Paraffinschnitte aufkleben und anschmelzen

[CaDi]

Hallo,

ich möchte eine Menge Schnitte (so 800) von 2µm aufkleben.
Das Verreiben von Eiweißglycerin mit der Fingerkuppe ist mir dabei zu aufwändig,
weswegen ich mich dafür entschieden habe 3-4 Tropfen davon in das Streckbad
zu geben. Muss man die OTs dafür vorher mit Aceton und Ethanol völlig entfetten?
Ich würde sehr saubere (aber keine Superfrost) OTs verwenden.

Die Hauptfrage: Bei welcher Temperatur wie lange anschmelzen?
Ich habe Quellen von 10min bei 72° und 30min bei 80°C. Kann man auch bei gut 60°C
eine Stunde oder muss eine bestimmte Temperatur erreicht werden?

Viele Grüße,
Carsten

[Segu]

Nimm doch einfach Adhäsions-Objektträger.

z.B Polysine oder ähnliche, je nach Objekt.

[CaDi]

Wenn da nicht das Problem mit dem Geld wäre *g*.

Ich bin mir nicht sicher bei welcher Temperatur welcher Vorgang da stattfindet,
evtl. kann ein Chemiker uns da ja aufklären...
Denaturierung? Dann bei welcher Temp.?

[Ronald Schulte]

Carsten,

Schaue doch mal auf youtube http://www.youtube.com/watch?v=cbQnZr0wx0I&feature=PlayList&p=D4AFE662F882D17F&playnext=1&playnext_from=PL&index=8 wie ich die Coupes aufziehe.
Früher brauchte ich auch immer Eiweißglycerin aber das ist nicht notwendig. Große nachteil ist das die Schicht immer zu dick ist und die Farbstoffe bleiben ab und zu kleben (das siehst du erst beim Mikroskopieren.
Kaufe geputzte Objektträger und lass sie weichen in eine solution von Aceton und 95%Ethanol (1:1). (Geputzt ist lange nicht immer gut geputzt).
Dann sauber abreiben mit Cleanex tissue Papier.
Eine Minute trocknen lassen um die letzte Alkohole zu verdampfen. Danach direkt die Coupes aufziehen.
Natürlich schwimmt dir ab und zu mal eine ab aber das ist nur ab und zu.

Grüße Ronald

[CaDi]

Hallo Ronald,

danke für den Tipp.
Aber ich habe gestern einen Test gemacht, 20x Rippe mit der Methode
20ml Eiweißglycerin pro Liter Streckbadwasser und ich hatte keinen
Schnitt der abgeschwommen ist. Allerdings haben sich bei 1-2 Teile
vom Schnitt gelöst, aber nur sehr kleine.

Man sieht nur das Eiweißglycerin (makroskopisch oder mikroskopisch) wenn
man zuviel davon benutzt. Die Methode mit dem Streckbad ist da sehr sicher,
da kann man kaum zuviel nehmen.

Ich habe 30min bei 61,5°C angeschmolzen, sodass sich etwas flüssiges Paraffin
unten sammelt.

Der große "Test" kommt aber noch. Wenn ich die ca. 800 Schnitte färbe...ich kann
ja berichten wie die Ergebnisse werden, das ist dann ja sehr repräsentativ.

Viele Grüße,
Carsten