Hallo liebe Forumsteilnehmer, liebe Mykologen,
Zwecks Ermittlung von optimalen Wachstumsraten bei einigen Pilzen muss ich diverse Nährmedien ausprobieren. Hab gute Erfahrungen mit MEA (Malzextrakt-Agar) von Merck (#5398) gemacht. Der MEA von Merck ist glasklar, in allen Konzentrationen (1:1, 1:2, 1:5, usw). Vorrangig müsste ich CMA (Corn Meal-Agar) ausprobieren. Hab dazu eine Charge von Fluka (Sigma-Aldrich) bestellt und muss nun leider feststellen dass dieser in diversen Konzentrationen (1:1, 1:2, 1:5) immer sehr trübe ist und sich nur schlecht für die Mikroskopie eignet und noch weniger für Mikrofotografie geeignet ist (159.- Euro in den Wind geschrieben )-:
Mir wurde angedeutet, dass CMA von Difco nicht trüb sein soll. Hat jemand Erfahrungen mit CMA von Difco? Ist der eher trübe oder etwa glasklar? Hauptsächlich in der 1:2 Konzentration.
Besten Dank für eventuelle Hinweise.
Guy
Ich nehme an in diesen Fertigmischungen ist der Agar schon enthalten?
Meist liegt die Trübung am Agar, es gibt welche die werden beim Abkühlen wieder opak, weil Bestandteile wieder ausfallen.
Ansonsten rühren Sie ja mit Aqua Bidest und nicht mit Leitungswasser an?
Der standard Agar von Carl Roth wird bei mir nicht trüb, sondern bleibt klar. Wie wäre es mit Medien selbst machen als Alternative? MEA und CMA ist ja nichts, was man nicht schnell zusammengerührt hätte.
Man bekommt von den Herstellern auch oft eine kleine Menge zum ausprobieren umsonst, wenn man nett anfragt und seine Applikation schildert.
Hallo Dominik,
Tja, wil die Sache nicht zu sehr vertiefen, würde schnell off-topic werden, dennoch hier Antworten auf die Fragen.
- Der Agar-Agar ist in einem Nährmedium enthalten.
- Verdünnt man, geschieht das durch Zugabe von Wasser (das ist immer destilliertes Wasser) und damit das geliert, muss man errechnete Mengen Agar-Agar hinzugeben.
- Ich nehme dazu den AA von Merck (#1615), der ist völlig rein. Sogenannter Wasseragar (ohne Nährstoffe) ist auch klar wie Wasser.
- Die Trübung liegt quasi immer an der Qualität oder Körnelung (....) der Zusätze.
- Nährmedien selbst zusammenstellen ist mir derzeit zu zeitraubend.
- Es geht darum herauszufinden (ohne wieder Lehrgeld zu zahlen), ob der CMA von Difco beim Erhitzen klar wird oder nicht. Hätte ja sein können, dass jemand aus dem Forum hier, schon Erfahrungen damit gemacht hat.
Da CMA Vorteile gegenüber MEA für das Wachstum diverser Pilzarten hat, werde ich auf klarem MEA auskeimen lassen und Mikrofotos anfertigen und dann auf CMA überimpfen und den Zuwachs dort im Auge behalten.
Besten Dank für die Idee, bei Difco mal eine Probe zu erfragen!
Ciao,
Guy
Vielleicht kam mein Post falsch rüber. Mir ist völlig klar was Sie in diesem Thread gefragt haben.
Die Fragen habe ich gestellt um die Ursache der Trübung zu erörtern. Ich arbeite schon seit Jahren mit kommerziellem Agar und Nährböden (hauptsächlich in vitro cloning von Pflanzen).
Und ja manche Leute nehmen auch normales Leitungswasser zum verdünnen und wundern sich dann über Trübungen, wollte das nur ausschließen.
Aber ich würde wirklich einfach mal beim Hersteller anfragen, ich habe bisher immer eine Probe von den Sachen bekommen die ich wollte. Besonders wenn man bei Gefallen der Ware Aufträge in Aussicht stellt sind die Hersteller sehr spendabel.
Gruß Dominik
Hallo Dominik,
jaja, kann auch verstehen wenn für andere Anwendungen Leitungswasser ausreicht, aber das ist in meinem Fall völlig tabu. Hier werden Apothezien von Ascomyzeten über Agar suspendiert und die sollen dann Schiessen (=Sporenabwurf mittels "Asci"). Diese Sporen werden dann aufgesucht, markiert und fotografiert. Selbst wenn ich sehr dünne Platten giesse, komme ich bloss mit einem 25er LWD Objektiv an die Oberfläche, will nicht mal im Flowcap den Deckel von der Petrischale abmachen (.......). Auf trübem, nicht vollständig gelöstem CMA überhaupt Sporen zu finden (Bino, x40) ist die eine Sache, aussagekräftige Fotos machen die andere und die machen sich besser auf klarem Nährmedium (......).
Bin sicher dass Difco da spendabel ist, auf die Idee muss man erst kommen :-).
Einen schönen Sonntag noch!
Guy
Hallo Guy,
folgendes Vorgehen hat sich bei mir bewährt:
- Nähragar in aqua dest erhitzen bis die Lösung klar ist (kurz vor dem kochen) Wichtig: mit Magnetrührer rühren!
- Nähragar - Lösung sterilisieren
- Nährböden giessen
Viel Erfolg!
Freundliche Grüsse
Arnold Büschlen
Hallo Herr Büschlen,
Möglicherweise war ich vom MEA verwöhnt, weil der nach kurzem Aufkochen und einmal leicht schütteln sofort klar war. Ich werde Ihre Ratschläge beherzigen und hoffe dass das mit dem Fluka-CMA doch noch klappt. Danke für die Tips!
Schöne Grüsse,
Guy
Hallo Herr Büschlen,
hab es nun nach Ihren Vorschlähgen - 2x - versucht den CMA von Fluka klar zu bekommen. Einmal sehr langsam (c.40´ bei 85°C ) aufgekocht unter konstanter Umrührung. Dann 15´ autoclaviert (121°C)..
Ein zweiter Versuch mit 10´ Aufkochen bei 103°C (siedete soeben) - der Rührfisch kam nie zur Ruhe - gefolgt von 15´ Autoclavierung. Beide Versuche ergaben aber leider die gleiche Trübung wie ich sie auch in der Mikrowelle erhielt. Muss nun doch noch den Difco CMA ausprobieren. Besten Dank jedenfalls für die guten Ratschläge. Einen schönen Abend noch!
Ciao,
Guy