Kombination aus AL Fluoreszenz und DIC bzw. Phasenkontrast

[peter-h]

Hallo zusammen.

Das Thema hat einen gewissen Reiz, also frisch an die Arbeit. Alle Kombinationen kann ich nicht ausführen, aber am Olympus BH-2 geht doch etwas. Das Objekt ist ein 4µm Schitt durch eine Leber vom Igel (Präp. Robin Wacker). Objektiv Neofluar 40/0,75 Ph2. Als Phasenkondensor ein Leitz-Heine, für die Auflichtfluoreszenz ein angepaßter Zeissknochen mit Filter BP450-490 FT510 LP520 , blaue LED zur Anregung.

1.

Hellfeld , weiße LED

2.

Phasenkontrast , weiße LED

3.

Auflichtfluoreszenz , Blauanregung

4.

Keine Bildaddition ! Auflichtfluoreszenz + DL-Phasenkontrast LED mit Rotfilter zur besseren Trennung der Information.

Sicher nicht das geeignete Objekt, aber einen Versuch war es wert.
Viel Spass

Peter

[anne]

Hallo Peter,

super, ja das macht Freude!!

lg
anne

[Rawfoto]

Hallo Anne

Bei Olympus finde ich die Kombination mit dem Öl-Dunkelfeldkondensor interessant ==> dort kann man gut den Kontrast zwischen dem UV-angeregten Bildteil und dem ohne Dunkelfeld-Aufhellung tiefschwarzen Bereich steuern. Ich habe das bisher eingesetzt um die Basis für gute Schwarzweiß-Umwandlung zu haben ...

Liebe Grüße

Gerhard

[Holger Adelmann]

Hallo Anne,

der spezielle, bereits angesprochene Leitz Phasenkontrast-Fluoreszenzkondensor (beides im Durchlicht) ist sicher ein interessantes Gerät,
aber viel besser funktioniert die Kombination aus Durchlicht -Phasenkontrast (oder DIC) und AUFLICHT- Fluoreszenz,
dann kann man auch die jeweiligen Helligkeiten der beiden Bilder gut aufeinander anpassen.

Ein paar Beispielfotos am Leitz Orthoplan sollen das veranschaulichen.

Ich fand die Kombination aus Auflicht-Fuoreszenz und Durchlicht-DIC sehr spannend, habe aber die Beobachtungszeiten immer kurz gehalten, da
ich das Wollaston-Prisma im Objektiv (bzw. dessen Verkittung) nicht zu lange der hohen Intensität der Auflicht-Anregungsbestrahlung aussetzen wollte,
besonders, wenn es sich wie in meinem Beispiel unten um Auflicht-Anregung mit UV handelt, um die schöne Blaufluoreszenz der DNA mittels DAPI zu bekommen.

Herzliche Grüsse,
Holger


Infusor, gefüttert mit DAPI-markierten Hefezellen. Man sieht, dass sich durch Diffusion des DAPI auch der Kernapparat des Infusors markiert.
Lebendaufnahme. Auflicht Fluoreszenz, kombiniert mit Durchlicht-Phasenkontrast.


Maus-Fibrozytenkultur. Auflicht Fluoreszenz, kombiniert mit-Durchlicht Phasenkontrast.


Maus-Fibrozytenkultur. Auflicht Fluoreszenz, kombiniert mit-Durchlicht DIC.

[Rawfoto]

Hallo Holger

Das ist absolut steil, super Beispiel, toll :-)

Liebe Gruesse

Gerhard