Hefezellen ausgetrickst

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
nun ist es mir doch noch gelungen, Hefezellen für die Paramecium-Fütterung zu färben.
Mit kurzem Aufkochen läßt sich Hefe hervorragend mit Rhodamin 6G färben.

Bild 1 im Hellfeld INKO.

Die anderen Bilder Auflicht-Fluoreszenz mit 430 nm LED, CZJ Filterwürfel 450-3/0 und Filter G243. Belichtungszeit 0,8 sec. bei 1000 ASA.

Viel Spaß beim Betrachten,
Carsten

[reblaus]

Hallo Carsten -

versuchs doch mal mit Fluorescein-Diacetat an lebendigen Hefen. Hatte das mal an Zellkulturen höherer Pflanzen gemacht um den Prozentzahl an lebenden Zellen zu bestimmen. Das polare FDa kann die Zellmembran durchdringen und im intakten Protoplasten wird der Acetatrest abgespalten, das Fluoreszein kann dann nicht mehr raus.
Leider habe ich keine Möglichkeit mehr das selbst zu testen, wäre aber doch neugierig ob es mit Pilzen auch klappt ...

Viele Grüße

Rolf

[Carsten Wieczorrek]

Hallo Rolf,
klingt interessant.

Aber 1 g zu 95 EUR. Hat das zufällig jemand rumliegen?

Grüße
Carsten

[David 15]

Hallo Carsten,

das sieht klasse aus!

Eine Frage zum Färbeergebnis: Hast du noch mit einem zusätzlichen Farbstoff angefärbt? Innerhalb des Parameciums sind deutlich kleinere, rot gefärbte Punkte zu sehen. Rhodamin 6G sollte ja einen grünen Farbton bei Blauanregung liefern oder verhält sich das ähnlich wie Acridinorange?

Auch wenn der Versuch mit FDA sicher interessant wäre, kann man auch gleich das deutlich billigere normale Fluorescein nehmen, die Hefen kochen, färben, Farbstoffreste abwaschen und dann verfüttern. Außer man möchte natürlich die Viabilität der Hefen vor Versuch bestimmen und sich Wascheschritte sparen, dann geht natürlich nur FDA

Liebe Grüße,
David

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
nö, da ist nur Rhodamin drin. Ich vermute aber, dass die Fluorezenz-Farbe auch vom pH-Wert des umgebenden Mediums abhängt. Und gewaschen habe ich die Hefe nicht, da sind sicherlich auch zerkochte Bruchstücke drin.

Carsten

[MiR]

Hallo Carsten,

finde ich interessant, habe mal etwas Fl-Diacetat hergestellt, Präparat habe ich nur gewaschen, ist jetzt deshalb nicht super sauber.
Aber in Sachen Chromatograpie sitzt du ja an der Quelle und denke mal in deinem Keller stehen auch die ensprechenden analytischen und präparativen Chromatographiegeräte. 
Falls du also noch interessiert bist ...

Viele Grüße aus Berlin
Michael