Heute mal ein Kurz Bericht.
Am Ultra Mikrotom habe ich vorige Woche ein Block angeschnitten die noch Interessant werden kann. Die ersten Schnitte zeigen sehr schöne Paneth-Körnerzellen. Das Granulat wird meist nicht so kräftig gefärbt aber dieses Block zeigt dass das doch möglich ist.
Es ist ein Schnitt aus den Zwölffingerdarm direkt unter den Magen. Fixiert habe ich es mit ein Gemisch von Formalin und Glutaraldehyde nach Karnofsky.
Färbung ist eine basische Toluidin Färbung. Geschnitten wurde mit Glasmesser am Reichert Ultracut Mikrotom. Schnittdicke ist 0,7µm. Bilder gemacht am Leitz Orthoplan mit Canon 700D und 63x n.a. 1.4 planapo.
Zitat Wiki:
Paneth-Zellen, auch als Paneth-Körnerzellen bezeichnet, sind merokrine Drüsenzellen, die apikal stark eosinophile Granula enthalten und im Epithel am Grund der Dünndarmkrypten, aber auch im Magen und im Mastdarm auftreten. Aufgabe der Paneth-Zellen ist die Sekretion von Lysozymen, Peptidasen, Laktoferrin und Defensinen. Sie sind somit u. a. für die lokale Immunabwehr verantwortlich. Benannt sind sie nach dem österreichischen Physiologen Joseph Paneth (1857–1890).
Am Rand Quer geschnittene Muskelzellen. Einige Mitose Figuren und eine Nervzelle.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222424_11653293.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222424_54636159.jpg)
Das Langs geschnittene Blutgefäß zeigt wunderbar das es besteht aus ein Schicht Zellen mit ein Schicht Endothel Zellen.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222424_42708074.jpg)
Eine Zotte mit nur ein Becherzelle. In diese Region hat der Maus nicht so viele Becherzellen.
Stitch von zwei Bilder.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222424_42815147.jpg)
Hier sind zwei Becherzellen zu beobachten mit Sekret.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222424_47633461.jpg)
Gruße Ronald
Schade,ich kann keine Bilder sehen.
Klaus,
Fremd, mein Server zeigt Normale response. Versuche mal F5 oder das Forum mal neu starten.
Grusse Ronald
Lieber Klaus, lieber Ronald,
also ich sehe die Bilder und die Bilderlinks sind auch unauffällig. klaus, es ist also vermutlich tatsächlich was auf Deiner Büchse.
Ronald, das ist wieder ein sehr schöner und interessanter Beitrag, den ich gerne gelesen habe. Schön, dass du vor lauter Steinen auch das Mausen nicht lässt. :)
Euch beiden herzliche Grüße
Jörg
Leider immer noch keine Bilder trotz Neustart
Hallo Klaus,
doch, die Bilder sind einwandfrei zu sehen. Auch mit verschiedenen Browsern bei mir unter Win 7. Muss also an Deinem Browser liegen.
Herzliche Grüße
Peter
Stimmt, liegt am Bowser, Firefox mag nicht, das alte Safari zeit die wunderschönen Bilder.
Klaus
Hallo,
auch ich habe Firefox - bei mir sehe ich diese - wie immer perfekten - Meisterpräparate!Dank an Ronald!
Viel Glück!
Heinrich
Hallo,
ich sehe diese wie immer perfekten Meisterpräparate ( :) ) ebenso mit firefox.
viele Grüße
Reinhard
Hallo Ronald,
Heute morgen habe ich die Bilder (mit Firefox) gesehen. Jetzt wollte ich mir die Bilder genauer anschauen. Jetzt allerdings "nudelt" die Verbindung. Als Meldung erhalte ich (am unteren Rand) mehrfach abwechslnd: " Warten auf ...Ronaldschulte@...", danach "verbunden mit ... Ronaldschulte@... dann bricht die Verbindung ab (keine Bilder). Offensichtlich liegt der Fehler an der Verbindung zu Deiner IN-Einstellung, nicht an Firefox.
Gruß Carlos
.
Ich habe jetzt die Bilder entfernt, anders benennt, wieder hochgeladen und neu verlinkt. Jetzt muss es in Ordnung sein. Bei mir schaue ich mit Chrome und Firefox ohne probleme. Mein Server gibt auch keine Fehlmeldungen.
