Erste Phasenkontrast-Gehversuche

[Monsti]

Hallo zusammen,

gestern habe ich mich doch tatsächlich an Phasenkontrast gewagt (Objektiv: Ph2, Neofluar 25/0.60). Das sind ein paar der Ergebnisse:





Wahrscheinlich Vampyrella sp (Nachtrag: Ferry hält dies eher für Mayorella sp.).



Codosiga botrytis

Mal davon abgesehen, dass meine Kamera nicht das Optimum ist und beim ersten Foto das Deckglas nicht ganz sauber war, sind da sicher noch Verbesserungen drin. Gibt's bestimmte Tricks?

Herzliche Grüße
Angie

[Eckhard]

Liebe Angie,

prima - ich freue mich, dass die Phako Einrichtung zum Einsatz kommt.

Gibt's bestimmte Tricks?

Präzise köhlern, saubere Linsen im Beleuchtungsstrahlengang, Apperturblende ganz öffnen. Ansonsten kannst Du die richtige Fokusebene einstellen, indem Du versuchst, die Breite der Halos so gering wie möglich einzustellen.

Herzliche Grüsse
Eckhard

[Monsti]

Lieber Eckhard,

na, dann habe ich ja tatsächlich alles richtig gemacht (nachdem ich nach den ersten furchtbaren Flecken- und Streifenbildern alles nochmals gründlich gereinigt hatte). Der Fokus lag bei den Amöben auf den Filopodien, womit die Amöbenkörper bzw. -schalen leider stets einen Heiligenschein bekommen.

Mir scheint, Phako ist vor allem für kleine, möglichst flache und kontrastarme Objekte geeignet. Oder ist mein Eindruck Unsinn? Und kann es sein, dass Bakterien in älteren Proben zwangsläufig mit auf dem Bild sind?

Herzliche Anfängergrüße
Angie

[plaenerdd]

Hallo Angie,
Dein Eindruck ist völlig richtig. Ich zitiere dazu einfach mal die Mikrobfiebel weil ich es nicht besser ausdrücken kann:

2.6.5.3       Wozu Phasenkontrast, für welche Objekte?
Das Phako-Verfahren setzt eigentlich eine sehr kleine Aperturblende und infolgedessen ein so kleines
Phasenplättchen voraus, daß die Beeinflussung des am Objekt gebeugten Lichts durch das Phasenplätt-
chen zu vernachlässigen ist. Bei größeren Objekten, das sind im Grunde alle, die größer als ,,sehr klein"
sind, ist diese Voraussetzung nicht erfüllbar, deshalb erscheinen im Bild Strukturen, die im Objekt nicht
vorhanden sind. Wer ein Objekt nicht durch Beobachtung im Hellfeld genau kennt, kann deshalb sein
Phasenkontrastbild nicht richtig deuten, nicht entscheiden, welche Objektdetails echt und welche durch
den Phako künstlich hervorgerufen sind.
Die Haloerscheinungen rund um die Objektdetails sind recht erträglich bei sehr kleinen Objekten, wie
Bakterien, Pilzhyphen und -sporen, Mikroalgen, winzigen, farblosen Flagellaten, kleinen Amöben. Verwir-
rend aber sind sich überschneidende Halos von nahe beieinander liegenden Objektdetails und von sol-
chen, die in unterschiedlichen Fokusebenen liegen. Um die Wirkung der hellen Höfe in der Praxis zu
vermindern, empfiehlt es sich, in den Präparaten die Objekte nur in einer einzigen Schicht und mit mög-
lichst großen Zwischenräumen aufzutragen, also z. B. sehr dünne Ausstriche zu machen.
Präparate, in denen Objekte in mehreren Schichten übereinander liegen (Zellen in dickeren Schnitten z.
B.), bieten grundsätzlich überhaupt nicht mehr die Voraussetzung für die Anwendung des Phako-
Verfahrens, da genau definierte, auf die Wirkung einer bestimmten Objekteinzelheit zurückgehende Pha-
senbeziehungen beim Austritt der Lichtwellen aus dem Präparat bei ihnen nicht mehr vorliegen. Solche
Präparate sind deshalb der Beobachtung mit Phako nicht zugänglich.

