Histologie: Zellteilungen Rhododendronzikade

[Jürgen H.]

Liebe Mitmikroskopiker,

anbei ein paar Zellteilungen, dabei mindestens zwei mit ganz nett anzusehenden Zentrosomen und Spindelfasern (ziemlich im Zentrum des Bildes). Das Präparat ist ein Kunststoffschnitt durch eine Rhododendronzikadennymphe.



Bei der Gelegenheit: Reduziert Photobucket automatisch die Datenmenge? Ich hatte ein Bild von 1,62 MB hochgeladen. Die hochgeladene Datenmenge beträgt nur etwa ein Drittel.


Viel Freude beim Betrachten!

Jürgen

[RainerTeubner]

Hallo Jürgen,

welches Organ der Rhododendronzikade hast Du denn zu dem schönen Präparat verarbeitet?

Viele Grüße!

Rainer

[Jürgen H.]

Lieber Rainer,

Ich gehe davon aus, dass es sich um Geschlechtszellen von inneren Geschlechtsorganen handelt, entweder um Zellteilungsfiguren der Hoden oder um Büschel von Ovariolen, die bei den Zikaden durch ein Häutchen umschlossen und zusammengehalten werden können. Dieser Umschluss wäre jedenfalls im Präparat mit den längsgestreckten Zellkernen der entsprechenden Zellen schön zu sehen. Auffällig ist auch die Gruppierung von Zellen innerhalb des Organs und die in diesen Gruppen im Wesentlichen gleichzeitig stattfindenden Zellteilungen.

Ich besitze jedoch außer dem Werk von Strümpel kein Buch speziell über die Zikaden, daher bin ich noch ein wenig unschlüssig und gespannt auf weitere Schnitte.

Schöne Grüße

Jürgen

( editiert )

[reblaus]

Hallo Jürgen -

einfach toll - da hat sich der Aufwand wirklich gelohnt!

Gruß

Rolf

[Jürgen H.]

Lieber Rolf,

Ein Lob von Dir freut mich besonders, herzlichen Dank!

Schöne Grüße

Jürgen

[Holger Adelmann]

Lieber Jürgen,

WOW - der Spindelapparat mit den Chromosomen in der Bildmitte ist ja der Hammer!

Ich bin begeistert!

Herzliche Grüsse,
Holger

[Jürgen H.]

Liebe Mitmikroskopiker,

ein paar Schnittebenen tiefer sieht es so aus:



Bei 2 Teilungsstadien  in der Anaphase: Der Spindelapparat hat die Chromatiden bereits getrennt und zu den Polen gezogen. Bei 3 ist eine "Nachzüglerzelle" noch in der Metaphase: Die Chromosomen sind in der Aequatorialebene angeordnet, der Spindelapparat greift an ihnen bereits an.
Bei 4 verschiedene Prophasestadien mit Übergängen zur Metaphase, teilweise also bereits mit ausgebildetem Spindelapparat und beginnender Anordnung der Chromosomen in der Aequatorialebene.

Bei 1 finden sich jeweils an den Zellpolen der Zellen rotgefärbte Punkte. Ihre Bedeutung kenne ich nicht.

Zum leichteren Nachvollziehen ein Schema aus Wiki:








Lieber Holger, vielen Dank für Deine Worte, Deine Bilder zu den Zellteilungen sind allerdings nicht zu übertreffen....

Schöne Grüße

Jürgen

[Ronald Schulte]

Jürgen,

Fantastischen Schnitt, Komplimente dazu. Hier zeigt sich die kraft von Kunststoffeinbettung. So ein Schnitt ist im Paraffin meist zu dick und dann zeigen sich die Chromosomen wie ein Klumpen Farbstoff. Ich meine hier eine Fuchsin/Methylenblau Färbung zu erkennen, stimmt das?
Bei mir färben sich die Chromosomen auch sehr selektiv und sparsam an wenn ich mit Haematoxylin nach Gill Farbe. Ich Farbe dann ein 1,5µm dicken Schnitt so 10 Minuten und dann 10 Minuten blauen in ein Becherglas Wasser mit ein Tropfen Ammoniak um es so ph 8 zu bekommen. Ein 0,8µm Schnitt muss dann sicher so 15 Minuten bis 20 Minuten gefärbt werden. Ein großen Nachteil ist das die Spindelfaser dann nicht angefärbt werden. Wie dick ist dein Schnitt hier und wie hast du Fixiert?

