Ich habe mal Technovit ausprobiert und bin eigentlich ganz zufrieden. Leider sind die Schnitte mit 1-2 um so dünn, dass meine normale HE Färbung extrem blass ist. Dickere Schnitte rollen zu stark.
Habt ihr Tipps für gute Färbungen von tierischem Gewebe, die so geschnitten wurden? Insbesondere HE?
Eine May-Grünwald Giemsa Färbung in Form einer DiffQuick Schnellfärbung geht ganz gut, Toluidinblau natürlich auch. Sind aber halt keine histologischen Standardfärbungen...
Grüße,
Micha
Hallo Micha,
ich benutze immer Toluidinblau / Borax,
das gibt einen guten Kontrast.
Ronald Schulte hat da aber so einiges ausprobiert,
z.B. hier
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=15756.0
Die genauen Färbevorschriften kannst du ergoogeln.
Wie bettest du ein und wo mit schneidest du?
Gruß Ralf
Na einbetten mit Technovit 7100 über Alkohol. Mit den Klingen habe ich aber Probleme. Habe normale Leica 819 probiert, aber ich bekomme ungleiche Schnitte, Rattermarken und aufgerollte Schnitte. Histoblades habe ich nicht probiert, aber einen Klingenhalter für 600 Euro kaufe ich ganz sicher nicht...
Guten Abend
Für das Einbetten gibt es eigene Formen, ich habe da zwei unterschiedliche Größen. Die haben Metalleinlagen welche die Kälte gut halten. Es gab einen eigenen Klingenhalter und auch sehr scharfe Einmalklingen. Leider wurden die guten Klingen durch stumpfe ersetzt ...
Mit dem A und B Messer habe ich 0,008 mm dicke Schnitte gut hinbekommen, die Blöcke waren in der Tiefkühltruhe und es wurde gleich nach der Entnahme geschnitten. Mit Glasmesser ging das auch dünner ...
Liebe Grüße
Gerhard
Tiefkühltruhe für Plastikschnitte? Ich habe eher das Problem, dass der Kunststoff zu hart ist...
Guten Abend
Aber die rollen sich weniger ein, der Mikroskopiker der mir das damals gezeigt hat sah das als Lösung. Ich hatte nicht das Gefühl das sich dadurch die Härte verändert hat. Wie du beschreibst sind die Blöcke hart.
Liebe Grüße
Gerhard
Das ist ja mal interessant. Immerhin haben die Messer die ich nehme auch einen 35° Winkel, die sind also stabil. Ich rufe evtl. mal bei der Firma an und rede mit denen. Eigentlich eine Unmöglichkeit, wie wenig Informationen die zu ihren Produkten bereitstellen.
ps: kann es sein, dass die durch die Kälte Wasser gezogen haben, aus der Raumluft? Wenn ich sie anhauche habe ich auch den Eindruck, dass es weniger rollt.
pps: Tatsächlich! Wenn ich den Block kurz vor jedem Schnitt anhauche, bekomme ich perfekte Schnitte von 3 µm! Das ist ja ein Ding.
Na da ist doch der Gefrierschrank die einfacher Alternative, da musst du nicht jedes Mal anhauchen .-)
Liebe Grüße
Gerhard
PS: das es um die Feuchtigkeit geht habe ich damals auch nicht hinterfagt, jetzt verstehe ich aber auch einen weiteren Punkt, die besagte Person hat mit den Leitz Hartmetallmaeesern geschnitten ... & so erklärt sich auch die schnelle Abnützung von A und B Messern, das muss ich bei Gelegenheit auch einmal versuchen ==> C-Hartmetall Messer
Hallo Gerhard,
ja, aber die Hartmetallmesser kosten um die 1000E pro Stück,
und nachschleifen ist auch extrateuer.
LG Ralf
Hallo Ralf
Zum Glück habe ich schon investiert und besitze 3 Stück ;)
Bisher habe ich keines nachschleifen lassen müssen, wenn ,am die pfleglich behandelt ...
Liebe Grüße
Gerhard
Also die kleinen Blöcke bekomme ich geschnitten, aber über 2 cm2 wird's immer noch schwierig. Ohne Anhauchen geht gar nichts. Durch das Anhauchen werden die Schnitte aber auch leicht klebrig, was das Strecken verkompliziert. So wirklich optimal ist mein Prozess nicht. Irgendwie bekommen meine Messer auch super schnell Scharten. Naja, Hundehaut hat vielleicht ein bisschen Dreck dran...
