INCLUDAL A wie nachträgliche Blasenbildung vermeiden.

[Joachim7]

Hallo Forum,

zur Zeit verwende ich das Chemlab Safeline Kit FCA Färbung nach Etzold für botanische Präparate.

Obwohl ich genau nach der beigefügten Anleitung vorgehe habe ich nach ca. 5-8 Stunden im Ergebnis Blasenbildungen.

Zitat aus der Anleitung: " Den gefärbten Schnitt kurz auf saugfähigem Papier ablegen und dann auf den Objektträger geben, Deckglas auflegen, vorsichtig andrücken, das Einschlussmittel soll die ganze Fläche unter dem Deckglas ausfüllen."

Die ersten Stunden kann man das Präparat störungsfrei klar und ohne Beeinträchtigung ansehen. Dann bilden sich kleine Blasen und Erhebungen die das Dauerpräparat in Teilen unscharf und wertlos machen.

Gibt es eine vernünftige Alternative?

Gruß

Joachim

[Klaus Herrmann]

Hallo Jochen

Gibt es eine vernünftige Alternative?

ich kenne das Inkludal nicht aber ich habe gute Erfahrungen mit Euparal gemacht. Mit Entellan habe ich schlechte Erfahrungen, mit Malinol gute.

Aber Euparal hat den Vorteil, dass man nur Isopropanol benötigt zum Entwässern.

[treinisch]

Hallo Joachim,

zeig doch mal ein Foto von den Blasen.

Kommen die vom Rand her? hast Du das Includal verdünnt?

Grüße

Timm

[Joachim7]

Hallo Klaus, hallo Timm,

hat etwas gedauert. Zwei Bilder!

Includal nicht verdünnt. Ist praktisch bei allen meinen Präparaten. Mülltonne. Nur sofortige Beobachtung möglich.
Ich tropfe ausreichen auf. Drücke ich etwas fester an bilden sich gleich Bläschen. Man sieht nach ein paar Stunden aber schon, dass sich das Includal irgendwie zusammenzieht bzw. verfestigt. 






Würde halt schon gern Dauerpräparate herstellen.

Klaus, wenn Du einverstanden bist schicke ich Dir eine Liste mit den Agenzien und Farblösungen, die ich ohne große Überlegung so als Grundvorrat zugelegt habe. Das meiste habe ich noch gar nicht gebraucht.
Dann wäre ich beim Schwerpunkt Pflanzen dankbar für eine Beurteilung was fehlt oder besser ausgewechselt wird.

Gruß Joachim

[Klaus Herrmann]

Hallo Joachim,

das erinnert mich an meine Versuche mit PVP (Polyvinylpyrrolidon) ein wasservedünnbares Polymer. Da hatte ich nach Wechsel der Type von K 60 auf K 90 das selbe Fiasko. Alles zum Wegschmeißen!

Ist das Inkludal wasserverdünnbar? So wie ich die Vorschrift verstehe trocknest du den wasserfeuchten gefärbten Schnitt auf saugfähigem Papier?
Und das ohne den Schnitt nach der Färbeprozedur mit Wasser auszuwaschen?

Wenn das auch ein wasserverdünnbares Harz ist dann könnte der Polymerisationsgrad nicht stimmen so wie bei dem PVP, das bei mir die schlechten Ergebnisse gebracht hat.

Bei Euparal wir dir das nicht passieren!

Für deine Liste hab ich mir schon die Brille abgesetzt (ich bin kurzsichtig!)

[Joachim7]

Hallo Klaus,

richtig. Trocknen nur kurz auf dem saugfähigen Papier ( Kosmetiktuch). Mit Löschpapier war das Ergebnis nicht besser. Auf der Flasche steht nicht ob es verdünnt werden kann. In der Anleitung steht auch nichts.

Das 5-teilige Kit besteht aus Spüllösung 1, Spüllösung 2, Fixiermittel, Färbelösung und Einschlussmittel.
Nach der Anleitung erfolgt im Schritt 5 die Fixierung und das Ausspülender Farbe mit der Spüllösung 2 in einem Zug.

