Hallo zusammen
Wie ich ja schon in meinem Thread zum Carl Zeiss Jena Ergaval geschrieben habe, versuche ich momentan mit dem dazugehörigen Auflichtilluminator einfache Fluoreszenzanwendung zu realisieren.
Habe mich auch schon etwas belesen, aber etwas Entscheidenes über genaue Filterbezeichnungen habe ich nicht gefunden. Welcher Sperrfilter 4 (genaue Bezeichnung)
FL-Schema.jpg
Bild aus Wikipedia. https://de.wikipedia.org/wiki/Fluoreszenzmikroskopie
wird für 455nm oder 405nm benötigt. Momentan sehe ich ohne Sperrfilter nur blau. Will aber zB. das Chlorophyll zB. rot sehen. Ich weiss, Filterwürfel usw. ist eine Antwort, aber ich will es ja mit einfachen Mitteln realisieren. Da gibt es doch bestimmt genaue Bezeichnungen für einzulegende Sperrfilter oberhalb des Auflichtilluminators. Über Antworten würde ich mich freuen.
Gruß von Siegfried
Hallo Siegfried,
Du benötigst einen Langpass-Filter im gelbgrünen Bereich. Zum Experimentieren empfehle ich das Filterset von Lee:
https://www.musicstore.de/de_DE/EUR/Lee-Farbfilter-Musterheft-Designers-Edition/art-LIG0006577-000?campaign=GShopping/DE&ProgramUUID=rrLAqJarLjMAAAFl.gZyjI8h&gad_source=1&gclid=EAIaIQobChMIsqWuw-XwggMVLY6DBx3VdQ9DEAQYASABEgJ65fD_BwE
Da sind Filter über das gesamte Farbspektrum drin und zu jedem Filter sind die optischen Daten dabei.
Hochwertige Sperrfilter gibt es bei Edmund oder Optima. Die gehen dann etwas ins Geld. Am Gebrauchtmarkt findet man immer wieder mal Filterschieber mit 570 oder 590 nm Kantenfrequenz. Die taugen oft auch für den Job.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Siegfried,
hast Du auch bei mikroskop-online.de nachgesehen? Da findet man eigentlich alle nötigen Angaben in der Anleitung zum Fluoval:
http://www.mikroskop-online.de/Mikroskop%20BDA/30-549-1%20%20FLUOVAL%202.pdf (http://www.mikroskop-online.de/Mikroskop%20BDA/30-549-1%20%20FLUOVAL%202.pdf)
Hallo,
Sperrfilter sind ganz wichtig ! Aber vorsicht. Die Schott Farbglasfilter haben in diesem Bereich eine Eigenfluorezenz. Siehe Bild.
Besser geeignet sind Folienfilter. Es kommt aber auch auf die Anregung und den Farbteiler an.
Filter-365nm.jpg
Grüße
Peter
Hallo Alexander, Jürgen und Peter
Vielen Dank für euere sehr hilfreichen Antworten und die Links. Hier wird einem geholfen. Ich werde wieder berichten, wenn ich auch Dank euerer Hilfe Fortschritte gemacht habe.
lg von Siegfried
Hallo Siegfried,
Ich habe bescheidene Ergebnisse mit der Fluoreszenz von Chlorophyll in blauem Licht erhalten, jedoch nur bei Licht übertragen, da ich keine Messung der Messung für den Arm für reflektiertes Licht habe. Ich schrieb in der Vergangenheit im Forum dieser Versuche.
Ich habe eine blau-Valetto-LED als Lichtquelle und einen Aufregungfilter B421G verwendet (ohne dies funktioniert es nicht). Als Barrierefilter zementiert ein OG4/GG9 -Filter.
Das Bild war nur durch Kamera mit langer Belichtungszeit sichtbar.
Meine Ausrüstung von drei Aufregungfiltern umfasst auch eine für UV ILU204 und einen KP425 (Kurpaβ-Filter), von dem ich das Gebrauchsfeld nicht kenne.
Wer kann mir sagen, wofür der KP425 -Aufregungfilter ist?
