Hallo zusammen,
bisher hatte ich mit Fluoreszenzmikroskopie nichts zu tun, von ein paar Bildern mal abgesehen, die ich mit einer UV-Taschenlampe gemacht habe.
Das soll sich nun ändern, gestern habe ich von Stephan Hiller für den Fluoreszenz-Auflichtkondensor einen LED-Einsatz mit blauer LED (467 nm) bekommen und kann nun loslegen. Im Reflektorgehäuse nutze ich die Filter/Farbteiler 450-490/ FT 510/ LP520, was wohl dem Filter Set 09 entspricht. Für UV habe ich leider noch keine Filter.
Ein paar erste Versuche habe ich mangels anderer Präparate mit einem Stückchen Gelbflechte und einem Kresse-Blättchen schon gemacht. Geht! Siehe Bilder unten.
Aber nun habe ich ein paar Fragen, die sich speziell auf den Zeiss Fluoreszenz-Auflichtkondensor IV FL beziehen (siehe erstes Bild).
1. Generell fällt mir auf, dass es sehr viel Streulicht gibt. Nun ist das bei dem blauen Licht sicher kein Problem, aber bei UV hätte ich schon Sorgen, unabhängig von einer Schutzbrille. Das Lampenhaus (1.) schirme ich noch ab. Aber was ist mit dem Rest? Gibt es Käppchen oder Deckel, oder ist das halt so?
2. Dort sitzt die Blende. Aber daneben ist noch ein weiterer Schlitz. Was kommt da rein?
3. Große Öffnung. Wofür?
4. Schieber. Kann komplett den Lichtfluss unterbrechen. Die Möglichkeit macht Sinn. Der Schieber hat bei mir dann noch in einer Position eine Linse, in der anderen nichts. Die Linse dämpft das Licht etwas, hat aber sonst keinen, für mich erkennbaren, Einfluss. Welchem Zweck dienen beiden Öffnungen/Linsen?
5. Fenster. Wozu genau?
6. Schlitz für Schieber. Was soll oder kann da rein? Ein zusätzlicher Filter?
7. Ohne zusätzliche Maßnahmen gelangt das Licht bis zur Leuchtfeldblende (und weiter?) und wird von dort reflektiert. Das ist ganz nützlich, denn ich habe festgestellt, dass man damit zusätzlich Durchlicht bekommt. Mit der Blende lässt sich sogar die Stärke einstellen. Ist das eine übliche Vorgehensweise, oder eher ein Nebeneffekt? Sollte man unter den OT etwas legen, was das verhindert?
Das war's erst mal...
Viele Grüße
Michael
Hallo Michael
Ich arbeite zwar schon 3 Jahrzehnte mit Olympus, den Christbaum-Effekt kenne ich da nicht.
Einen Tipp zum Streulicht durch den Kondensor, bei Olympus wird der Kondensor abgesenkt und in den Tisch ein schwarzer Lichtschieber eingeschoben. Damit ist der Scheinwerfer nach unten weg.
Liebe Grüße
Gerhard
Moin Michael!
Ich mach ja olympisch und kann Dir nur wenig helfen, aber hier https://archive.org/details/manual_Zeiss_Epi_Fluorescence_Illuminator_IV_FL_III_RS_Filter_Exchange_Manual/mode/2up gibt es zumimdest das Manual zu der Auflichtachse. Vielleicht hilft das ein wenig.
Aber zu Frage 7 habe ich zumindest eine Meinung:
Je nach Kondensor kann es bei AL-Fluoreszenz ziemlich doof werden, wenn die Kondensorlinse in der geköhlerten Position verbleibt: ich hab da gelegentlich einen extrem hellen Hintergrund und extremes Ausbleichen des Präparats. Deshalb drehe ich die DL-Lampe klein, klappe die Frontlinse des DL-Kondensors weg und schwenke eine Ph-Blende ein, dann ist es untenrum eigentlich schön dunkel.