Ich habe selber erst seit kurzem eine Einrichtung für Variablen Phasenkontrast (Phv) am Mikroskop. Mit dem Fotografieren tue ich mich da auch noch immer schwer, aber wenn es darum geht Geißeln zu erkennen oder die Pseudopodien von Amöben ist der Phako unschlagbar.

Begeisterte Grüße
Gerd

[frfmfrfm]

Angie sure that over time you do it very well.
A greeting.

[Monsti]

Lieber Gerd,

hatte ich instinktiv ja die richtige Idee. Ja, die Beobachtungen am Mikroskop sind toll! Man sieht Details, die man im normalen Durchlicht allenfalls erahnt - wenn überhaupt. Beim Fotografieren des Gesehenen hapert es halt (noch).

@ Francisco, thank you!

Herzliche Grüße
Angie

[Frank Fox]

Liebe Angie,

ich mag den Phasenkontrast und Deine ersten Fotos damit gefallen mir gut.
Weiter so 

Herzliche Grüße
Frank

[Monsti]

Lieber Frank,

wenn Du das schreibst, ehrt mich das. 

Natürlich übe ich weiter. Gestern und heute gelangen mir doch ein paar recht gute Bilder ohne mordsmäßigen Haloeffekt. Hier z.B. Penardia mutabilis:





Ist doch schon besser, oder?

Auch das Foto der Schalenstruktur einer Nebela gefällt mir:



Herzliche Grüße
Angie

[Eckhard]

Liebe Angie,

Das sieht doch schon seeeeeeehr viel besser aus. Penardia mutabilis ist sehr schön!

Herzliche Grüsse
Eckhard

[wilfried48]

Hallo Angie,

tolle Bilder !,

aber ich musste auch etwas schmunzeln, denn stammte nicht mal dieses Zitat von dir ?

Ich brauche weder Phasenkontrast, noch sonstigen Firlefanz. Ich möchte lediglich ein helles, kontrastreiches Bild.

ich habe es eben in einem alten thread von dir gefunden.

http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=11643.msg86006#msg86006

Gut, dass manches oft anders kommt als man zunächst denkt  

viele Grüsse
Wilfried

[Monsti]

Lieber Wilfried,

auf dieses Zitat, an das ich mich gut erinnere, hatte ich direkt gewartet!      

Mal ganz ehrlich: Der Blick durch das Mikroskop bei leichtem Schieflicht-Hellfeld ist mir unverändert am liebsten, weil es am natürlichsten wirkt. Phasenkontrast bietet aber sehr wertvolle Krücken bei kleinen kontrastarmen Objekten, wie etwa filigranen Filopodien von Amöben oder Geißeln an Flagellaten. An dieser Stelle erneut ein großes Dankeschön an Ferry, der mir diese Einrichtung inkl. eines Objektivs geschenkt hat!

Grundsätzlich hast Du aber Recht, lieber Wilfried: Man soll niemals "nie" sagen.

Herzliche Grüße
Angie

[Bernhard Lebeda]

Hallo Angie

das sind einwandfreie und sehr schöne Phakobilder!!

Was wäre die Welt ohne "Firlefanz"?    Öd und leer 

Viele phasenverschobene Mikrogrüße

Bernhard

[Monsti]

Danke Bernhard!

Die kontrastverschobenen Grüße schicke ich Dir gerne zurück
Angie

[purkinje]

Hallo Angie,

mir sind Deine schönen Phasenkontrast-Bilder auch beim Durchscrollen sofort aufgefallen; Du hast es sicher schon irgendwann erwähnt, aber ich frag noch mal: welches Mikroskop mit welchem Fotoequipement verwendest Du ?

Beste Grüße aus München
Stefan

[BergerN]

Lieb Angie,
schöne Bilder!
Würdest Du für mich ein unbearbeitetes Bild einstellen mögen, damit ich meine Ausrüstung nicht aus dem Fenster schmeißen muß? 

Liebe Grüße,
Nick