Hallo,
ich habe jetzt endlich, nach langem Suchen und viel investiertem Geld, ein Gramm Calcofluor White M2R auftreiben können. Ich hab eine Stammlösung hergestellt, aus 30 mg in 10 ml A dest., was auch gut funktionierte. Die gelben Kristalle haben sich gelblich in Wasser gelöst. Nach 4 Tagen jetzt hole ich die Lösung aus dem dunklen Schrank, und sie ist voll mit einem weißen, fluoreszierenden Niederschlag. Sie färbt noch, aber die Lösung an sich leuchtet jetzt unterm Mikroskop schon stark. Mikrobielle Verunreinigung ist nicht erkenbar. Hat jemand eine Idee was hier vor sich geht?
Grüße,
Micha
Hallo Micha,
was ist Calcofluor White M2R? Gibt es dazu ein Daten- oder Sicherheitsdatenblatt zur Zusammensetzung?
Wenn es das ist, was ich vermute, dann könnte es sich dabei um eine Zubereitung aus einem otischen Aufheller und Calciumcarbonat als Trägersubstanz handeln. Wir haben in der früheren Firma so einen Rohstoff kiloweise verwendet, der hieß UVITEX OB-C (früher CIBA, jetzt BASF), das war eigentlich ein opt. Aufheller zur Einarbeitung in Polymere. Das Calciumcarbonat soll die Dosierung so kleiner Mengen und die gleichmäßige Verteilung im Polymer erleichtern. Derselbe Wirkstoff ohne CaCO3 hieß UVITEX OB. Es gibt eine ganze Reihe solcher Fluoreszenzstoffe, die wasserlöslichen werden in Waschmitteln und z.B. in Lecksuchfluids verwendet und fast alle kommen heute aus China.
Ich bin mir nicht sicher, ob es sich dabei überhaupt um einen wasserlöslichen opt. Aufheller handelt. Die intensive hellblaue Fluoreszenz wurde optimal mit 366 nm angeregt.
Viele Grüße, Jochen
Hallo Micha,
ich habe eine CFW Stamm- Lösung vor 3 Wochen angesetzt und zunächst im Kühlschrank aufbewahrt. Nach 10 Tagen: kein Niederschlag. Weil ich sie nicht mehr benötigte, ließ ich die Lösung bei Raumtemperatur stehen --> voluminöser Niederschlag. Die Stammlösung war übrigens immer leicht trüb. Sie soll sich aber im Dunklen bei 4 Grad Celsius lange (1/2 Jahr) halten.
Vielleicht hilft das weiter?
Gruß
Klaus
Hallo Jochen,
Calcofluor white ist eine Reinsubstanz und der "heiße Scheiß" in der Detektion von Pilzzellwänden und teilweise auch Insektenteilen. Es gibt unendlich viele Bilder dazu hier im Forum und im Netz:
https://en.wikipedia.org/wiki/Calcofluor-white
Das Zeug ist sehr schwer zu bekommen und wird aktuell in USA persönlich für einen abgefüllt und dann über VWR oder Sigma zu horrenden Preisen ausgeliefert. Daher will ich vermeiden, dass ich da was falsch mache.
Ich habe die Lösung tatsächlich dunkel, aber nicht kalt gelagert! Ich werde nachher mal versuchen, ob ich es mit NaOH wieder in Lösung bekomme. Das mit der Kälte ist ein super Tipp! Hast Du auch probiert die Stammlösung zu aliquotieren und einzufrieren?
Grüße,
Micha
Hallo,
das Zeug ist tatsächlich wasserlöslich und international unter dem Namen Fluorescence Brightener 28 bekannt. Unter diesem Namen findet man mehr Informationen.