Eventuell ist ein manuelles Schlittenmikrotom auch nicht so dass gelbe vom Ei für Kunststoff. Aber irgendwie werde ich es schon hinbekommen. Ich freue mich auf jeden Fall über jeden Tipp!
Moin,
Habt Ihr schon einmal Messer für Elektrohobel ausprobiert? Die sollen auch 35 Grad haben,gibt es für Abricht.- und Dickenhobel bis 30cm eventuell sogar noch länger.Soll es aus gehärtetem Stahl und auch als Hartmetallmesser geben.Vielleicht ist es ja eine Alternative für die Kunststoffblöcke?
Viele Grüße Jörg
Hallo Jörg,
die Idee hatte ich auch! Hast Du mal einen Link auf was Du genau meinst? Ich kenne mich damit leider absolut nicht aus!
Ich habe heute mal mit Morphisto gesprochen und dort nochmal gebeten, dass sie etwas mehr Infos zum Technovit ins Netz stellen. Die Dame war sehr nett und äußerst hilfreich. Sie sagt, dass außer Hartmetallmessern und Histoblades nichts zuverlässig funktioniert. Sie schien auch eher zu Hartmetall als Histoblade zu tendieren - das war jedenfalls mein Eindruck. Sehr cool, wenn eine Firma nicht nur versucht ihre eigenen Produkte zu pushen sondern ehrlich berät.
Sie hat mir jetzt auch die Maße der Histoblades geschickt: 60x19x1 mm. Das passt natürlich nirgendwo rein, außer in den Spezialhalter. Der ist mir mit 600 Euro aber zu teuer.
Einen Tipp in Bezug aufs Anhauchen hatte sie aber noch: Block mit Wasser bestreichen. Damit gelingt mir bisher das beste Ergebnis. Zwar sind dann die ersten beiden Schnitte nach der Wässerung und abtupfen Matsch, aber der 3. bis 5. Schnitt ist sehr gut.
Sie hatte auch empfohlen, von einer Ecke aus u schneiden, also nicht die Kante vollflächig anzuschneiden. Ich habe das Mikrotom jezt mal auf 15° Deklination gestellt. Das geht eigentlich ganz gut. Leider ist mein aktueller Block jetzt durch, ich muss erst wieder aufs nächste Präparat warten...
Hmmm - 2 cm2 sind für 1 µ dicke Plastikschnitte auch schon to much ...
Wie fixierst Du denn so große Stücke?
Der Vorteil der Semidünnschnitte ist ja primär die Möglichkeit zur feinhistologischen Untersuchung, allerdings nimmt man da normalerweise viel (!) kleinere Gewebestücke, damit das Fixativ schnell und vollständig eindringen kann.
Bei einem 2 cm2 großen Gewebeblock bezweifele ich, dass der für die Feinhistologie brauchbar fixiert wird. Auf jeden Fall nicht mittels der üblichen Immersionsfixierung.
Es wird besser wenn Du eine Perfusionsfixierung in situ machst aber auch dann ist so ein großes Gewebestück nicht ideal, da auch hier meist ohnehin noch per Immersion nachfixiert wird ....
Viele Grüße,
Holger
Moin mlippert,
Ich habe leider keinen Link.Da ich noch kein Mikrotom habe,habe ich auf einen Bastelkanal beim Hobelmessertauschen überlegt,ob diese für Mikrotome funktionieren würden.Gibt es aber bei A..... Elektrohobelmesser sind kürzer glaube so um die 80mm,Abricht.-und Dickenhobelmesser sind bis zu 300mm lang.Bei Elektrohobel bei den üblichen Firmen gucken,Makita,Metabo,Bosch,DeWalt. Bei den Abrichthobeln kenne ich als günstige nur Holzmann und Scheppach und Güde. Vielleicht klappt es ja,bin mal gespannt.
Viele Grüße Jörg
Hallo,
ich habe mal geschaut und Hobelmesser gefunden. Ich weiß aber nicht, wie scharf die sind... Muss ich mal probieren zu bestellen!
2 cm³ lassen sich natürlich nicht vernünftige fixieren. Aber 2 cm² schon! Und zwar, indem Du die Gewebescheibe von Anfang an dünn schneidest. Einfach ein 2 mm Scheibchen immersionsfixieren. Funktioniert gut genug für meine Zwecke.