Ronald
Hallo Ronald,
Jetzt sind die Bilder zu sehen.
Gruß Carlos
Hallo Ronald,
dein wunderschöner Beitrag kommt gerade richtig für mich. Die Zellen in deinem
Präparat sind sehr gut erhalten, und nicht nur die Paneth-Zellen. Du hast mit
Glutaraldehyd, der besonders gute Quervernetzungen macht, zusätzlich zum
Formalin fixiert (Karnofsky). Ist denn Glutaraldehyd immer notwendig um einen
so schönen Zellerhalt zu bekommen?
Ich habe am Wochenende dein Leberblöckchen (Technovit) auf 1,5µ geschnitten.
Die Leberzellen sind recht kaputt. Liegt das an der Fixierung?
Funktionieren auch Pikrinsäurehaltige Fixiermittel wie Bouin bei Semidünnschnitten?
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222481_687191.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222481_30923613.jpg)
viele Grüße nach Holland, Ralf
Ralf,
Mit Technovit kannst du nur zwei verschiedene Fixierungen nutzen (laut Kulzer nur Formalin): Formalin und Glutaraldehyde. Bouin Fixiertes Gewebe kann man ohne Probleme einbetten aber Färbt sich nachher sehr schlecht oder gar nicht. Nachfixieren mit Osmium Tetroxid geht auch nicht. Dazu brauchst du ein Epoxid wie z.B. Epon. Mache ich auch aber gibt bei mir wieder andere Probleme. Glutaraldehyde muss nicht, darf aber. Ich mache es oft weil es etwas besser fixiert wie nur Formalin 4%. Ich Fixiere oft mit Karnofsky aber dann nicht das Original Rezept weil das viel zu Hyperton ist (Wasser wird aus die Zelle gezogen und das Zytoplasma schrumpft Zuviel). Original ist 4% Formalin und 5% Glutaraldehyde. Ich nehme 2% Formalin und 2,5% Glutaraldehyde.
Die Leberzellen sind, denke ich, nicht kaputt. Sieht aber nicht immer so aus wie man gerne sehen möchte. Bei mir sehen die meiste Mausleber genauso aus. Eine PAS Reaktion, was bei Technovit prima geht, zeigt hier wahrscheinlich vieles an Glykogen. Genauso wie hier https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=19732.msg149883#msg149883
Mein erstes Block kam von Dieter Stoffels und da hat es genauso ausgesehen. So ist Maus eben denke ich.
In ,,A practical guide to the histology of the mouse" (ISBN 978-1-119-94120-0) sieht es auch ungefahr so aus.
Ich habe gerade ein FA/GA und Osmiertes Epon Leberblock aus Berlin bekommen und da sieht die Leber schon wieder ganz anders aus.
Gruße Ronald
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222507_25181126.jpg)
Ein vormaligen Forum Mitglied (Dieter Stoffels) hat diesen Beitrag mitgelesen und mir einige Bilder zugeschickt. Weil die hier passen bin ich der Meinung das ich die Publizieren darf (Dieter hat hier zugestimmt).
Zu sehen sind zwei Bilder von ein Maus Leber eingebettet in Technovit und gefärbt mit Toluidin blau. Das erste Bild hat eine 400x Vergrößerung und das zweite Bild hat 650x.
Die viele Luken können auch hier herausgelöste Fetten und Glykogen sein.
Im zweiten Bild ist rechts ein Gallen Kanälchen zu sehen und ganz rechts ein Blutgefäß mit Erythrozyten.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222530_42659827.jpg)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222530_40644060.jpg)
Gruße Ronald
Lieber Ronald,
eine tolle Darstellung der Paneth Körnerzellen und der Becherzellen, vielen Dank. Ich hatte schon befürchtet, dass Du Dich histologisch aus dem Forum verabschiedet hättest, um so mehr genieße ich Deinen Beitrag.
Was die Färbbarkeit von Technovitschnitten nach Bouinfixierung angeht, habe ich ein wenig andere Erfahrungen gemacht als Du. Die Färbung des Präparats von Dieter Stoffels ( bas. Fuchsin und Methylenblau) funktioniert auch nach alkoholischer Bouinfixierung, ebenso Toluidinblau. Hämatoxylin Ehrlich hingegen nicht, auch nicht Weigerts Hämatoxylin.