Beste grüße.
Enzo
Hallo Enzo
Auch dir danke, für deine Hinweise. Muß mich jetzt erst mal sammeln, bei den vielen Filterbezeichnungen, wie
OG4/GG9 -Filter usw. Aber werde schon irgendwann durchsteigen.
Gruß von Siegfried und schönen 1. Advent für Alle
Fragen an die Experten
Ich verstehe das nicht ganz. Die Schemazeichnung gilt doch, wenn die Lichtquelle eine Quecksilberdampflampe ist.
Wenn man aber schon eine LED Lichtquelle (Blaulicht) hat, zu welchem Zweck dient das Anregungsfilter?
Ich habe ja schon die richtige Lichtwellen Frequenz.
Das sind ja wohl ca. 97 % welche man wegfiltern muss. Selbst wegen dem Streulicht braucht man noch eine Blende für den Augenschutz. Die blaue LED hat aber nur wenige Watt und kaum andere Wellenlängen, welche das Auge schädigen können. Was soll dann das Sperrfilter wegfiltern?
Bei UV - LEDs ist die Sache natürlich etwas anders.
Peter Mikropit
Hallo Peter,
gerade die blauen LEDs sind alles andere als schmalbandig. Die strahlen jede Menge Licht anderer Farbe ab. Ein passender Anregungsfilter verbessert die Ergebnisse erheblich.
Viele Grüße
Alexander
Hallo zusammen,
Ich bestätige, was Alexander gesagt hat, ich dachte auch, dass die blaue LED ausreicht, aber stattdessen ist der Anregungsfilter notwendig.
Mit dem gleichen Orange-Barriere-Filter ist das erste Foto ohne blauen Anregungsfilter und das zweite mit dem Filter. Die blaue LED leuchtet auch grün.
Beste grüße.
Enzo
"Fragen zu einfacher Floureszenz mit Auflichtilluminator" :o
Mit einer geeigneten Lichtquelle, einschließlich konventioneller LED, werden zumindest Anregungsfilter weniger wichtig. Ich habe gute Erfahrungen mit einer Art Minimal-Ausstattung aus dem Zeiss-STANDARD-Auflichtprogramm gemacht: Autofluoreszenz von fossilem organischen Material. Spezifische Anregungsfilter wären da eher hinderlich, da die Bandbreite wesentlich größer ist als die Grenzen der Filter-Wellenlängen es vorgeben.
Liebe Fluoreszenzler,
ein LED-Märchen hält sich ganz hartnäckig :'(
Bunte LEDs seinen monochrom ::) ::) ::)
Wer die fast immer schwache Fluoreszenz von Stoffen kontrastreich sehen möchte muß alle Faktoren berücksichtigen.
Eine Kette ist nur so stark .....
Warum viele Worte? Der Vergleich sollte genügen.
Filtervergleiche.jpg
Guten Wochenstart
Peter
Ich verwende grundsätzlich keine UV LEDs, weil ich Bedenken habe, dass meine Augen doch was von den UV Strahlen abbekommen. Mit einer blauen LED bringen mir davor zusätzliche Blaufilter gar nichts. Es wird nur dunkler. Jedoch benötige ich zwingend ein oranges Sperrfilter. Dann gibt es ein recht gutes, helles Fluoreszenz Bild. Realisiert an einem Olympus BH2 und an einem Zeiss Phomi. Verstehen tue ich das trotzdem nicht ganz.
Peter Mikropit
Hallo Thomas, Peter H und Peter M. und Enzo
Danke für euere Hinweise.
Frage an Peter Mikropit:
Hat dein oranger Sperrfilter eine genaue Bezeichnung?
Gruß von Siegfried
Hallo Siegfried,
Ich antworte auch. Mein orangefarbener Sperrfilter ist OG4, den Zeiss Jena später in G247 umbenannte. Dieser Filter ist im Revolver Barrier Filter mit einem GG9, umbenannt in G245, UV Barrier Filter, gekoppelt. Ich denke, das nützt dir nichts. Es war bei einem Fluoval 1 für Durchlicht nur mit einer einzigen Quelle, bestehend aus einer UV-Lampe, vorhanden. Wir wollten verhindern, dass UV-Strahlung über den blauen Anregungsfilter und den orangefarbenen Barrierefilter gelangt.