Der Schritt Fixiermittel wird nicht ausdrücklich genannt.

Versuche, nach Schritt 5 logischerweise das Fixierbad zu verwenden, brachten aber auch keine anderen Ergebnisse.

Habe Dir eine PN zukommen lassen (wollen?). Habe aber keine Erfolgskontrolle ob das ausgeführt wurde.

Schicke es nochmals an Deine eMail Adresse.

Gruß
Joachim

[Klaus Herrmann]

Hallo Joachim,

hört sich an wie eine Beschreibung aus dem Zauberkasten: ein paar kleine Geheimnisse behalten wir für uns

Die "Fixierung" ist mir ein Rätsel - nach der Färbung?

Das bedeutet man benötigt nach der Färbung eine Speziallösung?

Bei allen Färbevorschriften, die ich kenne wird am Schluss mit Wasser gespült bis keine Farbe mehr abgeht; danach wenn erforderlich differenziert und über Ethanol/Isopropanol entwässert; dann in Euparal eingedeckt oder im Falle der Xylol-löslichen Eindeckharze kommt nach dem Isopropanol noch Xylol oder Rothihistol, wenn man Xylol unbedingt vermeiden will.

Aber fixiert - wird höchstens das Deckglas durch Beschweren mit einem Gewicht.

Wenn wir uns demnächst mal treffen zeige ich dir den Ablauf ohne Zaubermittel. Den Deckglasheber kenne ich nicht, habe ich noch nie bei irgendwem gesehen und halte ihn für entbehrlich. Nicht entbehrlich dagegen ist 100%iges Isopropanol! 70%iges habe ich noch nie gebraucht.

[treinisch]

Hallo Joachim,

Includal A ist mit Wasser verdünnbar.

Könnte es sein, dass es wegen rel. hoher Viskosität den Schnitt einfach nicht
befriedigend durchdringt und später dann Luft aus dem Schnitt nach oben sickert?

Wie genau trägst Du das Includal auf? Gibst Du Includal A unter den Schnitt, oder
obendrauf, oder beides?

Probiere doch mal, es ein klein wenig zu verdünnen?

Grüße

Timm

[Detlef Kramer]

Hallo,

laut Romeis, Rezept 812, handelt es sich um ein Einschlussmittel auf der Basis von Gummi arabicum und Rohrzucker, also wasserlöslich. Nach dieser Beschreibung ist es wohl für pflanzliche Schnitte nicht unbedingt geeignet.

Der Präparationsweg, wie ihn Bernd Heim vorgiebt, liegt mir momantan nicht vor. Man könnte ihn aber fragen.

Ich persönlich bevorzuge für Pflanzenschnitte in jedem Fall die nicht wässrige Einbettung in einem Kunstharz. Leider gibt es die nicht mehr im freien Handel, auch nicht das gelobte Euparal. Allerdings das Inkludal CB, das aber leider bei Thorns nicht aufgeführt wird. Das müsste man bei Dr. Heim direkt bestellen. Ich hoffe, er liest mit und wird antworten.

Herzliche Grüße
Detlef

[Detlef Kramer]

Nachtrag:

die aktuelle WWW-Adresse von Dr. Bernd Heim: http://www.chemlab-mikroskopie.de. Allerdings sehe ich gerade, dass Includal CB (synthetisches Kanadabalsam in Buthylactetat) nicht aufgeführt ist. Er führt es aber - fragen!