Viel Spaß beim Fluoreszieren!
Viele Grüße von
Marcus
Hallo Michael -
also ich hatte mir eine kleine Pappscheibe mit schwarzem Samt beklebt um sie auf die Kondensorfrontlinse zu setzen und benutze sie auch heute noch, wenn ich mit meinen Axios Fluo-Untersuchungen mache.
Die zahlreichen Schlitze sind in der Tat für diverse Filter in unterschiedlichen Schiebern bzw. Haltern bestimmt und können sehr nützlich sein. In der großen Öffnung (7) kann man eine ganze Menge der 33 mm-Filter in den gestielten Fassungen stapeln, in den oberen Schlitz passt ein 20 mm Schieber rein, falls man mal Experimente mit POL oder Hilfsobjekten machen will oder im Reflektorschieber nicht die richtigen Kombinationen drin sind.
Der Projektionsschirm dient zum Zentrieren und Justieren der HAL- oder Hg-Leuchte falls man damit arbeitet - etc. usw.
Viel Erfolg
Rolf
Hallo Michael,
vielleicht hilft diese Seite etwas weiter. Es sind nur die Ringschwalben des Zeisskondensors an das Olympus BH-2 angepaßt.
http://www.mikroskopie-ph.de/Fluoreszenz.html
Gruß
Peter
Hallo Michael,
ich benutze diese Auflichtfluoreszenz auch seit Jahren.
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=33083.0
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=39376.0
Das meiste ist ja schon gesagt,
in dem Schieber 4 ist ein Wärmeschutzfilter wenn man eine HBO 50 Lampe verwendet,
bei LED nicht notwendig. In den Filterschieber 6 habe ich eine Pol-Folie eingelegt
für Durchlichtpolarisation in Verbindung mit einem Polfilter auf dem Durchlichtaustritt.
Gegen das Streulicht von unten reicht es den Kondensor abzusenken und die Frontlinse
auszuklappen. Bei UV wickle ich Alufolie um den Fluoreszenzarm.
Neue Filter für diese Einrichtung bekommt man sehr schwer, Herr Immel hat noch einiges,
vielleicht hat ja jemand noch einen Tipp?
Interessant erscheint mir die Frage nach der Kamera,
was nimmst du da?
Bei meiner Eos700 muss ich nach dem Scharfstellen die Belichtungszeit so weit reduzieren,
dass der PC-Monitor kein Bild mehr zeigt, erst nach Auslösung sieht man das Bild.
Die besten Erfahrungen habe ich mit meiner alten CoolPix 990 gemacht,
da entspricht das Bild auf meinem kleinen Fernsehmonitor genau dem was ich
auf der Speicherkarte habe.
Die Bilder oben sind alle mit der CP990 gemacht.
LG Ralf
Hallo zusammen,
zunächst allen vielen Vielen Dank für die schnellen Antworten uns Infos!
@Gerhard – schwarzer Schieber, kein Problem. Eventuell Eigenbau
@Marcus – Danke für den Link. Das Papier beantwortet schon fast alle Fragen. Ich denke, wenn man das reflektierte Licht nicht für ein spezielles Präparat braucht ist es sicher eine gute Idee, den Lichtweg zu versperren. Ich habe schon gemerkt, dass außer dem Aufhellen des Hintergrundes auch unerwünschte Hotspots durch Reflektionen entstehen. Wenn man alles weg klappt und die Leuchtfeldblende zumacht, ist es schon recht dunkel.
@Rolf – Danke! Ja, das mit den Schiebern habe ich gerade in dem Papier vom Marcus gelesen. Was macht man, wenn man keine 33 mm-Filter hat bzw. nicht braucht? Gibt es da Abdeckungen oder Blind-Elemente?
@ Peter – Auf deiner Seite war ich schon des Öfteren, aber eher so zur allgemeinen Information.
