Guten Abend Mikroskopiker,
durch ein freundliches Forumsmitglied bin ich für mein Laborlux an einen Ploemopak gekommen, sodass ich jetzt auch Fluoreszenzmikroskopie durchführen kann.
Zusätzlich habe ich kürzlich das Objektiv Leitz Fluoreszenz 10x/0.45 Oel erworben, damit muss ich mich nun wohl endlich mit dem Thema Immersionsöl beschäftigen.
Anscheinend ist nach meiner Recherche das Zeiss Immersol 518F für diesen Zweck sehr gut geeignet aufgrund der geringen Autofluoreszenz, aber meine Herren ist das Zeug teuer. Das wird ja fast mit Gold aufgewogen und kostet mit Versand dann so viel wie das Objektiv.
Hat hier jemand eine günstige Bezugsquelle? Kann man vielleicht irgendwo Kleinmengen erwerben? Wenige mL würden denke ich erstmal lange reichen. Oder gibt es vielleicht ein anderes Öl, das auch für Fluoreszenz geeignet und günstig in kleinen Mengen verfügbar ist?
Ich freue mich auf eure Erfahrungen!
Anbei findet Ihr noch ein Bild von Moos (Autofluoreszenz vom Chlorophyll) mit besagtem Objektiv trocken aufgenommen - bin zugegeben überrascht, dass das gar nicht mal schlecht klappt.
20250123_202434.jpg
Viele Grüße,
Tim
Hallo Tim,
für Blau und Grün-Fluoreszenz gehen fast alle Öle, je weiter man richtung UV geht desto schwieriger wird das mit dem Öl, aber bei den längeren Wellenlängen funktionieren die normalen Objektive ja auch noch problemlos.
Hier bekommt man ein günstiges Fluoreszenzfreies Öl https://www.omikron-online.de/ (einfach Immersion in die Suchleiste eingeben) obwohl ich zugeben muss das ich es bis jetzt nur bis V genutzt habe, ob es unter UV auch Fluoreszenzfrei ist, kann ich also nicht mit Sicherheit sagen.
Bei dem Shop bekommt man gleichzeitig auch noch einige interessante Färbelösungen und Farbstoffe, so spart man gleich Versandkosten.
Viele Grüße
Kay
Hallo Tim,
ein sehr schönes Bild (wenn Du etwas am Regler drehst, s.u. ;))
Mit Laborlux meinst Du wahrscheinlich ein "neueres" 160mm Gerät, oder? Bei Gelegenheit könntest Du uns ein Bild von Deinem Aufbau zeigen.
Beste Grüße Stefan
clahe.jpg
Hallo Tim,
Ich benutze das Immersionsöl von Carl Roth. Da kosten 15 ml ca. 15 Euro und es ist sehr gut für Fluoreszenz geeignet.
Viele Grüße
Alexander
Auch von mir ein herzliches Willkommen Tim,
Auch ich würde mich über eine Aufnahme deines Mikroskops sehr freuen.
Ist immer interessant zu schauen was es da alles an Möglichkeiten gibt.
Das Moosbild sieht schonmal vielversprechend aus.
Was die Suche nach dem optimalen und bezahlbaren Fluoreszenzöl angeht, bin ich auch gespannt.
Ich habe bisher aber auch mit "normalen" Immersionsölen ganz gute Ergebnisse erzielt, auch was Anregungswellenlängen unter 400nm angeht bei kräftigem Fluoreszenzleuchten von Fluorochromen/Autofluoreszenz.
Freut mich das sich so viele Forumsmitglieder mit dem Thema beschäftigen.
LG Holger
Peter war so nett und hat mir vor ein paar Tagen etwas von dem Immersionsöl von Merck zugeschickt. Das werde ich auch mal auf seine Fluoreszenzeignung hin prüfen. Auch im UV.
Vorher habe ich das alte Zeiss 518C benutzt.
Für normale Anwendungen ist das Merck definitiv ein großer Gewinn! Vor allem die Fließeigenschaften sind viel besser.
Aber ob's auch für UV taugt muss ich noch ausprobieren.
Holger
So, ich hab jetzt das Immersionsöl von Merck getestet.
