Hallo,
ich war hier vor kurzem ja schon einmal auf der Suche nach Mitochondrien. Holger hat mich diesbezüglich auf einen interessanten Thread im Tümplerforum aufmerksam gemacht: Mitochondrien (https://www.mikro-tuemplerforum.at/viewtopic.php?f=23&t=1101&p=3992#p3992).
Zufällig arbeite ich gerade meine Farbstoffliste an einer Herde Paramcien ab und möchte Euch meine ersten Bilder zeigen. Ohne Interpretation und Wertung.
Die Pantoffeltiere halte ich in Teichwasser mit ganz wenig Heu und füttere mit ungefärbter Hefe. Die Kultur ist schon zwei Wochen alt. Die Inkubationszeit bei allen Versuchen betrug ca. 1h. Alle Aufnahmen mit dem Apo 40/0,95 am Fluoval. Die Belichtugszeit liegt zwischen 0,2 und 0,5 Sekunden bei 3W/750mA LEDs.
Wenn jemand etwas dazu sagen kann: gerne. Aber bitte nicht sofort antworten, ich muss die Bilder auf mehrere Seiten verteilen.
Mein DAPI hat übrigens völlig versagt, ich glaube, das ist hin.
Schönen Abend
Carsten
Bild 1: Acridinorange, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_acridinorange.jpg
Bild 2: Acridinrot, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_acridinrot.jpg
Bild 3: Auramin O, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_auramin.jpg
Bild 4: Coriphosphin, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_coriphosphin.jpg
Bild 5: Eosin, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_eosin.jpg
Bild 6: Ethidiumbromid, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_ethidiumbromid.jpg
Bild 7: Hoechst 33342, 365 nm, Filter 410 nm
aa_pt_hoechst33342.jpg
Bild 8: Primulin, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_primulin.jpg
Teil 2
Weiter get es. Nicht alle Farbstoffe sind wirklich tauglich. Und viele, besonders die typischen DNA-Farbstoffe, vermögen den Zellkern nicht zu färben.
Grüße
Carsten
Bild 9: Rhodamin 123, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_rhodamin123.jpg
Bild 10: Rose Bengal Avocado, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_rosebengalavocado.jpg
Bild 11: Sybr-Green, 430 nm, Filter 450 nm (war vermutlich etwas viel...)
aa_pt_sybrgreen.jpg
Bild 12: Xylenolorange, 430 nm, Filter 450 nm
aa_pt_xylenolorange.jpg
Hallo Carsten,
Wow! :o
Was für ein Bouquet!
Da hab ich jetzt aber jetzt einiges an Anschauungsmaterial...🧐
Dein Fluoval mit LED's ist wirklich beeindruckend.
Ganz großes Kino! Vielen Dank für's teilhaben lassen!
Mikrogrüße Holger
Hallo Carsten,
hab ja von Fluoreszenz keine Ahnung, aber rein vom Optischen her tendiere ich zu Hoechst. 8)
Hallo Peter,
rein optisch hast Du vermutlich recht. Aber ich werde eher mit Sybr-Green weiter experimentieren: da scheinen doch Strukturen auf der Oberfläche sichtbar zu werden, ganz im Gegensatz zu dem berühmten Rhodamin 123.
Carsten
Hallo Carsten,
Um nochmal auf das berühmte Rhodamin123 zurückzukommen...
In Bild Nr.9 leuchtet es tatsächlich rot und nicht bloß grün in der ein oder anderen Nahrungsvakuole...
Auch in Bild Nr.11 und Nr.12 sieht man einzelne Vakuolen die rot emittieren.
Wieso, weshalb, warum?
Keine Ahnung,
würde mich aber auch sehr interessieren.
Das Bild Nr.11 mit dem Sybr-Green zeigt ausserdem auch Umrisse und Helligkeitsunterschiede innerhalb der Zelle, die wohl nicht durch Fluoreszenz in der Fokusebene entstanden sind. Ich frage mich woher da das Licht stammt.
Coriphosphin (Bild 4) und Primulin (Bild8 ) sind sich wirklich sehr ähnlich. Bei diesen beiden sind ausserdem kleine runde "Donut Strukturen" innerhalb der Zelle sichtbar.
Da ist wirklich viel zu entdecken in deinen Beitrag.
Zum Schluss noch ein paar Fragen:
Was genau machst du eigentlich an EBV bei diesen Aufnahmen?
Und sind alle deine Aufnahmen mit den am Anfang beschriebenen Kameraeinstellungen aufgenommen worden? War die Iso Einstellung fest eingestellt, oder nutzt du Iso Automatik?
LG Holger
Moin,
die Kamera steht fest auf ISO 1000. Die Belichtungszeit schwankt bei den Bildern zwischen 0,1 und 0,4 Sekunden. Alles, was länger ist, führt zu starkem Rauschen und Hintergrundleuchten. Bildbearbeitung: Kontrasterhöhung und leichtes Entrauschen.
Grüße
Carsten
Hallo Carsten,
sehr schöne Aufnahmen und überaus interessant!
Viele Grüße
Michael