Hallo,
es wurden hier ja schon etliche Fluoreszenz-Bilder gezeigt, bei denen auf Epithelzellen sitzende Bakterien deutlich kontrastiert leuchten. Bei einigen Farbstoffen, z. B. Acridinorange, fluoreszieren die Bakterien sogar in einer anderen Farbe wie der Zellkern oder der Rest der Zelle.
Es gibt aber scheinbar nicht viele Farbstoffe, die das können. Ich habe daher mal ganz tief in meiner Farbschublade gwühlt und mit ca. 20 mikroskopischen Farbstoffen Epithelzellen sauer und basisch feärbt und untersucht, ob da irgendetwas in Fluoreszenz zu sehen ist.
Erfreulicherweise fluoreszieren die allermeisten Farbstoffe mit Zellen zumidest "irgendwie", wenn auch nicht sehr stark. Allerdings färben die nicht spezifisch, meistens leuchtet die ganze Zelle, ohne das man viel erkennen kann, wie hier im ersten Beispiel:
Bild 1: Xylenolorange, 450 nm, Würfel 510 nm, 0,6 Sekunden belichtet
xylenolorange_450nm_0_6sec.jpg
Dann gibt es natürlich die "guten" Farbstoffe wie Höchst und Dapi. Die sind aber extrem teuer und sehr schwer zu bekommen.
Bild 2: Hoechst 33342, 390 nm, Würfel 450 nm, 1/4 Sekunde Belichtung
hoechst_390nm_450_1_4sec.jpg
Auch von Ethidiumbromid haben wir hier schon Bilder gesehen, bei denen die Bakterien erkannt werden können, wie hier:
Bild 3: Ethidiumbromid, 430 nm, Würfel 510 nm, 0,5 Sekunden Belichtung
ethidiumbromid_430nm_0_5sec.jpg
Ich habe aber noch eine Reihe anderer, teilweise einfacher zu beschaffender Farbstoffe gefunden, die das auch können.
Und damit wünsche ich frohe Festtage und viel Spaß beim Betrachten,
Carsten
Bild 4: Auramin O, 430 nm, Würfel 510 nm, 1/6 Sekunde Belichtung
auramin_430nm_1_6sec.jpg
Bild 5: Acridinrot, 430 nm, Würfel 510 nm, 1 Sekunde Belichtung
acridinrot_430nm_1sec.jpg
Bild 6: Acriflavin, 430 nm, Würfel 510 nm, 0,8 Sekunden Belichtung
acriflavi_430_0_8 sec.jpg
Bild 7: Bromocresolpurple (basisch), 430 nm, Würfel 510 nm, 0,6 Sekunden Belichtung
bromoresolpurple_basic_430nm_0_6sec.jpg
Bild 8: Coriphosphin, 430 nm, Würfel 510 nm, 1 Sekunde Belichtung
coriphosphin_430nm_1sec.jpg
Hallo Carsten,
Da sind doch ein paar sehr brauchbare Kandidaten dabei. Bild 6 und 8 schauen sehr gut differenziert aus. Ich habe mal Bengalrosa gekauft ich werde mal später etwas beisteuern zu der Sammlung,
Liebe Grüße Daniel
Hallo Carsten, hallo Daniel,
Super! Sehr interessant und immer weiter so.
Da ergeben sich ja zahlreiche neue Möglichkeiten...
Grüße Holger
Hallo,
Bengalrosa? Ich habe hier Rose Bengal Avocado. Hat es nicht in die Topliste geschafft.
Carsten
Rose bengal, bzw Acid Red 94 ist gemeint:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0143720808000314
Hallo Carsten,
Sehr schön! Danke fürs Zeigen.
Besonders Acriflavin und Coriphosphin scheinen ja sehr gute Ergebnisse zu liefern. Beides ist problemlos zu beschaffen und im Fall Acriflavin auch noch ausgesprochen preiswert.
Muss ich mal ausprobieren. Acriflavin (Trypaflavin) habe ich hier noch irgendwo rumliegen.
Viele Grüße
Alexander
......... Alexander schau mal beim Aquarium falls vorhanden ;-)
Schöne und interessante Bilder, Carsten. Beste Grüsse,
Rolf
Hallo zusammen und noch frohe Weihnachten,
Anbei die versprochenen Bilder von Bengalrosa.
