Hallo,
vor längerer Zeit habe ich hier ein paar Bilder gezeigt, bei denen Paramecien mit Hefezellen gefüttert wurden, die einen Fluoreszenzfarbstoff trugen.
Die Präparation erwies sich als gar nicht so einfach. Wie ich hier aus dem Forum erfuhr, können wohl die wenigsten Fluoreszenzfarbstoffe die Pilzmenbran durchdringen.
Was bedeutet, man muss die Hefe mit dem Farbstoff eine Zeit lang kochen. Was auch bedeutet, man füttert tote Zellen.
Nach Informationen eines lieben Mitglieds hier, der mich freundlicherweise auch mit dem "richtigen" Farbstoff versorgt hat, kann man das mit "Diacetylfluorescin" umgehen. Die zwei zusätzlichen CH3-CO-O-Gruppen am Molekül machen den Farbstoff wohl so hydrophil, das er die Pilzmembran durchdringen kann. Leider ist das Zeug ziemlich teuer.
Die Idee ist, dass die Zelle den "Farbstoff" (warum in "" siehe später) aufnimmt. Beim Versuch der Verstoffwechselung werden recht rasch die Acteylgruppen abgespalten. Der Rest wird a) nicht weiter verstoffwechselt und b) wieder so hydrophob, dass er sich in der Zelle anreichert, da er die Membran nicht mehr passieren kann.
Warum in Anführungszeichen? Nun, die Probe, die ich erhalten habe, ist nicht gelb, sondern weiss. Und unter meiner 10W 365 nm Taschenlampe macht die gar nichts. Was ein großer Vorteil beim Reinigen der Hefe-Futterprobe sein wird.
Ich habe nun etwas Bäckerhefe in Zuckerwasser damit angesetzt und werde sie in zwei Tagen verfüttern.
Schöne Grüße
Carste
Hallo Carsten,
Das ist ein höchst interessantes Thema. Halte uns bitte auf dem Laufenden.
Eine Frage habe ich: Warum ist es von Vorteil, wenn die verfütterten Hefezellen noch leben?
Viele Grüße
Alexander
Hallo,
ich habe das noch nicht getestet, aber kann man Hefezellen mit Mykoval (Fa. Hund) färben ? Das ist speziell zum Färben von Pilzen, färbt allerdings nicht den Zellinhalt nur die Zellwände der Hyphen und Sporen, was ganz gut funktioniert
VG
pschmidt
Hallo,
Mykoval geht sicher. Meine Versuche mit Uvitex, einer sehr verwandten Substanz waren aber wenig ergiebig. Da die gesamte Zellhülle gefärbt wird, sieht man halt lauter blau leuchtende Kugeln. Interessanter wäre eine Färbung, die es erlaubt die einzelnen Bestandteile der Zellen zu unterscheiden.
Viele Grüße
Alexander
PS: Habe gerade gerafft, dass die Hefen zum Füttern von Paramecium dienen sollen. Da wäre Uvitex sicher eine gute Lösung. Die Blaufuoreszenz von Uvitex ist richtig heftig.