Das Argument, dass die blaue LED keinen Sperrfilter benötige, bezieht sich, wenn ich das richtig verstehe, auf Erfahrungen mit Auflichtbeleuchtung, die ich nicht erlebt habe. In meinem Fall erhalte ich, wie Sie auf meinem vorletzten Foto sehen können, ein Bild, das durch das Grün der blauen LED verschleiert wird.
Beste grüße.
Enzo
Hallo Peter,
danke für Deine eindrückliche Demo. Ich habe noch eine Frage von wegen der Anregungsfilter:
Was macht der Baader U-Filter anderes als der Anregungsfilter in Deinem Filterblock?
Und wenn Du das zusätzliche Filter verwendest, heißt das, dass die Angaben zur Nichia nicht richtig sind?
Für die Praxis bedeutet das, dass man möglichst viele Filter ausprobieren sollte?
Viele Grüße
Thomas
Hallo Thomas,
das Spektrum der Nichia ist ok. Nur bedenken wir nicht dass das Auge eine log. Kennlinie hat und wir weit mehr sehen als in einem lin. Diagramm gezeigt.
Das Baader U-Filter schneidet ganz sauber den sichtbaren Teil weg. Das ist nach meiner Meinung sehr wichtig.
Nichia-LED-365.jpg
http://www.mikroskopie-ph.de/Baader-U-G.jpg
Gruß
Peter
Hallo Peter,
danke für Deine Antwort, aber was heißt denn: "Das Baader U-Filter schneidet ganz sauber den sichtbaren Teil weg"? Sollte das nicht auch der Anregungsfilter im Filterblock tun? Und bringt die Nichia nicht auch nur Licht aus dem kaum sichtbaren Bereich?
Ich sehe an Deinen Bildern ja, dass es eine enorme Verbesserung gibt mit dem zusätzlichen Filter, nur vestehe ich es nicht. Vielleicht ist es auch nicht zu verstehen, sondern nur durch Auszuprobieren zu ermitteln. Das kann aber nur der, der auch genügend Möglichkeiten, sprich Filter, hat.
Viele Grüße
Thomas
Zitat von: micromax in Dezember 04, 2023, 17:50:26 NACHMITTAGSheißt das, dass die Angaben zur Nichia nicht richtig sind?
Hallo Thomas,
Die Angaben der Hersteller beziehen sich auf die Werte, an denen die Emission unter 50 % abfällt. Über den weiteren Verlauf der Kurve wird gerne geschwiegen. Die Nichia-Kurve hört bei 395 nm auf. Ob langwelligeres Licht abgestrahlt wird, kann man der Kurve nicht entnehmen.
Ich empfehle, das "monochromatische" Licht solcher LEDs mit einem Spektroskop zu analysieren. Das ist ziemlich ernüchtern. Bei einer UV-LED geht das natürlich nicht, bei einer blauen schon.
Ich habe hier eine nicht gerade preiswerte "UV 365"-Taschenlampe, die im wesentlichen zwischen 390 und 420 nm emittiert. Spektroskope lügen nicht, Chinesen schon.
Viele Grüße
Alexander
Der Filter von meinem BH2 ist Eigenbau. Ich hatte verschiedene orange Filter und der welcher am besten funktioniert hat den habe ich in einen Schieber eingeklebt.
Für das Zeiss Phomi habe ich einen Mehrfachfilter von Zeiss West. Das sind 3 Schieber untereinander. Jeweils mit Leerstellung und 2 Filtern.
Nummeriert mit 41,44, 47, 50, 53 und 65. Dabei ist 53 richtig orange und funktioniert am besten und 41 ist ganz schwach. 65 ist grünlich. Da kann man aber die Filter miteinander kombinieren. Je nach Präparat macht das Sinn.