Wie bei Feinchemikalien üblich, kommt das heute alles aus China. Hat nicht irgendjemand hier Kontakte zur Papierindustrie, speziell weißes Druck- und Kopierpapier, da ist doch überall sowas drin?
https://www.chemicalbook.com/ChemicalProductProperty_EN_CB8486659.htm
https://www.chemsrc.com/en/SupplierProduct/4404-43-7_1137723.html
https://www.pylamdyes.com/products/optical-brighteners
Viele Grüße, Jochen
Hallo,
ich sehe, dass das Zeug auch unter dem Namen Fungi-Fluor Kit als 0.05% Lösung vertrieben wird. Dort steht auch, dass Kaliumhydroxid als "clearing agent" enthalten ist.
Viele Grüsse
Florian
Ja, dann ist es noch teurer. Das KOH ist aber nicht in der Lösung sondern normalerweise eine 10-20% Lösung mit der man Haut und Haare vorbehandelt um sie aufzulösen, so dass die Pilze sichtbar werden. Dauerhafter ontakt mit KOH zerstört CFW wohl.
Ich bezweifle, das CFW irgendwo noch kommerziell groß verwendet wird. Die üblichen Verdächtigen bieten eher Uvitex & Co. an. VWR bezieht es jedenfalls aus USA.
Hallo,
ich habe Calcoflour vor Jahren bei Hund als Mycoval gekauft,
ist bis heute haltbar und liefert gute Ergebnisse.
Wird auch bei Jülich beschrieben, verkauft???
https://www.juelich-bonn.com/site/microscopes/mykoval/
https://www.hund.de/de/instrumente/mikroskope/anwendungsgebiete/dermatologie.html
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=1871.0
Es gibt auch etwas hier:
https://www.magnacol.co.uk/starter-kits/FluorDyeStarterKitDeluxe.html
Habe es gekauft, auch den optischen Aufheller, aber noch nicht ausprobiert.
LG, Ralf
Hi Micha, it precipetates at pH <6 or so. So keep it slightly alkaline with a bit of bicarbonate or so. Most recipes for fungal use use it with KOH anyway. Solubility is low.
Haven't got my working recipes at hand, but I dilute it very much. Really, your gram of CWhite will last forever.
The stuff will keep quite well, even on the bench in a brown bottle. I do store my stocksolution (1 mg/ml) in the fridge and haven't seen it detoriating since 2005. Just to be sure that it doesn't verschimmelt, I have added a bit of formaldehyde (0.25%), even though I don't know whether that is really necessary.
Good luck, René
Hi Rene,
adding some preservative is a good idea. I think I'll freeze the aliquoted stock. Is it really the pH or do the sodium ions play a role? Typically, people recommend adding some NaOH. Would a low conc. of KOH do the same? I don't want a potassium salt falling out.
Best,
Mike
Hallo,
schön, dass es diesen Thread gibt. Wollte auch gerade einen starten, da ich das Zeugs suche. Für meinen Achromatium-Artikel habe ich bei Heribert Cypionka gelesen, dass er die Verpilzungsexperimente auch mit diesem Chalkofluor gemacht hat. Also muss das Zeugs her.
Ich habe vor vielen Jahren diesen Magnakol-Starterkit gekauft. Eine ziemliche Sauerei: die Farbstoffe kommen in kleinen Tüten. Und wer schon mal Fluoreszenz-Farbstoffe aus Tüten in kleine Glasflaschen umgefüllt hat.....
Da war eine Flasche "Optical Brigthener 25 ml" dabei. Habe ich nie benutzt, weil ich nicht wusste, was ist das und wofür kann man es verwenden. Leider steht hinter dem "Brigthener" kein weiteres Kürzel mehr. Ob das Zeugs Chalcofluor ist? Da werde ich wohl mal Pilze färben müssen.
Grüße
Carsten
EDIT : habe bei Magnacol eine Anfrage gestartet
Das kann alles mögliche sein. Früher war CFW wohl eine normale Substanz, die als Aufheller verwendet wurde und günstig war. Mein Eindruck ist, dass es heute im Prinzip eine Spezialchemikalie für die Mikroskopie ist Im Prinzip ist es aber egal was da drin ist. Die meisten optischen Aufheller funktionieren irgendwie. CFW hat nur den Vorteil, relativ hell zu leuchen, wenigstens prinzipiell verfügbar zu sein (enige hellere sind de facto gar nicht beschaffbar) und - man kann es wohl irgendwie auch blau statt UV anregen. Ging bei mir aber nicht! Evtl. geht das wirklich nur in Kombination mit Evans Blue.