Detlef

[B.Heim]

Liebe Mikroskopiker,

wie schon in einem vorherigen Beitrag erwähnt ist INCLUDAL A wasserverdünnbar. Eine nachträgliche Blasenbildung tritt dann auf, wenn das Einschlussmittel nicht genügend Zeit hatte in das Präparat einzudringen. Das tritt häufig dann auf wenn die Schnitte zu dick sind. Die Viskosität von INCLUDAL A  kann durch Zugabe weniger Tropfen destillierten Wassers  verringert werden, somit ist die Eindringzeit kürzer, allerdings verlängert sich dann auch die Abtrocknungszeit.  INCLUDAL CB ist die nicht wasserlösliche Alternative, zum Einschluss erfolgt die Entwässerung über Isopropanol. INCLUDAL CB ist lieferbar, ich habe es allerdings versäumt in die Homepage aufzunehmen, danke für den Hinweis. Die Frage zur Fixierung verstehe ich nicht. Vielleicht ist hier ein Missverständnis. Das FCA Färbekit besteht aus folgenden Lösungen: Fixierlösung für Schnitte, Spüllösung 1, Färbelösung FCA, Spüllösung 2 und dem Einschlussmittel und der Arbeitsanleitung, diese ist wie folgt:

ARBEITSANLEITUNG
FCA Färbung und FSA Färbung nach ETZOLD für botanische Präparate

Schritt 1

Die Färbebecher mit ca. 5 ml Spüllösung 1,  ca. 1 ml FCA Färbelösung und ca. 5 ml Spüllösung 2 füllen.

Schritt 2

Von dem Präparat möglichst dünne Schnitte abschneiden und diese in die Spüllösung 1 für ca. 3 – 4 Minuten geben.

Schritt 3

Mit beiliegenden Holzstäbchen die Schnitte entnehmen und in die FCA Färbelösung geben und für ca. 5 – 8 Minuten belassen.

Schritt 4

Auf einen Objektträger 1 Tropfen INCLUDAL A geben.

Schritt 5

Die Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben. Es erfolgt die Fixierung und das Ausspülen überschüssigen Farbstoffes. Verweilzeit ca. 3 – 4 Minuten.

Schritt 6

Den gefärbten Schnitt kurz auf saugfähigem Papier ablegen und dann auf den vorbereiteten Objektträger geben, Deckglas auflegen, vorsichtig andrücken, das Einschlussmittel soll die ganze Fläche unter dem Deckglas ausfüllen.

Das Präparat kann nun unter dem Mikroskop bestimmt werden. Nach ca. 5 – 6 Stunden ist das Einschlussmittel gehärtet, der Objektträger kann nun senkrecht gelagert werden.

Bestimmung
Unverholzte Zellwände sind blau gefärbt, cutinisierte Zellwände rot.


Grüsse Bernd Heim

[Klaus Herrmann]

Hallo Herr Heim,

Die Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben. Es erfolgt die Fixierung und das Ausspülen überschüssigen Farbstoffes. Verweilzeit ca. 3 – 4 Minuten.

Also die Verwunderung auf meiner Seite ist schon berechtigt: in allen Vorschriften wird entweder das Frischmaterial fixiert oder direkt nach dem Schnitt des Frischmaterials, aber nie nach der Färbung. So verstehe ich die Vorschrift.

Aber die Etzoldfärbung muss nicht fixiert werde!

[B.Heim]

Hallo Herr Herrmann,

danke für den Hinweis. Die Anleitung ist da missverständlich, ist mir nicht aufgefallen. Sie haben natürlich recht, die Reihenfolge ist: Fixierung des frischen Schnittes, spülen, färben, spülen und dann einschliessen. werde die Anleitung diesbezüglich überarbeiten.

Grüsse Bernd Heim

[Joachim7]

Hallo Herr Heim,

danke für Ihre Hinweise. Durchaus kann es sein, dass ich hier Fehler mache.

Die identische Anleitung ist ja dem Färbekit beigelegt. Aber wann kommt das beigefügte Fixiermittel zum Einsatz?

Ich habe das so verstanden:

Schritt 5: Die Schnitte der Färbelösung entnehmen und in die Spüllösung 2 geben. 

Dann erfolgt die Fixierung und das Ausspülen................, dazu nehme ich doch dann das Fixiermittel?

Liegt da der Fehler?

Empfehlen Sie die Verdünnung?

Bezüglich Schnittdicke werde ich noch einige Versuche durchführen.

Gruß

Joachim

[Joachim7]

Hallo miteinander,

mein letzter Beitrag ist bereits überholt. Entschuldigung!

Joachim