Vergleich dreier Kontrastmethoden an Hefe

[Florian D.]

Hallo Forumisten,

als alter Pilzler wollte ich meinen neuen Leitz Smith-DIK erst mal an Hefe ausprobieren. (Ja, ich weiss, ich müsste schon wieder ein paar Staubfäden jagen)
Alle sind mit einem 170/0.17 100/1.30 Öl-Objektiv aufgenommen
Hefe im Hellfeld (Phaco Objektiv):

Phasenkontrast (Phaco Objektiv):

DIK (Interferenz Kontrast T):


Die ersten beiden Bilder zeigen denselben Bildausschnitt, allerdings sind einige Hefezellen frei herumgeschwommen und wurden zwischen den Aufnahmen herein- oder herausgetrieben. In der Zelle etwas rechts der Mitte erkennt man eine grosse Vakuole und etwas, was vielleicht ein Zellkern sein könnte.
Im Hellfeld erscheint er als schwarzer Punkt, im Phaco als weisser, Kreis. Das ist allerdings fokusabhängig. Der Kontrast ist natürlich viel höher, aber auch die Haloartefakte.
Im DIK (anderes Präparat) erscheinen die Zellen sehr plastisch. Auch die Vakuolen und Organellen sind gut zu erkennen, allerdings ist es schwer zu sagen, ob es sich um Fetttröpfchen oder Kerne handelt.

Viele Grüsse
Florian

[Heiko]

Hallo Florian,
und ein weiteres Kontrastierungsverfahren – klassisch mit Baumwollblau.
Leider nur mit dem 63er und dann starker Okularvergrößerung aufgenommen.
Gruß, Heiko

[Florian D.]

Heute hatte ich endlich die Farbstoffe von Peter V., NaH2PO4 von MiR und frisches Entellan von Bioform zusammen und konnte gleich nach Feierabend die Boroviczeny Toluidinblau-Safraninfärbung ansetzen. Den beiden herzlichen Dank! Ich habe mich genau an den Kremer gehalten und die Hefe auf Eiweis fixiert. Die Zellen sind irgendwie verklumpt und von hellen Regionen umgeben, aber zumindest hat die Kernfärbung so einigermassen geklappt.

Viele Grüsse
Florian

Zunächst mit dem NPl Oel 100/1.30 170/0.17 im Hellfeld:


Zum Vergleich mit dem NPl Oel 100/1.30 P Interf. Kontrast 170/0.17 im DIK:

[Florian D.]

Irgendwie bekomme ich diese Boroviczeny Färbung absolut nicht mehr hin. Vielleicht funktioniert die nur mit frisch angesetzter Lösung? Bei analoger Färbung mit Giemsa habe ich einen entsprechenden Hinweis gesehen.
Hier noch zwei Bilder. Das erste könnte eine Zygote sein, im zweiten Bild wohl ein Syncytium, vielleicht einer anderen Hefeart als S. cerevisiae?




Gruss
Florian

[Florian D.]

Jetzt nochmal mit Hämatoxylin nach Delafield, dass mir die liebe Anne (danke!) besorgt hat. Ich habe das über nacht gefärbt, muss wohl noch etwas differenzieren, aber funktioniert hat es, im Prinzip.




Viele Grüsse
Florian