Ich habe auch eine Flasche von diesem Hobbythek Aufheller, den werde ich auch mal testen. Den gibt's für einen Appel und ein Ei bei Ebay.
Grüße,
Micha
Hallo Micha,
Helligkeit wäre mir nicht so wichtig. Wichtig ist die Pilz-Spezifität.
Carsten
Spezifisch sind sie wohl alle, nehme ich an. Müssen ja an Zellulose haften. Du brauchst aber zwingend eine UV Anregung!
Ja, das ist mir bekannt, aber 365 nm werden da wohl langen. Carsten
Blue-green with a FITC cube also works well. Depends a bit on the autofluorescence of your subject.
René
Ja, 365 geht! Anbei das erste Bild. Zwei Tropfen verdünnter Natronlauge haben den Niederschlag entfernt. Die Autofluoreszenz der Lösung wird extrem schnell gebleicht, die Färbung aber nicht.
Das Hobbythek Prohell funktioniert ebenfalls. Es hat aber mehr Autofluoreszenz die auch zusammen mit der Färbung wegbleicht. CFW ist brillanter. Wenn man die Möglichkeit hat es zu spülen, dürfte es keinen Unterschied geben.
Moin,
was für Partikel hast du denn da gefärbt?
Carsten
Hallo,
einen ähnlichen wasserlöslichen Fluorescence Brightener 357 (CAS 41098-56-0) vertreibt u.a. https://www.moersch-photochemie.de; 50 g für 20.11 € und Axelcolor in Italien; axel@color.com 100 g für 17,50 € über einen ebay-shop.
Auch Tinopal LPW der BASF scheint ähnlich zu sein, Kleinmengen vertreibt BTC.europe.com
Vielleicht schicken die Muster an Firmen oder Hochschulen.
Viele Grüße, Jochen
Hallo zusammen,
Hund verkauft das Färbemittel in etwas anderer Rezeptur, gebrauchsfertig in 10 ml-Tropffläschchen. Wir bieten es insbesondere Dermatologen in Kombination mit unseren "Myko"-Geräten an. Ich habe mal eine Übersichtspräsentation über unsere Mikroskope erstellt, sie enthält auch Bildbeispiele: https://www.hund.de/images/pdf/Mikroskopprogramm_Hund_09_20.pdf (https://www.hund.de/images/pdf/Mikroskopprogramm_Hund_09_20.pdf).
Adventliche Grüße
Jörg
Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?
Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?
No I mean CWhite also fluoresces with blue-Anregung with an FITC Filterblock.
Best wishes, René
Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?
Guten Morgen,
Uvitex, Fungiqual und Mykoval sind von der eigentlichen Färbung her identisch, Mykoval ist allerdings ein speziell für Hund entwickeltes Färbemittel und enthält noch spezielle Penetrationsvermittler. Evans Blue ist also nicht enthalten. Das Hauptargument in der Diagnostik besteht darin, dass man keine Pilzkulturen anlegen muss, sondern schon im Nativpräparat Pilzelemente erkennen kann. Seite 53 der Präsentation zeigt zwei Beispiele: Links eine angefärbte Hautschuppe, rechts ein Ausschnitt aus einer Innenraumprobe (Tesafilm-Präparat). Das rechte Bild nehme ich immer wieder, weil es so aussieht, als ob sich zwei Knochenhände einen Ball zuspielen 8).
Man kann Mykoval (und auch die anderen Farbstoffe) aufgrund ihrer breiten Absorptionsspektren auch im Blauen anregen und die Grünfluoreszenz detektieren. Das wurde vor meiner Zeit von Hund im mittlerweile schon fast antiken "Fungiscope" umgesetzt. Da damals noch keine leistungsstarken LEDs verfügbar waren, war das Gerät um eine starke Halogen-Lichtquelle herum gebaut, die eben nur im Blauen ausreichend Intensität abgibt.
