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Der vergessene Thymian *

Begonnen von Rolf-Dieter Müller, Juni 23, 2012, 01:00:17 VORMITTAG

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Klaus Herrmann

Lieber Rolf-Dieter,

eine schöne methodische Gegenüberstellung der Färbungen.

Erstaunlich finde ich, dass das Safranin so intensiv aufzieht.

Eigentlich finde ich die Variante mit dem Saranin noch ansprechender - obwohl die etwas kitschig wirkende Wacker sehr fein differenziert.

Mit herzlichen Mikrogrüßen

Klaus


ich ziehe das freundschaftliche "Du" vor! ∞ λ ¼


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Holger Adelmann

Danke lieber Rolf-Dieter, das hast Du sehr gut erklärt !

Herzliche Grüsse
Holger


Rolf-Dieter Müller

#17
Lieber Holger,
Lieber Klaus,

vielen Dank für Eure Kommentierungen.

Bevor ich eine Detailaufnahme der Pünktchen im Markstrahl zeige, möchte ich noch auf eine Anmerkung von Klaus eingehen.

Zitat von: Klaus Herrmann in Juli 10, 2012, 08:35:20 VORMITTAG
...
Erstaunlich finde ich, dass das Safranin so intensiv aufzieht.

Eigentlich finde ich die Variante mit dem Saranin noch ansprechender - obwohl die etwas kitschig wirkende Wacker sehr fein differenziert.

Klaus, ich finde auch etwas ungewöhnlich, das Safranin so intensiv aufgezogen ist. Es liegt wohl an dem etwas dickeren Schnitt, bei dünneren Schnitten der gleichen Serie wirkt es deutlich blasser. Ich vermute aber das die Färbung mit dem Aushärten doch noch etwas nachlässt. Das kann man aber erst nach einigen Wochen abschließend beurteilen. Aber ich stimme Dir zu, das Safranin wirkt ansprechender und sicherlich werde ich auf dieser Basis noch einiges versuchen, zumal es ja auch ein Sekundärfluoreszenzfarbstoff ist.

Jetzt zu Deinem etwas älteren Auftrag, den ich leider erst jetzt nachkommen konnte:
Zitat von: Klaus Herrmann in Juni 25, 2012, 23:55:56 NACHMITTAGS
...
Jetzt fehlt eigentlich nur noch der selbe Beweis bei den rot fluoreszierenden Pünktchen im Markstrahl - sind das nicht auch Algen?
...

Das Chlorophyll in den Markstrahlen wurde ja zwischenzeitlich auch von Eckhard im mehrjährigen Kastanienspross gezeigt: https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=12844.0, aber Eckhard hat es ja auch nicht auf Algen angelegt.

Algen sind es nun nicht, obwohl man bei unseren Schnitten immer vorsichtig beurteilen muss, inwieweit Zellinhalte und/oder Gewebe von außen und innen in den Schnitt verschleppt und verteilt werden.

Ich habe ein anderes Sprossstück frisch geschnitten, es ist somit nicht mit den bevor gezeigten Färbungen direkt vergleichbar (Die Färbungen aber mit den davor gezeigten Hellfeld- und Fluoreszenzaufnahmen schon = eine Schnittserie). Was wir aber vergleichen können ist die Gegenüberstellung mit den Hellfeldaufnahmen, die zu gleicher Zeit und bei derselben Präparatepositionierung gemacht wurden.

Geschnitten wurde wiederum mit dem Rasierklingenmikrotom, vor jedem Schnitt ist die Sprossoberfläche mit Wasser (Leitungswasser) befeuchtet worden, ein Schnitt wurde als Wasserpräparat mikroskopiert. Somit ist alles ursprünglich.

Aufnahmedaten: Jeweils Einzelbilder. Übersichtsbild mit dem 10x/0,3 PlanNeofluar, Ausschnitt mit dem 63x/1,25 PlanNeofluar.

Primärfluoreszenz (470 nm LED-Auflicht, Zeiss Filtersatz 09), d.h. Blauanregung und Sperrfilter 515 nm.

Bild 8: Thymian, Spross quer. Hellfeld und Primärfluoreszenz (Autofluoreszenz, Eigenfluoreszenz)


Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter

Klaus Herrmann

Lieber Rolf-Dieter,

schön, dass du es nochmal aufgegriffen hast. Du hast es auch perfekt gegenüber gestellt!

Aber ich sehe im HF auch im Detail nichts an der Stelle, an der man die orangen Punkte sieht in der Autofluoreszenz.

Siehst du denn bei Direktbeobachtung was? Eventuell in der Polarisation?

Aber ich dneke, du hast Recht Algen sind es nicht, die Fluoreszenzfarbe ist bei den Algen stärker im Rot - hier haben wir Orange!
Mit herzlichen Mikrogrüßen

Klaus


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beamish

#19
Hallo,

wenn man z.B. diese Stelle hier vergrößert (was mir mit den mir gerade zur Verfügung stehenden Bordmitteln nicht gelingt), sieht man, daß an der mit dem Pfeil markierten Stelle ein schwachgrüner Fleck ist. Genau dort wos in der Fluoreszenzaufnahme orange leuchtet:


Grüße

Martin
Zeiss RA mit Trinotubus 0/100
No-Name China-Stereomikroskop mit Trinotubus
beide mit Canon EOS 500D

beamish

Hier jetzt nochmal.
Das meine ich:


Grüße

Martin
Zeiss RA mit Trinotubus 0/100
No-Name China-Stereomikroskop mit Trinotubus
beide mit Canon EOS 500D

Klaus Herrmann

Hallo Martin,

ich seh zwar fast nix, aber genau da ist ja ein rotorange fluoreszierender Punkt.

Hast du vielleicht UV-Augen? ;)
Mit herzlichen Mikrogrüßen

Klaus


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beamish

Hallo Klaus,

ich hatte ja nur die fürs Forum runtergerechnete Aufnahme zur Verfügung. Vielleicht zeigt uns Rolf-Dieter die Stelle des Präparats in größer... ;-)

Grüße

Martin
Zeiss RA mit Trinotubus 0/100
No-Name China-Stereomikroskop mit Trinotubus
beide mit Canon EOS 500D

Klaus Herrmann

Zitatich hatte ja nur die fürs Forum runtergerechnete Aufnahme zur Verfügung

Schade, dass mein Sohn nicht da ist, der hätte einen grünen Punkt im gelben Sack da reingezaubert! ;D
Mit herzlichen Mikrogrüßen

Klaus


ich ziehe das freundschaftliche "Du" vor! ∞ λ ¼


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Rolf-Dieter Müller

Lieber Klaus,
Lieber Martin,

ich habe ausgehend von den Originalbildern das Fluoreszenzbild (Bild 8 unten rechts)  mit 50% Transparenz auf das Hellfeldbild (Bild 8 unten links) gelegt (= Bild 9 oben links).

Bild 9 oben rechts ist davon ein Ausschnitt, Bild 9 unten rechts dieser Ausschnitt ohne Fluoreszenzbildüberlagerung und Bild 9 unten links die betreffende Zelle nochmals vergrößert.

Martin hat Recht, es ist ein leicht grüner Zellinhalt zu sehen der in Rot fluoresziert. Für eine bessere Darstellung hätte ich von vornherein die Fokusebene darauf legen müssen.

Bild 9


Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter