bei dem Sperrfilter LP 515.
Da hast Du recht, das kann knapp werden und zu Störungen führen !
Ich werde es probieren, da der BG 3/3 nicht so viel Licht schluckt.
Wenn es Probleme gibt, kann ich ohne Neuanschaffung den Schott Filter UG1/2 mm
einsetzen, der öffnet bei 290 - 410 nm mit T 64 %.
Der Baader U hat fast die gleiche Charakteristik, er öffnet bei 300 - 400 nm mit T 78 %.
Nochmals vielen Dank und beste Grüße
Jürgen aus Hemer
Lieber Jürgen,
ich hab's mal mit Olivenöl aus Feinkost Aldi (Griechisches Natives Olivenöl Extra Lyttos) probiert.
Ein Tropfen unverdünnt unter Deckglas, UV 365 nm LED-Anregung und Zeiss-Filtersatz 02. Gibt eine schöne rote Chlorophyll-Fluoreszenz.
Hier das Spektrum im Mikrospektralfotometer:
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192533_11828705.jpg) (http://s767.photobucket.com/user/vonGneisenau/media/c4fe830c-01ce-4111-9131-e9a19f8690dc_zpsnkvfzsrn.png.html)
Der Chlorophyll-Peak liegt bei 672 nm. Deine Versuche müßten also funktionieren, zumindest das Chlorophyll kommt bei dem erwähnten Olivenöl gut. Im Blauen bei 440 nm erscheint noch ein schwaches, breites Signal.
Mit 470 nm Anregung und Filtersatz 09 konnte ich nichts sehen.
Viele Grüße
Horst
Hallo Horst,
da ich Olivenöl von einem sehr kleinen Privatbetrieb, direkt aus Italien habe, kann es durchaus sein, dass das ohne Fluoreszenz ist. Ich hoffe man entschuldigt, dass ich nun keine neue Flasche beim A..i kaufe.
Grüße
Peter
Lieber Horst,
schön, dass Du mir Mut machst, an die Sache heranzugehen.
Viele Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen,
Nachtrag:
das war Auflichtfluoreszenz mit dem 10x Plan-Neofluar 0,30. Mit Objektiven höherer Apertur ist also noch ein ordentlicher Intensitätsgewinn zu erwarten! Aber wie Peter schreibt, ist der Effekt vom Öl abhängig. Wenn man nichts sieht, ist wohl auch nichts drin...
Viele Grüße
Horst
Guten Morgen Peter und Horst,
auf Grund eurer Hinweise habe ich meinen Workflow korrigiert und ergänzt. Die überarbeitete Fassung zeige ich nachstehend.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/192598_43214430.jpg)
Vielen Dank und herzliche Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen,
in dem Zusammenhang möchte ich noch auf eine gute Seite mit gemessenen Farbfilter aus dem Astronomiebereich hinweisen.
http://www.astroamateur.de/filter/
Farbfilter aus dem Astrobereich sind oft zu kleinem Geld erhältlich.
Gruß
Peter
Hallo Peter,
ich habe mir eben mal die Filterkurven angesehen, da sind wirklich interessante Filter dabei !
Vielen Dank für den Hinweis.
Grüße
Jürgen aus Hemer
Hallo Jürgen,
wenn es richtig rot leuchten soll, dann nehme Kürbiskernöl ;) das leuchtet immer schön.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192611_50298184.jpg)
Nichia @365nm
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192611_48825797.jpg)
blaue LED m. Filter , bester Kontrast !
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures005/192611_49677241.jpg)
weiße LED m. Filter
Alle Aufnahmen mit Auflichtansatz , Objektiv SPlanApo 4/0,16 , Zeiss Filtersatz, bzw. UV-Eigenbau
Geht natürlich mit der Blauanregung sehr gut.
Bunte Grüße
Peter
Hallo Peter,
das ist ja schon eine schöne Primärfluoreszenz.
Ich habe gestern auch Kürbiskernöl gekauft und
werde es demnächst mit Auflicht und dem
Filterblock I2/3 = Zeiss 09 auch versuchen.
Beste Grüße
Jürgen aus Hemer