FITC wird in der Immunfluoreszenz eingesetzt. Der Schlüssel dazu sind Antikörper, die einerseits an die Zielobjekte ankoppeln, andererseits ein Farbstoffmolekül tragen. Als Farbstoff kommen etwa das erwähnte FITC (Blauanregung, Grünfluoreszenz) infrage, oder aber auch z. B. TRITC (Grünanregung, Rotfluoreszenz). Während aber Mykoval leicht anzuwenden ist, benötigt man für eine FITC-Färbung bereits eine spezielle Laborausstattung. Wir haben das einmal im Rahmen eines Projekts mit einem externen Labor anschauen können, sind aber dazu selbst nicht in der Lage - und haben daher leider auch keine Färbeprotokolle.
Vorweihnachtliche Grüße
Jörg
Hallo,
als Alternative zu Calcofluor White wird u.a. UVITEX 2 B verwendet, das auch unter anderen Bezeichnungen verwendet wird, man findet dazu mehrere Publikationen in "labmed". Es wurde sogar bei ebay schon angeboten, 2,5 g für 10 €.
Chemical Name Fluorescent Brightener 24 (Technical Grade)
Synonyms
4,4'-Bis[4-(3-sulfoanilino)-6-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-1,3,5-triazin-2-yl]aminostilbene-2,2'-disulfonic acid tetrasodium salt; Heliofor P Kayaphor BSN; Kayaphor SN; Mikephor BN; Mycoval; Ranipal 2B; Tinopal 2B; Tinopal 2BF; Uvitex 2B; Whitex BB; Whitex BB conc.
CAS Number 12224-02-1
Alternate CAS # 5131-70-4
Molecular Formula C₄₀H₄₀N₁₂Na₄O₁₆S₄
Molecular Weight 1165.04
Category Research Tools; Fluorescent Reagents; Materials;
Applications It is a fluorescent whitening agent, used in textile and paper industry.
References
Jafari, R., et al.: Textile Research Journal, Vol. 77, Iss.10, P: 456-763 (2007);
Jochen
Hallo,
z.B. hier
https://www.ebay.de/itm/254813191536
ich habe es mal gekauft, färbte aber schlechter als Mycoval.
Ich habe aber nicht lange daran "geforscht" weil ich damals keine Anwendung hatte.
Als Testobjekt eignet sich ein Mundschleimhautabstrich mit Backhefe vermengt,
ausstreichen, lufttrocknen, 2Min alkoholfixieren, färben, waschen (kurz), trocknen, eindecken.
vielleicht hat ja jemand mal Zeit die opt. Aufheller auszuprobieren.
LG Ralf
Hallo Ralf,
OK, das mache ich mal. Ich mache aber einen neuen Faden dafür auf, damit es jeder mitbekommt.
Carsten
Zitat von: Haus@Hund in Dezember 21, 2020, 09:34:37 VORMITTAG
Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?
FITC wird in der Immunfluoreszenz eingesetzt...
Danke für die ausführliche Beschreibung! Mir ist aufgefallen, dass CFW bei Awesenheit von KOH Pilze eher grünlich färbt als Blau. Hefe in Wasser leuchtet wunderschön blau, in den Hautpräparaten hingegen ist eine sehr starke Hintergrundfluoreszenz der Zellen bei Färbung mit CFW zu sehen, die ebenfalls rein blau ist. Pilzstrukturen leuchten dagegen apfelgrün. Leider fehlen mir momentan etwas die Positivkontrollen, da es immer nur Spuren irgendwelcher Pilze sind bzw. halt Saccharomyces.
Bezüglich FITC - zumindest für Fluorescein selbst gibt es eine Fluoro-Gramfärbung:
https://patents.google.com/patent/EP1029074B1/en