Die Testbilder wurden bis auf etwas indirektem roten Licht im Dunkeln angefertigt.
UV-Schutzbrille zwecks Selbstschutz aufgesetzt (solche recht starken UV Quellen sind potenziell augenschädlich)!
Kamera im manuellen Modus.
Nichia 3Watt LED 365nm bei voller Leistung.
Feste Belichtungszeit von 1/4sec bei allen Aufnahmen.
Bild 1-3 Iso10000, Bild 4-6 Iso4000
Kein Anregungsfilter,
Strahlteiler 400nm
Sperrfilter nur ein UV-Schutzglas
Objektiv:40er Fluor Apertur 1.30 Öl
1.Bild(Referenzbild):
Aufnahme "trocken", kein Öl, kein Deckglas, das Anregungslicht leuchtet sozusagen ins Nirvana. Dementsprechend schwarz wie die Nacht. Kein ungewolltes Streulicht also, toll.
IMG_20250124_002850.jpg
2.Bild
Auch trocken. Aber diesmal mit Objektträger. Jetzt sieht man die Restanteile anderer Wellenlängen im Licht der LED die vom leeren Objektträger zurückreflektiert werden, event. auch Eigenfluoreszenz des Glases.IMG_20250124_002841.jpg
3.Bild
Objektträger im gleichen Abstand wie im 2.Bild jetzt aber mit einer dünnen Schicht Merck-Öl.IMG_20250124_002833.jpg
Der helle Punkt in der Bildmitte dürfte ein winziger fluoreszierender Staubpartikel im ÖL sein.
Ansonsten sieht man hier einen blaugrauen Schleier über das gesamte Bildfeld. Das dürfte die Eigenfluoreszenz des Immersionsöls sein, bei den üblichen Schichtdicken eines Immersionsobjektives
Bisher wurden alle Aufnahmen bei Iso10000 angefertigt.
Die folgenden Aufnahmen sind alle bei Iso 4000 entstanden.
4.Bild
Hier hängt ein größerer Tropfen Immersionsöl frei unter der Frontlinse des Objektivs.
IMG_20250124_002802.jpg
Unter diesen Umständen sieht man die Eigenfluoreszenz des Immersionsöls deutlich.
Aber solch hohe Schichtdicken an Öl hat man in der Praxis ja nicht.
5.Bild
Nur mal so zum Spaß, Kürbiskernöl.
Ganz dünne Schicht, Objektiv berührt den Objektträger.
IMG_20250124_002822.jpg
Ein intensives sattes Rot. Kürbiskernöl ist also zum Immergieren für Fluoreszenzanwendungen weniger gut geeignet. Wer hätte das gedacht!😂
6.Bild
Olivenöl extra vergine, dünne Schicht bei aufsitzendem Objektiv.
IMG_20250124_002812.jpg
Leuchtet magentafarben. Sachen giebt's.
Inwieweit sich bei der normalen Anwendung sichtbare Einschränkungen der Bildqualität bemerkbar machen hängt natürlich auch ganz wesentlich von der Probe ab. Je stärker deren emittiertes Licht, desto geringer der Einfluss der "Störemissionen" des Öls.
Erleuchtete Grüße Holger
Hallo Kay,
vielen Dank für den Vorschlag. Ich schaue Mal bei Omikron.
Hallo Stefan,
da ist natürlich noch einiges rauszuholen! Mein Foto ist so direkt aus der DSLR, mit dem RAW geht sicherlich noch einiges!
Hallo Alexander,
Roth beliefert doch eigentlich keine Privatkunden. Geht eine solche Bestellung trotzdem durch?
Hallo Holger,
Vielen Dank für die wirklich aufschlussreichen Versuche. ISO 10000 bei 3W UV ist schon einiges finde ich. Ich denke das ist ein absolut akzeptables Ergebnis für das Merck-Öl - bei einem realen Präparat würde die Eigenfluoreszenz vermutlich kaum noch aufgefallen (falls überhaupt).
Ich versuche mal am Wochenende mein Setup vorzustellen. Das hatte ich sowieso schon geplant, da sich mittlerweile die eine oder andere Modifikation in der Mache befindet.
Viele Grüsse und Danke für die rege Beteiligung!
Tim