Gruße Ronald 

[Jürgen H.]

Lieber Ronald,

Vielen Dank für Deine Worte und entschuldige bitte, dass ich erst jetzt antworte, ich hatte glatt Deinen Beitrag übersehen, weil mein Computer sich eine Nicht genehmigte Pause erlaubt hat.

Ja, das Technovit bietet schon Vorteile, durch die relativ kalte  Einbettung geht wenig kaputt und man kann recht dünn schneiden, dieser Schnitt hier ist 1,5 mü stark. Es geht auch noch dünner, aber das brachte keine Vorteile mehr.

Fixiert ist das ganze Tier in Bouin und Deine Vermutung zur Färbung ist völlig zutreffend. Hämatoxylin habe ich versucht aber das klappt auch mit langen Färbezeiten bei mir nicht. Der Schnitt nimmt keine Farbe an. Möglicherweise liegt es an der Fixierung, obwohl die beim Paraffinschnitt eine kräftige Färbung gibt.

Was machen Deine Technovit 8100 Versuche? Meine Flasche 7100 geht zur Neige und ich muss mir langsam überlegen, welches Technovit ich nachbestelle. Da wäre es gut zu wissen, ob Du mit 8100 bei Insekten gut zurecht kommst.

Parallel läuft bei mir ein Versuch mit einer vorherigen Agareinbettung, Tipp von John, ich bin gespannt.

Schöne Grüße

Jürgen

[Ronald Schulte]

Jürgen,

Ist kein Problem, eile ist ja nicht dabei.
Das du mit eine Bouin Fixierung und Einbettung in Technovit 7100 überhaupt Farben kannst ist schon für mich besonders. Ich habe drei Hodenblocke mit Bouin Fixiert die ich sowohl in Paraplast wie in Technovit eingebettet habe und in Paraplast kann ich die sehr schön anfärben aber die Technovit schnitte nehmen kein Farbstoff an. Kein Toluidin, kein Fuchsin, kein Haematoxylin, nichts. Auch nicht wenn ich die Konzentration oder Farbe Temperatur erhöhe. Das ist schon besonders finde ich.

Das werde ich selbstverständlich im kommenden Projekt mit einbauen. Erste Resultaten kann aber noch ziemlich dauern weil ich noch starten muss mit ein versuchsplan zu bedenken und dann muss es noch durchgeführt werden. Wirklich Zeit bekomme ich erst nach die Sommer Ferien, dann aber auch reichlich.
Also ob Technovit 7100 oder 8100 bevorzugt wird noch ein Fragezeichen bleiben.
Die cons von 8100 könnte sein das es unter Sauerstoff Abschluss und ziemlich niedrige Temperatur polymerisieren muss aber Ralf Feller hat mich schon erzählt das dass bei ihm ohne viel Probleme geht. Ich habe von die kleinen PE Beem Kapsel mit Deckel so das könnte auch mal so sein das es überhaupt kein cons wird. Hoffentlich hat es mehr pros wie cons aber das wird sich heraus stellen.
Ich denke daran um den Versuch zu machen mit Drosophilas anstatt Mucken. Das weil ich einfacher eine ganze Familie Drosophilas züchten kann wie Mucken. So kann ich starten mit hoffentlich gleiche Bedingungen an härte, große und also auch Eindrängens Vermögen von das Technovit.

Schönes Wochenende, Ronald

[Jürgen H.]

Lieber Ronald,

Ich kann mir gut vorstellen, dass 8100 besser in histologisches Material eindringt als 7100. Laut Datenblatt Kulzer hat 7100 eine dyn. Viskosität von 50 mPas und 8100 von 10mPas, wobei sich die Daten allerdings auf die Grundflüssigkeiten beziehen.  Ich bin gespannt.

Schöne Grüße

Jürgen