Noch ein Tip. Zu Beginn hatte ich ein ganz schwaches Fluoreszenzbild. Ich habe immmer LEDs mit höherer Leistung probiert. Im Dialog im Forum ergab sich dann, dass der Polarisations Analysator der Übeltäter war. Den rausgenommen und eine 3 Watt LED hat gereicht.
Peter Mikropit
Hallo Peter
Vielen Dank für deine Antwort und den Tip. Ich warte nun auf meine bestellten und angekündigten Filter.
Dann sehen wir weiter.
Gruß von Siegfried
Hallo Siegfried!
Um die Helligkeit des Fluoreszenzbildes etwas zu erhöhen, habe ich auf einen schmalen Kartonstreifen ein Stückchen Alufolie aufgeklebt. Dieses schiebe ich zwischen den Objektträger und den Durchlichtkondensor. so wird das Präparat quasi von unten beleuchtet. Wenn man einen kleinen Spiegel hat, wäre das wohl noch besser.
vG Peter Mikropit
Hallo Peter
Auch für diesen Tipp , danke.
lg von Siegfried
Zitat von: mikropit in Dezember 05, 2023, 10:29:57 VORMITTAGHallo Siegfried!
Um die Helligkeit des Fluoreszenzbildes etwas zu erhöhen, habe ich auf einen schmalen Kartonstreifen ein Stückchen Alufolie aufgeklebt. Dieses schiebe ich zwischen den Objektträger und den Durchlichtkondensor. so wird das Präparat quasi von unten beleuchtet.
Hallo Peter,
und ich mache genau das umgekehrte: Ich schiebe zwischen Objektträger und Durchlichtkondensor ein Stück schwarze Folie, damit der Hintergrund schön schwarz ist.
Gruß
Peter
Hallo Peter R.
Auch dir danke für deinen Hinweis.
Ich habe nun heute die Lee-Filtermappe, welche Aljoscha mir vorgeschlagen hat, bekommen. Also kann ich mit Probieren anfangen. Nun kommt bei mir schon die nächste Anfänger Frage auf. Aber wenn ich etwas nicht weiß, frage ich halt. Wie ist das Diagramm auf dem angehängten Bild zu deuten. Ich habe nur mal wahllos eine Farbe ausgewählt. Hat diese Folie bei 450nm eine Sperrwirkung von 25% und bei 600nm die höchste? Oder was sagt das Diagramm aus?
Ausprobieren werde ich sowieso.
Gruß von Siegfried
Halo Siegfried,
Das Bild kann ich nicht sehen.
Grundsätzlich wird immer die 50 % Linie angegeben. Ein Kantenfilter, der mit 450 nm angegeben wird, lässt auf dieser Frequenz noch 50 % des Lichtes durch. Je steiler die Kurve ist, desto hochwertiger ist der Filter. Die Kantenfrequenz allein sagt dazu nichts aus.
Viele Grüße
Alexander
Hallo,
nein, Siegfried zeigt hier ein Transmissionsspektrum von 0% bis 100%.
Und ja, bei etwa 450 nm läßt der noch ca. 30% durch. Richtig sperrt der erst ab ca. 320 nm.
Grüße
Carsten
Hallo,
Ein Filter mit diesen Daten taugt nicht für Fluoreszenz.
Der Filter lässt im gesamten Bereich zwischen 400 und 550 nm sehr viel Licht durch.
Such nach besseren.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Carsten und Alexander
Danke für euere Antworten. Ich werde jetzt auch dank euerer Hinweise nach passenden Filtern weitersuchen
auch Mithilfe der Diagramme.
Gruß von Siegfried
Kleiner Erfolg ist zu vermelden. Mit Hilfe von Lee Filter 100 Spring Yellow, auf Diagramm die höchste Sperrung zwischen 420 und 470 nm, habe ich mein erstes Fluoreszenzfoto machen können. Auflichtfluoreszenz von einem Blatt ,Asparagus densiflorus, (Zierspargel).
Ich probiere weiter.
Gruß von Siegfried
Hallo Siegfried,
Die Reflexe werden weniger, wenn Du einen Filter wählst, der im Bereich 570 - 590 nm sperrt.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander, Carsten und alle
Ich bin im Moment in der Versuchsphase, noch Spielereien, weil es einfach Spass macht.
