Hallo,
Zur Abwechslung habe ich mal eine meiner Schimmel-Proben statt mit Uvitex mit Ethidiumbromid gefärbt. Das funktioniert auch ganz passabel. Die Fluoreszenz ist nicht so heftig wie bei Uvitex. Daher hat man weniger mit Überstrahlungen zu kämpfen. Dafür ist Ethidiumbromid nicht so selektiv wie Uvitex. Es färbt hemmungslos alle Nukleinsäuren.
Das Bild wurde mit einem Leitz 25/0.75 ÖL bei Grünanregung aufgenommen. Es handelt sich um eine einzelne Aufnahme ohne Stacking. Die Bildbreite beträgt 350 µm.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
sehr schöne Aufnahme! Das Bild sieht so aus, als ob man auch Strukturen im Inneren der Hyphen erkennt, das wäre natürlich ein großer Vorteil gegenüber anderen Farbstoffen, bei welchen die inneren Strukturen nicht erkennbar sind.
Hat diese Feinstruktur in Deinen Bildern eine biologische Relevanz, oder ist das eher ein Artefakt der Färbung?
LG
Jürgen
Hallo Jürgen,
Das halte ich nicht für Artefakte. Während Uvitex die Zellwände färbt, bindet Ethidiumbromid an die Nukleinsäuren und die befinden sich im Inneren der Zellen. Daher gehe ich davon aus, dass tatsächlich die innere Struktur erkennbar wird. Die Mykologen im Forum können dazu sicher qualifiziertere Aussagen machen.
In der Literatur habe ich nicht viel dazu gefunden. Meine Anwendung ist wohl eher exotisch.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
gelungene Aufnahme!
Zwei Fragen:
Was für "Schimmel-Proben" hast du da?
Ist für Ethidiumbromid Grünanregung notwendig bzw. von besonderem Vorteil?
Beste Grüße
Michael
Hallo Michael,
Zitat von: witweb in Dezember 29, 2022, 19:20:23 NACHMITTAGS
Was für "Schimmel-Proben" hast du da?
Um vernünftige Bilder zu bekommen, braucht man Myzel, die flach auf einer Ebene liegen. Das erreiche ich, indem ich eine Sabouraud-Platte mit Schimmelsporen impfe und dann Deckgläser darauf lege. Man muss Geduld haben, das bedeutet unter Umständen mehrere Wochen. Der Schimmel breitet sich zuerst da aus, wo Sauerstoff vorhanden ist. Nur sehr langsam erobert er den Bereich unter den Deckgläsern. Manche Arten verweigern sich da vollständig. Die Deckgläser hebe ich dann ab und fixiere sie in Methanol. Dann wird gefärbt. Nach der Färbung wasche ich die Deckgläser erst mit Aqua bidest. und dann mit Isopropanol. Dabei wird alle überschüssige Farbe ausgewaschen und der Hintergrund bleibt schwarz. Durch das Isopropanol wird die Probe gleichzeitig entwässert und ich kann sie nach dem Trocken direkt eindecken. Dazu benutze ich Histokitt.
Zitat
Ist für Ethidiumbromid Grünanregung notwendig bzw. von besonderem Vorteil?
Ethidiumbromid lässt sich auch mit UV anregen, allerdings mit Wellenlängen, die dem Hobby-Mikroskopiker eher nicht zur Verfügung stehen. Sinnvoll geht es nur mit grünem Licht.
Das ist für mich aber kein Problem. Da ich Fossil immer noch eine HBO 50 als Lichtquelle nutze, habe ich alle gängigen Bänder zur Verfügung.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
danke für die ausführliche Antwort. In der Anfertigung deiner Präparate steckt also schon ein bisschen Zeit und Arbeit.
Zur Grünanregung. Ich habe zwar den entsprechenden Filtersatz für meinen Fluoreszenz-Auflichtkondensor IV, aber nur LEDs für Blau-und UV-Anregung. Bisher habe ich, zumindestens hier, noch keine Anwendung gesehen, wo Grünanregung zum Einsatz kommt. Deswegen meine Frage.
Also vielen Dank für die Infos und beste Grüße
Michael