Diatomeen im Auflicht ?

[Johannes Kropiunig]

Hallo,

trotz recherche im Internet fand ich keinen Artikel, oder Bild von Diatomeen, die unter einem Auflichtmikroskop gemacht wurden, im Internet.
Ich kann mir einfach nicht vorstellen, dass ich da tatsächlich ein Pionier sein könnte. 
Einige von euch haben doch so tolle UV-Auflichtmöglichkeiten, dürfte ich euch darum bitten sie einmal an einem Diatomeenpräparat zu versuchen und die Bilder hier zu posten ?

Viele Grüße,
Johannes

[peter-h]

Hallo Johannes,

was versprichst Du Dir davon? Wie sollen die Diatomeen und auf welchem Untergrund liegen? In Luft wird durch den Refraktionsindex von 1,0 nie die maximale Auflösung möglich sein. Oder Diatomeen in Immersionsöl mit Auflicht und UV 
Aber sicher kannst Du uns erst einmal erklären was Deine Intention ist ?
Oder meinst Du als gutes Mikroskop ein REM? Das ist Auflicht im kurzwelligen Bereich.

Sehr gespannt
Peter (H)

[Johannes Kropiunig]

Hallo Peter,

ich weiß jetzt nicht, ob du meine Bilder gesehen hast.
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=14763.0
Diese habe ich mit dieser, denkbar simplen, Konstruktion gemacht.

Ein 405nm Laser wird einfach auf den Rand des Immersionsöltropfen gerichtet.

Mein Problem ist einfach dieses, dass mir auf dieser Art bessere Aufnahmen der selben Diatomeen gelingen als im klassischen Durchlicht mit einem BG 12 Filter.
Da gelang es mir beim besten Willen nicht die Areolen in einer solchen Auflösung abzubilden.
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=14130.0

Ich verstehe einfach nicht, dass dies scheinbar noch keiner vor mir probiert hat, und bin auf der Suche nach Vergleichsmöglichkeiten.

Viele Grüße,
Johannes

[Rene]

Hello Peter, next article is relevant:

Siver & Hinsch (2000) The use of interference reflection contrast in the examination of diatom valves. J Phycol. 36, 616-620

Although the term interference reflection contrast is used in the title, only a Smith reflector cube is used. I think the the term interference is used for the way the image is formed (which is silly really as all microscopic images are based on interference processes). Anyway, there is no interference contrast technique (aka Nomarski) involved.

Just found out you can download a copy here:http://silicasecchidisk.conncoll.edu/PDF_Publications/2000-Siver-Hinsch.PDF

Best wishes, René

[peter-h]

Rene,
thank you for the very interesting Link.

@Johannes,
ich glaube, dass ich Deinen Ansatz noch nicht verstanden habe. Ohne alle Tricks kommt bei mir ein solches Bild.

Cybmella , Obj. CZJ Apo 63/0,95 K , weiße LED mit BG12 Filter

Will ich etwas mehr sehen, so gehe ich ins Öl

Obj. Leitz Apo 90/1,4 Öl mit UV-LED @365nm.

Sicher sind meine Aufnahmen jetzt so ganz schnell nicht optimal, aber für die einfache Lichtmikroskopie bestimmt ausreichend.

Ich versuche es noch zu verstehen. Laser in diesem Wellenlängenbereich liegen gerade bei mir nicht in einer Kiste 
Peter (H)

[Johannes Kropiunig]

Hallo Peter,

Himmel, A... und Zwirn, mit diesen Fotos hast du mich jetzt völlig desillusioniert !
Mit meinem Standard und den Plan 100er bekomme ich das nie und nimmer so hin.
Sag jetzt bitte wenigstens das diese Apo 63/0,95 K den Gegenwert eines Kleinwagen besitzt. 

Viele Grüße,
Johannes

PS. Ich glaube bei mir ist eine Depression im Anmarsch.

[Nomarski]

Hallo Johannes,

Mit meinem Standard und den Plan 100er bekomme ich das nie und nimmer so hin.

doch, bekommst du!