Auch die Ausleuchtung mit der Royal Blue LED werde ich noch verbessern.
Hier wieder ein kleiner Fortschritt, 2 Fotos mit meinem Auflichtilluminator von Carl Zeiss Jena am Ergaval, eines Präparates von H.G. Plescher (Lorbeerblattstengel) mit Fluoreszenzeinfärbung. Welche Farbe benutzt wurde, ist nicht angegeben. Nochmals danke an den Mikrofreund, der mir den Auflichtilluminator besorgt hat.
Zuerst immer das Diagramm von Lee und dann das Ergebnis. In Zukunft will ich evtl. auch andere Species anfärben und damit versuchen. Das sind aber alles noch Wunschträume.
Fire.jpg
Fire-Lee.JPG
Yello.jpg
Gruß von Siegfried
Hallo Siegfried,
Das funktioniert doch bereits sehr gut.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Siegfried,
Ich denke, dass diese Filter nicht für Fluoreszenz geeignet sind.
Das erste Foto ist rot, weil der Filter rot ist, stattdessen sollte er blau sein. Anstelle der Zellwände sollten die Chloroplasten rot sein.
Um den Durchtritt anderer Farben zu verhindern, ist ein Blau-Violett-Filter von beträchtlicher Dicke erforderlich. Nach der Blockierung des Blaus erhält man so eine sehr schwache, vom Chlorophyll abgegebene Leuchtkraft.
Beste grüße.
Enzo
Hallo Enzo und alle
So nun bin ich erst einmal wieder ausgebremst, aber aufgeben ist natürlich keine Option. Ich bekomme noch diese Woche von einem Forumsmitglied Zeiss Glasfilter, dann sehe ich weiter. Wer mir weitere Hinweise geben kann, nur zu. Heute wird es sowieso nichts mehr, mein Auto hat nach langer Zeit mal wieder einen Platten.
Das Leben ist eben kein Wuschkonzert. Grieg mer aber in den Griff.
Gruß von Siegfried
Hallo,
Warum der Filter blau sein soll, erschließt sich mir nicht. Den Sperrfilter wähle ich passend zu der erwarteten Fluoreszenz. Dass ein roter Filter nur rot durchlässt ist nicht verwunderlich. Die These, dass er damit untauglich sei, allerdings schon.
Die beiden Bilder zeigen einen mit Fluorochromen gefärbten Schnitt. Da ist nichts mit Chlorophyll und dessen Autofluoreszenz. Bei Anregung mit einer blauen LED ist ein blauer Sperrfilter völlig daneben. Der Sperrfilter muss im Bereich Grün, Gelb oder Rot gewählt werden, je nachdem, was man darstellen will.
Richtig ist: je kurzwelliger die Sperrfrequenz gewählt wird, desto mehr Farben kann man im Bild haben. Deshalb ist bei Hobby-Mikroskopikern die UV-Anregung so beliebt. Sie erlaubt Fluoreszenz über den gesamten sichtbaren Bereich, alle Farben können vorhanden sein. Das gibt hübsche Bilder. Je langwelliger die Anregung ist, desto eingeschränkter wird das mögliche Farbspektrum der Emission.
Will man konkrete Details darstellen, wählt man den Sperrfilter möglichst eng. Oft werden Bandfilter eingesetzt. Im Profi-Labor wird durchaus mit Rot angeregt (Beispiel: Texas Red). Da kann nichts anderes als wieder Rot oder IR rauskommen. Viele Fluorochrome werden mit Grün angeregt. Dazu gehören neben Ethidiumbromid auch einige Rhodamin-Derivate.
Viele Grüße
Alexander
Für mich gibt es nur UV-Anregung. Warum? Es kann ein sehr großes Farbenspektrum erfaßt werden was bis nahe ins Blaue geht. Da eine Betrachtung auch nur über den Monitor erfolgt ist die Gefahr fürs Auge bei Null. Selbstverständlich ist am Mikroskop ein Schutzschild.
