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Foren => Mikrofoto-Forum => Thema gestartet von: Eckhard in November 29, 2010, 10:56:57 VORMITTAG

Titel: Erste Experimente mit Auflichtfluoreszenz
Beitrag von: Eckhard in November 29, 2010, 10:56:57 VORMITTAG
Hallo,

hier nun das erste Resultat meiner Spielereien mit Auflichtfluoreszenz. Beleuchtet wurde mit einer 100W Halogenlampe, einem 450-490 nm Anregungsfilter und einem 515 nm Sperrfilter. Oder einfach ausgedrückt, die Probe wurde blau angestrahlt und Blau wurde aus dem Beobachtungsstrahlengang weggezaubert.

Bei der Probe handelt es sich um gereiftes Tümpelwasser. Auf dem Objektträger wurde ein Tröpfchen Acridinorange in wässriger Lösung zugegeben. Diesmal hatte ich anscheinend die richtige Konzentration.

(https://www.mikroskopie-forum.de/pictures002/51822_10859455.jpg)
63x Planapo 1.4

Zitat von: Romeis - Mikroskopische Technik, 18. AuflageDie supravitale Fluorochromierung mit Acridinorange (...) ist das klassische Verfahren der Vitalfluoreszenz. Intakte Lysosomen fluoreszieren orange, Zellkerne grün. Dieses Ergebnis ist nicht zu verwecheln mit der Acridinorangefluoreszenz fixierter (toter) Zellen, für die gilt: DNA (Zellkerne) gelb bis grün, RNA (Nucleoli, endoplasmatische Retikulum) rot. Beobachtet man im Vitalpräparat einen Übergang von der partikulären (lysosomalen) Orangefluoreszenz in eine diffuse Fluoreszenz des Cytoplasmas, kann dies als Zeichen des Absterbens der Zelle gewertet werden (...).

Mir als Nicht-Biologen und Nicht-Mediziner fällt die Interpretation natürlich schwer, aber ich will es mal versuchen. Bei dem sichtbaren Objekt handelt es sich um eine Amöbe. Die Amöbe hat 4 Algen gefressen, die sich in unterschiedlichen Verdaungsstadien befinden. Die "frischen" Algen zeigen noch Chlorophyllautofluoreszenz - bei der Alge ganz links erkennt man sogar als grünen Punkt den Zellkern. Die orangenen Pünktchen um zwei der Nahrungsvakuolen (bei der Alge unten sehr gut sichtbar) sollten laut Romeis Lysosomen sein. Der helle grüne Fleck ist der Zellkern. Was die kleinen Anhäufungen grüner Punkte sind weiss ich nicht.

Herzliche Grüsse
Eckhard
Titel: Re: Erste Experimente mit Auflichtfluoreszenz
Beitrag von: Holger Adelmann in November 29, 2010, 11:17:50 VORMITTAG
Hallo Eckhard,

nur so eine Idee - könnten die kleinen grünen Punkte vielleicht intrazelluläre Parasiten der Amöbe sein?
Ich erinnere mich da an einen recht aktuellen Mikrokosmosartikel.
Schreib doch mal eine PN an Ferry, ich weiss nicht ob er bei dem gewählten Titel für Deinen Post reinschaut.

Herzliche Grüsse
Holger
Titel: Re: Erste Experimente mit Auflichtfluoreszenz
Beitrag von: Eckhard in November 29, 2010, 12:09:47 NACHMITTAGS
Hallo Holger,

Zitatkönnten die kleinen grünen Punkte vielleicht intrazelluläre Parasiten der Amöbe sein?

da dies meine erste fluoreszierende Amöbe ist weiss ich nicht ob dies ein Art- oder Gattungsmerkmal ist bzw. ein Merkmal des fotografierten Individuums.

Das mit Ferry ist eine prima Idee!

Herzliche Grüsse
Eckhard