PS. Ich glaube bei mir ist eine Depression im Anmarsch

dann streich das n, das m und das a weg! 

Viele Grüße
Bernd

[peter-h]

Hallo Johannes,

das CZJ Apo 63/0,95 K hatte kein großes Loch in meine Finanzen gerissen. Es geht auch mit einem CZJ APO 40/0,95 K, welches sehr oft in der Bucht auftaucht. Aber vielleicht liegt es auch "nur" an der Kamera. Im monochromatischen Licht mit einer Farbkamera Aufnahmen zu tätigen ist sehr grenzwertig.

Einfache Überlegung.
Nach einem BG12 Filter liegt der Emissionsschwerpunkt bei 400nm.
Die Bayermaske läßt, wenn sie sehr gut ist nur im Blaukanal ein Bild entstehen. Grün- und Rotkanal liefern ein nettes Rauschen ! Wer nun versucht aus diesem Farbbild per Software ein SW Bild zu wandeln, der hat zu der Information von 33% Blau auch noch 66% Schrott (Rauschen) gemixt.
Es ist also ganz wichtig, nie ein solches Bild per Knopfdruck in SW zu wandeln, sondern eine Aufsplittung der 3 Farbkanäle in R G B vorzunehmen und dann nur noch das Blaubild zu verarbeiten.

Die verwendete Kamera bei mir ist eine ImagingSource DMK72 , CMOS mit 5 MPixel und USB Anbindung. D.h. damit sind alle Betrachtungen am Monitor ! Nie in eine UV-LED blicken. Das Thema hatten wir schon.

Ende der Depression
Peter (H)

[Johannes Kropiunig]

Hallo Peter,

wenn du mit dem BG 12 Filter Fotos machst, ist da das Bild eigentlich blau, oder rutscht es dann schon ins Violett ?
Bei meiner Eos 1000D ist es jedenfalls so, wenn ich die Belichtungszeit höher drehe.

@Bernd
Danke für deiner ermunternden Worte, ich werde es versuchen.

Viele Grüße,
Johannes

[peter-h]

Hallo Johannes,

das Bild muß blau erscheinen. Wenn es nach violett abrutscht, dann ist der Blaukanal schon übersteuert und es schlägt aus dem Rotkanal ein Signal durch.
Mache eine Belichtungsreihe und trenne dann die Bilder in RGB auf. Jede Kamera reagiert etwas anders. Es macht keinen Sinn, wenn ich nun Bilder dazu bringe.

Gruß
Peter

[Stefan_O]

Hallo Zusammen,

das Trennen der Kanäle hatte ich im "Test" Faden von Johannes auch schon angeregt....

In der Regel werden die Farbkanäle noch gewichtet, bevor sie in s/w umgewandelt werden, vom Blau bleibt nicht viel über:
gray = 0.299 ×  red + 0.587 ×  green + 0.114 ×  blue (ImageJ, PS machts ähnlich).

Bei meiner Kamera versagt die Belichtungsmessung, wenn auf zwei Kanälen kein Signal da ist, also wie Peter schreibt, eine Belichtungsreihe machen, oder nach Histogramm manuel belichten, falls möglich.

Gruss,
Stefan

[Karl73]

Lieber Peter,
die Diatomeen Bilder sind wirklich verdammt gut! Ich bin auch glücklicher Besitzer eines 40iger Apo... aber irgendwie krieg ich nicht so tolle Bilder hin. Das Objektiv ist wirklich Spitze! benutze im Moment eine LED die nicht so weit ins UV geht wie die Nichia und meine CCD Kamera ist etwas älter...

[peter-h]

Hallo Karl,

das Bild ist stark verrauscht und unscharf. Es kommt bei dieser Technik auf alle Glieder in der Kette an. Dazu die Fragen:
1. welche Kamera ?
2. wie ist die Kamera an das Mikroskop adaptiert?
3. wurde nur ein Bild aufgenommen?
4. mit welcher Software war die Kamera betrieben?

Es gibt noch zig Fragen dazu, aber für diese ersten 4 Fragen wären schon Antworten hilfreich.

Gruß
Peter (H)