Sori vom Wurmfarn.
Farn-UV-03.jpg
Gruß
Peter
Hallo Siegfried,
Vielleicht habe ich es nicht verstanden, andererseits verwende ich Google Translate :)
Ich hatte gedeutet, dass Sie die Chlorophyll-Fluoreszenz mit Blau untersuchen wollten.
In diesem Fall sind ein blau-violetter Anregungsfilter und ein orangefarbener Barrierefilter erforderlich. Wenn Sie stattdessen Ultraviolett verwenden, benötigen Sie einen Erreger, der die UV-Strahlen durchlässt, und eine Barriere, die sie blockiert.
Die Filterpaare sind in der Tabelle am Ende der Broschüre aufgeführt, die Michael Ihnen in einer vorherigen Nachricht mitgeteilt hat.
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?action=dlattach;attach=38052
Viel Spaß und viele Grüße.
Enzo
Hallo Enzo, Alexander und Peter H.
@ Enzo--
Du hast mein Anliegen schon richtig verstanden, ich hatte ja am Anfang von der Sichtbarmachung von Chlorophyll mittels Fluoreszenz geschrieben. Danach bin ich dann zu den Präparaten mit Fluoreszenfärbung gekommen. Ich bin eben noch ganz am Anfang, dadurch noch etwas an zu vielen Facetten interessiert. :D
@ Alexander und Peter H.-
Ihr habt doch schon sehr viel Wissen bei diesem Thema, das merkt man und sieht man.
Danke für euere Hinweise. Ich mache weiter, es gibt noch viel zu lernen. Warte jetzt u.A. erst mal auf die Glasfilter.
Gruß von Siegfried
Hallo zusammen
Kleines Update meiner Bemühungen. Das Thema Fluoreszenz ist ja so vielfältig, überhaupt wenn man nur einfach mal alles mit kleinem Aufwand aus Neugierde ausprobieren will, natürlich mit dem Wissen der Gefährlichkeit von UV-Licht. Ich setze prinzipiell bevor ich die LED einschalte meine Schutzbrille auf und schaue nicht durch die Okulare, sondern nur auf den Monitor.
https://de.xtool.com/products/professional-laser-safety-glasses-for-180nm-540nm-wavelength-laser-protection-goggles?currency=EUR&variant=43770757775649&utm_medium=cpc&utm_source=google&utm_campaign=Google%20Shopping&stkn=b84be624d410
So heute 2 Aufnahmen eines Präparates von H.G. Plescher"Casuarina equisetifolia Nadel in Fluoreszenzfärbung"
405nm und Zeiss Glasfilter gelb-orange und Objektiv 5x. Die Genaue Bezeichnung des Filters bringe ich noch in Erfahrung.
1.Foto mit Auflicht und ja, ich habe es auch einmal mit Durchlicht probiert. Gleicher Filter.
2.Foto.
Im Präparat sind mehrere Schnitte, daher auf den Fotos auch unterschiedliche Schnitte.
Nadel-floureszenz Auflicht 5x _Bildgröße ändern.jpg
Nadel-fluoreszenz Durchlicht 5x -bea.jpg
Gruß von Siegfried
PS: bevor Nachfragen kommen, hier meine verwendete LED (Taschenlampe)- mit selbst gefertigten Adaptern angepasst an Auflichtilluminator oder
Durchlichtrohr und langen Belichtungszeiten.
https://www.amazon.de/Taschenlampe-Ultraviolett-Stufenlose-Schwarzlicht-Wiederaufladbare/dp/B08NYJ9SDG
Noch ein kleiner Nachtrag zum 3. Advent.
Casuarina equisetifolia-Plescher.jpg
Gruß von Siegfried
Hallo zusammen
Da hatte BW OPTIK mal eine prima Idee.
Den Anregunsfilter im Kühlkörper vor die blaue LED so das es bei mehreren Jena Mikroskopen einfeschoben werden konnte
Sperrfilter dann in eine Filteraufnahme
Hat wohl niemanden interessiert so das es eingestellt wurde.
GRÜßE