Floureszenzmikroskopie CHO Zellen, Tubulin

[icho_mann]

Liebe Mikroskopie Forumsgemeinde,

ein halbes Studium später (Biotechnologie, Mannheim, fange gerade die Bachelorarbeit an) erscheine ich hier mal wieder. Vielleicht gibt es noch vereinzelt Leute die sich an mich erinnern. Ich jedenfalls denke gerne und oft an meine "Mikroskopiezeit" zurück, das Mikroskop steht im Schrank und wir gelegentlich ausgepackt um etwas zu untersuchen ;-)
Jetzt habe ich in Verbindung mit meinem Studium die Gelegenheit gehabt in einem Zellkulturpraktikum Floureszenzmikroskopie an einem Axiovert 25 (Zeiss) durchzuführen und das war wirklich toll. Deshalb möchte ich die Bilder, die mich sehr erfreut haben und die mich auch ein bisschen stolz gemacht haben hier teilen. Sicherlich haben viele schon ähnliches gesehen, nichtsdestotrotz hoffe ich, dass euch die Bilder gefallen.

Also los:
Es handelt sich um CHO (Chinese hamster ovary) Zellen, die im Monolayer (Einzelschicht) in Zellkulturschalen kultiviert wurden. Sie wurden dann in 6-well Platten auf Deckgläsern ausgesäht und durften diese dann überwachsen. Danach wurden sie mit Methanol/Aceton (70:30) fixiert und permeabilisert. Es wurde ein Antikörper, der spezifisch Tubulin bindet, aufgetragen und dieser mit einem zweiten, an GFP (grün floureszierendes Protein) gebundenen Antikörper sichtbar gemacht. Außerdem wurde die DNA der Zellen mit DAPI angefärbt. Nach Fixierung der Deckgläser mit Mowiol wurde dann mit dem Floureszenzmikroskop detektiert.

Hier die Bilder:

Übersicht über mehrere Zellen. Links oben sind zwei Zellen zu Ende der Mitose zu erkennen.


Zellen in Interphase, das Netzwerk der Mikrotubuli ist gut erkennbar.


Zellteilung, von mir als Metaphase befunden


Anaphase


Telophase


Mehrere Zellen in verschiedenen Mitosephasen


Sehr interessant, hier gibt es vier Mitosespindeln, die Zelle scheint sich zu vier Zellen zu teilen.


Hier ein Ausschnitt aus dem vorherigen Bild

Das war es so weit von mir. Falls ihr mit meiner Einschätzung der Mitosephasen nicht einverstanden seid lasse ich gerne mit mir reden ;-)
Die Bilder sehen in der Vorschau jetzt sehr groß aus, falls es da irgendwelche Begrenzungen gibt, oder ich gegen andere Forumsknigge verstoßen habe sagt es mir bitte!

Vielen Dank und liebe Grüße,
Jonathan

[Ronald Schulte]

Jonathan,

Sehr schone Bilder. Da hast du aber Glück mal in die Lage zu sein um mit Kulturen und Antikörper arbeiten zu können/dürfen.
Ich kann da leider nur Zellen in Dapi Farben und das ist leider nicht so schon wie in deine Kombinierte Färbung, einfach Toll.

Grusse Ronald

[Fahrenheit]

Lieber Jonathan,

schön mal wieder von Dir zu lesen und tolle Fotos!

Herzliche Grüße
Jörg

[koestlfr]

Hallo Jonathan!

Tolle Bilder, spannende Arbeit!

Kannst du bitte ein bisschen über die Hardware und das Drumherum schreiben!

Liebe Grüße
Franz

[icho_mann]

Hallo Franz,

wirklich viel kann ich dir leider nicht sagen, wir waren nur einmal kurz an dem schicken Mikroskop.
Was würdest du denn gerne wissen?

Grüße
Jonathan

[liftboy]

Hallo Jonathan,

welcome back again!
Natürlich erinnern wir uns :-)
Wunderschön gelungene Aufnahmen zeigst Du da; der Fortschritt ist nicht zu übersehen.
Schaun wir mal, was sonst noch so kommt; ich bin jedenfalls neugierig.

Viele Grüße
wolfgang

[koestlfr]

Hallo Jonathan!

Mich würde z.B. interessieren, welches Mikroskop, welche Bestückung usw......

Liebe Grüße
Franz

[icho_mann]

Hey Franz,

ich hatte schon geschrieben, dass es sich um ein Axiovert 25 von Zeiss handelt. Viel mehr kann ich dir leider nicht sagen, tut mir Leid.

Liebe Grüße
Jonathan

[Detlef Kramer]

Hallo Jonathan,

auch ich freue mich, wieder etwas von Dir zu vernehmen. Die Bilder sehen toll aus und zeigen uns, was mit einem professionellen System für eine bestimmte Fragestellung möglich ist.

Du hast um Kritik gebeten und die sollst Du bekommen: ich meine, Du hast Anaphase und Teleophase bei Deinen Fotos verwechselt.

Dennoch oder gerade deshalb: danke für die eindrucksvollen Fotos!

Herzliche Grüße
Detlef