Hallo,
Die Familie Aspergillaceae wird in der Fachliteratur als "vielzellig" beschrieben. Um die Zellkerne sichtbar zu machen, habe ich ein Präparat der Gattung Penicillium mit DAPI gefärbt. Im UV-Licht sieht man nun deutlich, was unter vielzellig zu verstehen ist. Ich hätte nicht gedacht, dass es so viele Zellkern so dicht aufeinander sind.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
eine sehr interessante Aufnahme, das hätte ich auch nicht erwartet.
Viele Grüße
Kay
Hallo Alexander,
Vielzellig zu sein, ist ja eher die Regel. Meinst Du vielleicht, dass er mehrere Zellkerne pro Zelle enthält (coenocytisch)? Die Dikarya, zu denen Aspergillus gehört, haben ja normalerweise entweder einen oder zwei Zellkerne pro Zelle. Manchmal werden die Septen zwischen den Zellen aber aufgelöst und dann können die Zellen auch vielkernig sein.
Bei vielen Jochpilzen ist die Vielkernigkeit die Regel (z. B. Brotschimmel Rhizopus) und Septen werden nur bei Bildung der Sporen etc herausgebildet.
Jedenfalls tolle Bilder. Septen kann ich nicht erkennen, von daher sind das wohl vielkernige Hyphen. Da wäre ein normales Bild im Durchlicht evtl. aufschlussreich.
Viele Grüsse
Florian
Hallo Florian,
Im Hellfeld erkennt man fast nichts, die Hyphen sind nahezu transparent. Ich habe das gleiche Präparat aber an anderer Stelle mit dem 100er im Phasenkontrast aufgenommen. Die Septen erkennt man gut. Es sind tatsächlich sehr wenige.
Viele Grüße
Alexander
Naja, da sieht man aber deutlich Septa in den Hyphen...
Grüße
Martin
Hallo Zusammen,
als unwissender habe ich eine Frage: Was ist die Septa?
in angehängtem Bild habe ich meine Vermutung markiert,
lg Daniel
septa.jpg
ps @ Alexander die Dapifärbung ist grandios :-)
Ja genau, das ist ein Septum (Plural Septa), das quasi eine Zellwand repräsentiert.
Zitat von: beamish in Januar 21, 2025, 13:35:33 NACHMITTAGSNaja, da sieht man aber deutlich Septa in den Hyphen...
Hallo Martin,
Ja, man sieht sie deutlich. Allerdings sind es recht wenige und die Einzelzellen sind teilweise sehr viel länger als ich etwa von der Gattung Aspergillus kenne.
Viele Grüße
Alexander
Ich verstehe nicht viel von solchen Färbungen. Färbt "DAPI", was auch immer das ist, so selektiv nur Zellkerne an?
Zellkerne stelle ich mir nicht so unförmig vor.
Grüße
Martin
Hallo Martin,
DAPI bindet an DNS. Die Unförmigkeit der Zellkerne ist im konkreten Fall ein fotografisches Problem. Der Helligkeitsunterschied ist groß, dass die Zellkerne überstrahlen. In dem Punkt hat das Bild noch eine Menge Verbesserungspotential. Es ist halt ein Schnellschuss. Mir ging nur darum, die Kerne überhaupt zu lokalisieren.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
Schöne und interessante Aufnahmen sind dir da gelungen.
War das eine frische Probe oder fixiert?
Grüße Holger
Hallo Holger,
Die Proben fixiere ich mit Methanol, sobald die Deckgläser gut bewachsen sind.
Viele Grüße
Alexander
Da der Beitrag falsch gelandet ist reduziert.
Liebe Grüße
Gerhard
Hallo,
Ich glaube, Peter ist verloren ;). Aber zum Thema, die Zellkerne sollten doch auch in Hellfeld und Phasenkontrast zu sehen sein?
@Alexander
Kannst du uns einige Hellfeldbilder zukommen lassen?