Was die Lücken in den Leberschnitten angeht: Das Technovit wird ja prinzipiell nicht aus dem Schnitt herausgelöst und nimmt die Farbe von Fuchsin auch da ein wenig an, wo kein histologisches Material ist. Es fällt mir daher bei den schönen Schnitten von Dieter Stoffels auf, dass die angesprochenen Lücken in der Regel völlig ungefärbt sind. Nur an einigen wenigen Stellen der Lücken befindet sich randständig eine schwache Fuchsinfärbung.
Es sieht für daher mich so aus als sei das Technovit hier nicht vollständig eingedrungen, was mich angesichts der Struktur der Leber nicht sehr wundert.
Schöne Grüße
Jürgen
Jürgen,
Eine Reaktion von Dieter:
Die Mausleber ist vollständig Kunstharz-infiltriert, dass gilt auch die die "Hohlräume", die als Stellvertreter für die herausextrahierten Lipide bzw. herausgelöste Glykogen verblieben sind. Wären die Hohlräume nicht gefüllt, wäre es nicht möglich, solche Kunststoffschnitte zu machen. Die scharfe Begrenzung der Hohlräume ist darauf zurückzuführen, dass es sich nicht um ein typisches Technovit, sondern um eine spezielle Abmischung handelt, bei der sich die Kunststoffmatrix in keinerlei Weise mitfärbt und der polymere Ansatz eine sehr hohe Eigentransparenz besitzt.
Es ist also kein reines Technovit 7100. Es ist ein Mischung.
Gruße Ronald
Hallo Ronald,
danke für die Hinweise.
Ich arbeite ja viel zytologisch, und da stellt man sich eine ,,schöne Zelle" eben rund bis oval mit einem schönen Zellkern in der Mitte vor. Ich denke das bei der Semidünntechnik die Zellen ja sehr dünn geschnitten werden und so herauslösbare Bestandteile eben Löcher verursachen.
Ich habe gerade einige alte Paraffinschnitte von Maus-Leber gefunden.
5µ Schnitt:
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222583_11404313.jpg)
3µ Schnitt
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222583_64923656.jpg)
Mann erkennt sehr schön geformte Leberzellen, obwohl man erahnen kann wie locker der Zusammenhalt im Zytoplasma ist.
Bei dem Präparat von Dieter (Danke an Dieter für das Bild) sieht man weniger ,,Löcher" als in der Toluidinblaufärbung. Ich denke es ist wohl mit Fuchsin nachgefärbt? Ein sehr schönes Präparat, da würde mich Fixierung und Färbung interessieren.
Ich habe das mit den Schnitten von deinem Leberblöckchen in Technovit auch mal auf die Schnelle probiert, 10 Min Hämalaun, 5 Min Fuchsin aus der TB-Färbung, stark verdünnt. Die Löcher kommen wie ich meine weniger stark zum Vorschein. Der Schnitt war auch 2,5µ.
Das war aber nur ein schneller Versuch ohne Anspruch auf Schönheit.
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures009/222583_44624228.jpg)
Kann man das Gewebe vor den Einschluss in Technovit nicht Osmieren?
Im Großen bin ich aber mit der Technik sehr zufrieden.
Viele Grüße auch an Dieter, Ralf
Ralf,
Osmieren geht bei Technovit nicht. Nur Formalin, Glutaraldehyde und was Jürgen sagt, Alkoholisches Bouin. Das letzte werde ich mich kommende Zeit mal vornehmen ob das Vorteile gibt.
Wenn du nachträglich Osmieren möchtest dann ist ein Epoxid (z.B. Epon) angesagt.
Das aber hat wieder andere problematische Sachen, so kannst du das nur mit Diamant oder Glas auf ein Ultramikrotom schneiden und das muss auf ein Wasserboot.
Hier klicken um das Video zu starten. (http://micro.ronaldschulte.nl/epon_long/Ultracut_E_epon_on_water_boat.mp4)
(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures007/219857_14347911.jpg)
Grüße Ronald