Ich komme bestimmt auf das eine oder andere zurück, zumal du ja auch im ganzen Filterthema fit bist!
@Ralf – Das mit der Pol-Folie ist eine gute Idee, zumal ich ja meinen Analysator auf dem Würfel der Schaltachse wegen Platzproblemen ausbauen musste. Dann könnte ich, wenn ich im Reflektorgehäuse einen Weg frei mache, ohne größere Umbauten auch ,,normal" mit DL und POL arbeiten. Muss ich mir mal anschauen.
Das mit dem Umwickeln hatte ich mir auch schon gedacht, aber gehofft, dass es eine professionellere Lösung gibt. Vielleicht ist das mit dem Streulicht bei den dazu gehörenden Halogenlampen nicht so gefährlich, denn der eigentliche Lichtweg ist ja sicher, wenn alles andere stimmt. Aber Umwickeln ist wahrscheinlich das Einfachste.
Was die Filter anbelangt, bin ich für UV noch am Suchen. Die LED vom Stephan habe ich schon.
Im Moment habe ich folgende Filter: Reflektorgehäuse mit BP546 / FT 580/ LP 590 und 450-490/ FT 510/ LP520 (Blau- und Grünanregung). Dann habe ich noch ein zweites Reflektorgehäuse mit unbekannter Bestückung. Erste Tests lassen mich vermuten, dass die Bestückung die gleiche ist, wie die, die ich im ersten Reflektorgehäuse habe. Jedenfalls nichts für UV 365 nm.
Wenn jemand eine Tipp hat, würde ich mich sehr freuen!
Zum Fotografieren. Ich mache alles mit der EOS 750, dürfte sich von deiner EOS 700 nicht groß unterscheiden. Für die beiden - nicht repräsentativen -Bilder habe ich 2s (Gelbflechte) und 1s (Kresse) belichtet. Beide mit ISO400. Die Aufnahme steuere ich mit Helicon Remote. Da ist schon noch ganz gut was auf dem Monitor zu sehen. Trotzdem mache ich Probeaufnahmen und schaue mir die an, gegebenenfalls ändere ich dann noch Belichtungszeit oder ISO.
Deine Links muss ich mir noch mal im Detail anschauen. Acridinorange hatte ich mir für den Start schon mal schicken lassen...
Viele Grüße
Michael
Hallo Michael,
mag sein dass ich zu radikal bin, aber ohne bei der Nichia UV-LED 365nm noch ein relativ teueres U-Filter zu nehmen werden die Aufnahmen nicht den Erfolg bringen. Es strahlt eben nicht nur 365nm, sondern noch ein Großteil an sichtbarem Licht, was für blaue und flaue Bilder sorgt. Beispiel anbei.
Also in die Preisgestaltung mit einplanen.
Gruß
Peter
Hallo Peter,
ja, das Thema hatten wir ja schon mal, ich hatte damals gefragt, ob die UV-LEDs auch noch Licht im sichtbaren Bereich abstrahlen.
Deine Bilder überzeugen natürlich. Wenn ich das richtig sehe, hast du das Zeiss Filter Set 02 verwendet - plus ein Baader U-Filter auf Pos. 2 oder 3 (entspr. meinem Foto oben)?
Meinst du dieses Filter (https://www.baader-planetarium.com/de/u-venus-filter-(350nm).html)? Das müsste dann die 1,25"-Version sein? Könnte wohl gerade so reinpassen, oder?
Nicht gerade ein Schnäppchen. Aber ich habe ja noch nicht einmal das Filter Set 02...
Da werde ich mich mal zuerst auf die Suche machen.
Gruß
Michael
U-Filter siehe Bild.
Gruß
Peter
Hallo
@Peter - alles klar. Danke.
@Ralf - ich habe gerade in den 20 mm-Schieber eine Polfolie geklebt. Funktioniert sehr gut.
Beste Grüße
Michael