Anregung Grün (546nm/580/590) rotes Bild
Anregung Blau (485/510/520) grünliches Bild
Und ein Bild in schiefer Beleuchtung als Referenz,
Liebe grüße Daniel
Hallo Carsten,
wie hast Du diesen Farbkontrast zwischen Zellkernen und Bakterien mit Acriflavin hingekriegt? Was ist dein Färbeprotokoll?
Ich kriege Grün und bei hoher Konzentration und langer Einwirkdauer noch Gelb aber kein Rot.
Danke und viele Grüße
Alexander
Hallo,
allen erst einmal ein frohes Neues.
Mein Färbeprotokoll für Acriflavin sieht so aus:
- Vorratslösung verdünnen, bis gerade eine Farbe visuell wahrnehmbar ist
- mit Eisessig auf pH 4 einstellen
- Färbedauer 1 h
- abspülen mit dest. Wasser
Ich habe das nocheinmal nachgestellt, hier das Resultat:
Bild 1: Epithelzellen mit Acriflavin, Anregung 430 nm, Filterwürfel 450
acri_450.jpg
Bild 2: Epithelzellen mit Acriflavin, Anregung 430 nm, Filterwürfel 510 + G247
acri_510.jpg
Schöne Grüße
Carsten
Hallo Carsten,
Die Verdünnung und die Färbedauer sind ein Thema. Ich hatte mit höherer Konzentration und kürzer gefärbt. PH hatte ich auch auf 4 eingestellt, allerdings mit Acetat-Puffer.
Wobei deine neuen Bilder die Bakterien auch eher gelb/orange als rot zeigen. Ist aber ein esoterisches Problem. Gelb kann man von Grün hinreichend unterscheiden. Insgesamt scheint Acriflavin für solche Färbungen sehr gut geeignet zu sein.
Viele Grüße
Alexander
Hallo,
mit welchem Fluoreszenz-Farbstoff weist man eigentlich TBC-Bakterien nach?
Ist die Färbung dann spezifisch?
Liebe Grüße
Rudolf
Hallo Rudolf,
lichtmikroskopisch ist die historische Methode die Ziehl-Neelsen-Färbung.
Fluoreszenz weiß ich nicht.
Am spezifischten ist aber der uns ja bestens bekannte PCR-Test. Ist aber natürlich nichts Mikroskopisches.
Hallo Peter,
vorab schon mal vielen Dank.
Wir haben im Verein auch schon mal die Ziehl-Neelsen Färbung durchgeführt.
So ein Fluoreszenz-Mikroskop hat mich auch deshalb fasziniert, weil man schnell diese Bakterien nachweisen kann. Tja, mal warten was die Praktiker sagen.
habe gerade folgende Hinweise gefunden:
wiki/Auramin-Rhodamin-Färbung (https://de.wikipedia.org/wiki/Auramin-Rhodamin-F%C3%A4rbung)
Uni Erlangen Nachweis TBC (https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&opi=89978449&url=https://www.mikrobiologie.uk-erlangen.de/fileadmin/einrichtungen/mikrobiologie/dateien/Diagnostik/Leistungsverzeichnis/Untersuchungsspektrum/Mykobakterien/Tuberkulose.pdf&ved=2ahUKEwjrwbCbmteKAxUj_rsIHWFoGIcQFnoECBQQAQ&usg=AOvVaw10osayJ2oJkXLNIy9HqQg8)
Liebe Grüße
Rudolf
Hallo Rudolf,
Fluoreszenzmikroskopisch bietet sich da Auramin und Rhodamin B als Färbung an. Wie spezifisch diese Färbung ist, weiß ich nicht.
Grüße Holger
*Wie ich sehe haben sich unsere Antworten
überschnitten.
Hallo
Ob Auramin-Rhodamid oder Ziehl-Neelsen, beides zeigt säurefeste Stäbchen, also Mykobakterien generell. Es gibt aber noch 40 andere nicht-tuberkulöse human-pathogenen Mykobakterien (insbes. Kinder, Immunsupprimierte), auch mit teils Lungenbeteiligung. Also beides unspezifischer Suchtest.
Beste Grüße Stefan