ZitatDAPI bindet an DNS
Apropos, eigentlich sollte man DNA nicht in der eigene Sprache abkürzen ;)
Beste Grüsse,
Rolf
Hallo Rolf,
Auf den Phasenkontrastbildern kann man die Kerne erahnen, siehe oben. Hellfeld ist hoffnungslos.
Ich kann dir gerne ein ungefärbtes Präparat zum selbst ausprobieren schicken.
Viele Grüße
Alexander
Hallo Alexander,
Obwohl wir uns ja schonmal zu dem Thema ausgetauscht hatten, muss ich dich nochmal bezüglich der Präparation löchern:
Hast du das Präparat direkt nur auf einem Deckglas in einer feuchten Kammer wachsen lassen?
oder
Hast du einen Agar-Nährboden auf einen Objektträger aufgebracht, dann mit Deckglas abgedeckt und dann den Pilz in die dort befindlichen dünnen Schicht einwachsen lassen?
LG Holger
Hallo Holger,
Ich habe Deckgläser mit einer dünnen Schicht Saubouraud-Agar bestrichen, beimpft und dann einige Tage in einer feuchten Kammer bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend fixiere ich die Proben in Methanol und färbe sie.
Viele Grüße
Alexander
Alles klar.
Ich hab mal (ich glaube im amerikanischen) Forum gelesen das dort jemand das Myzel in der dünnen Schicht zwischen Deckglas und Objekträger hat wachsen lassen. Entweder in einem Nährboden der gleich auch schon stark verdünntes Fluorochrom enthalten hat (Uvitex/ Calcofluor). Damit konnte man an den Wachstumsspitzen der Hyphen dann die Chitinbildung in vivo beobachten.
Alternativ kann der durchwachsene Objektträger mit der planen Nährbodenschicht auch schockgefrostet und abgesprengt werden. Anschließend dann fixiert und mit einem Farbstoff nach Wahl z.b. Dapi, Kongorot etc gefärbt werden. Dadurch erhält man dann wohl ein besonders dichtes und vor allem planes Präparat.
(Nur als weitere Anregung für deine hochinteressante Versuche gedacht... Ich finde deine Aufnahmen jetzt schon super, und wünsche mir gerade viel mehr "Mikroskopzeit", damit ich das auch einmal ausprobieren kann)
Grüße Holger
Hallo Holger,
Mit meiner Methode kriege ich hinreichend plane Präparate. :) Einklemmen zwischen Deckglas und Objektträger reduziert die Erfolgsquote erheblich. Der Schimmel wächst nicht so gerne ohne Luft. Das Problem hatte ich mit der Methode, Deckgläser auf den Agar zu legen. Das hat immer wieder mal gut funktioniert aber oft auch nicht, hängt unter anderem von der konkreten Spezies ab.
Viele Grüße
Alexander
Alles klar.
Wird Zeit für mich auch mal wieder die Farb LED's abzuschalten...
Bis denn Holger
Hallo,
Ich habe nochmal versucht die Struktur des Schimmels mit den Zellkernen etwas besser herauszuarbeiten.
Hoechst 33528, UV-Anregung, Zeiss Filtersatz 01, Neufluar 40x/0.75.
Viele Grüße
Alexander
WOW :D :D :D
Hallo Alexander,
ein Augenöffner und -schmaus!
Hallo Alexander,
das Bild sieht fantastisch aus, besonders die Konidienträger werden wunderbar hervorgehoben!
Viele Grüße
Kay
Hallo Alexander,
große KLasse!
Bin begeistert!
lG
Anne
Hallo Alexander, das sieht wirklich beeindruckend aus!
Pilzliche Zellwände lassen sich übrigens ganz gut mit Kongorot anfärben. Einfach in das Wasserpräparat auf dem Objektträger seitlich am Deckglasrand etwas Kongorotlösung aufbringen und an der gegenüberliegenden Seite mit einem Stückchen Zellstoff (Tempo etc.) durchs Präparat saugen.
Grüße
Martin
Super!