Die Größe der Blöcke ist jetzt auch nicht so das Problem. Bei kleinen 5 mm dicken Blöcken bekomme ich es ganz gut hin, aber sobald der Block eine höhere Breite hat, fängt das Messer an, rumzueiern. Wie gesagt, mit Wasser einpinseln und ab und an kommt ein vernünftiger Schnitt. Die Blocklänge ist gar nicht mal so das Problem!
Ich habe es jetzt mal mit "Ralph knives" versucht, also Glasmessern, die aus einem Objektträger gebrochen werden. Leider ist die Schneide zu klein und es schabt nur. An sich aber gar nicht schlecht. Hat das jemand schon mal probiert? Ich rede nicht von Glasmessern für Ultramikrotome, deren maximale Klingenbreite die Dicke des Glases ist, sondern von breiten Glasmessern, die aus Scheiben gebrochen werden. Am unteren Rand des Bruches bildet sich an einer Seite immer eine mehr oder große Klinge aus.
Ich schau mal, ob ich einen Messerhalter gefräst bekomme. Dann könnte ich mal in eine Packung Histoknives investieren...
Hallo Micha
Die Kulzer Klingen haben leider über die letzten 10 Jahren viel ihrer ursprünglichen Schärfe verloren, das haben im Forum über die Jahre schon viele berichtet. Ich habe aber nie so große Objekte geschnitten. Ich habe die originalen Formen zum Einbetten aber die sind für viel kleinere Blöckchen. Um das Rattern bei größeren Proben zu verhindern hilft nur das Hartmetallmesser ...
Meine Messer sind von Leitz Microsystems, jetzt Leitz Biosystems. Mit Glück bekommst du sowas auch in e-Bay ...
Liebe Grüße
Gerhard
Ich warte jetzt auf ein Hartmetall-Hobelmesser und eine Packung der Blades. Mal sehen ob das funktioniert. Wenn nicht, ist das doof, denn dann muss ich zurück zu Cryo. Paraffin ist zu aufwendig und zu giftig.
Interessanterweise wurden vor dem ganzen aktuellen Luxus teurer Einmalklingen und Hartmetallmesser ja Glasmesser verwendet. Bis 40 mm Klingenbreite! Das wäre dann der nächste Schritt, irgendwie solche Meyer zu reproduzieren.
Hallo Micha,
wie willst du denn das Hobelmesser in das Mikrotom einspannen?
Ich benutze zwar die Kulzerklingen, aber die sind fertigungstechnisch wirklich sehr stumpf geworden.
LG Ralf
Für meinen japanischen Hobel habe ich Wechselklingen.
Diese sind unfassbar scharf und sehr langlebig.
Bestimmt auch brauchbar als Mikrotommesser.
https://www.dictum.com/de/hobeleisen-und-spanbrecher-baeo/hss-klingen-satz-fuer-putzhobel-kanetomo-kanna-5-stueck-50-mm-717019
Hallo Thomas
Die verlinkten Klingen sind nur HSS, das ist nicht annähernd mit Hartmetall Mikrotommesser zu vergleichen ...
Das kann nur schief gehen, Hobelmesser entsprechen der Messertype "D" und die funktionieren gat nicht mit Kunststoff ... ich habe von "A" und "B" geschrieben, die nützen sich aber sehr schnell ab - von der Härte sind sie mit HSS vergleichbar bis besser ...
Leider, liebe Grüße
Gerhard
Hallo,
Also es gibt etwas Fortschritt. Ich habe im Baumarkt ein kleines Schatullchen aus Glas gekauft. Das ist ca. 3mm dickes Kalk Soda Glas. Daraus lassen sich sehr gut Ralph knives brechen, siehe Bild. Das klebe ich per UV Kleber unten an meinen Feather Klingenhalter, wo es sich auch einfach wieder abbrechen lässt und restlos entfernen. Die kleine Schneidlippe macht tatsächlich Kleinholz aus dem Technovit. Bei 2 um bekomme ich ca. Jeden dritten Schnitt in guter Qualität. Leider ergibt sich auch hier schnell wieder das Problem, dass die Klinge durch Staub im Präparat beschädigt wird und Steuern zieht. Evtl kommt das auch schon durchs Brechen. Von der Größe her ist es nicht problematisch. Blöcke von 2x3 cm bekommt man geschnitten, 1.5 cm easy.
Ich warte jetzt Mal auf die Histoblades und fräse derweil den Halter dafür. Bzw. versuche ich es. Stahl ist so eine Sache und winklig klemmen auch.
Bzgl Hobelmesser: ja, das ist Typ D. Aber das ist doch genau, was ursprünglich immer für harte Sachen und Kunststoff empfohlen wurde!
Laut Firma ist die Hartmetallvariante nicht stumpfer als die HSS. Mal sehen...
Klemmen lässt sich das Ding wie ein normales Mikrotommesser. 16 cm breit, 3 mm dick, 30 mm tief.
Moin,
Ja heutzutage kann Mann HM rasiermesserscharf schleifen.Unsere HM-Fräser für Aluminium rasieren problemlos Haare vom Unterarm.Im meiner Lehrzeit zum Fräser 1987-1991 war dies noch nicht möglich,da das HM Pulver nicht so fein gemahlen werden konnte.HM wird ja gesintert(ähnlich wie Backen)und nicht geschmolzen.Daher gab der Korndurchmesser mit vor wie scharf geschliffen werden konnte,ging aber auch noch um Ausbruchfestigkeit Standzeit usw.Ich bin auf den Hobelmessertest gespannt.
Mit freundlichen Grüßen Jörg
Da Feiertag war, kam gestern keine Post, daher habe ich noch ein paar Ralp Knives gebrochen. Da kommt es sehr darauf an, mit welcher Technik und mit welchem Winkel man das Glas bricht. Wenn ich das etwas besser unter Kontrolle habe, mache ich dazu ein eigenes Thema auf.
Wenn man aber Messer mit ca. 0.1 bis 0.2 mm langer Klinge hat, schneiden die erstaunlich gut. Das ist etwa die Breite, wo man anfängt sich zu wundern, ob überhaupt eine entstanden ist. Ist die Schneidlippe länger, wird der Messerwinkel so flach, dass es anfängt auszubrechen. Der Tradeoff ist zwischen zu steilem Winkel, bei dem der Schnitt zu stark rollt und gefaltet wird, und zu flachem Winkel, der perfekt schneidet aber schnell ausbricht und dann Scharten im Block macht.
Ganz ungefährlich ist die Angelegenheit auch nicht, da bei einer ungünstigen Bewegung da ganz schnell ultrascharfe, winzig kleine und durchsichtige Glassplitter umherfliegen. Schutzbrille ist mehr als empfehlenswert!
Trotzdem sind diese Glasmesser die beste Möglichkeit, mit der jeder bei minimalem Aufwand Technovit schneiden kann!
Hier wäre ein schönes Bild, mit Handy geschossen, von einem Katzenovar. Man sieht ganz leicht einen Kratzer wo die Glasklinge beschädigt ist.
Jetzt habe ich aber ein neues Problem mit meinem großen Schnitten: da wo Gewebe ist, quillt das Präparat beim Strecken stärker. Das ergibt dann im getrockneten Schnitt - Bild 2 - diese Falten. Bei 4um wird das störend, aber gerade ab 4um lässt es sich wirklich perfekt schneiden. Jeder Schnitt ein Treffer...
Jemand eine Idee was ich da tun kann?
Hallo,
du must den Schnitt auf einer Wasserpfütze deines Objektträgers strecken,
dann auf eine Heizplatte, so 60 Grad für 30 min trocknen.
Bei mir gelingen die besten Technovitschnitte so bei 1 bis 1,5 µm.
gib mal in Google ein:
ronald schulte technovit dann auf Bilder
Gruß Ralf
Das auf dem OT geht bei mir ganz schlecht. Da bleiben zu viele Falten. Aber die Dicke könnte tatsächlich das Problem sein, speziell bei der Größe.
So langsam wird es. Bisher sind die Ralph Knives die beste Lösung. Hobelmesser wurde falsch geliefert, als HSS, ist aber definitiv nicht scharf genug. Warte jetzt auf HM.
Histoblades sind am sich nicht so schlecht, passen aber in keinen Halter. Lösungen mit Klebstoff funktionieren bei den Histoblades absolut nicht, was mir etwas Sorgen macht. Die Schnitte funktionieren zwar, aber die Oberfläche ist rauh und es gibt Dickenschwankungen zwischen den Schnitten. Ich werde mal einen Halter fräsen und weiter probieren.
Anbei schon mal ein Toluidinblau gefärbter Schnitt von 2 µm mit Ralph Knive durch ein Katzenovar. Foto mit Leitz 2,5x Plan von Diana.