Botanik: Eibe ,quer, Etzold FCA

[carpe diem]

Hallo Kollegen,

nach längerer Pause möchte ich mal wieder ein Mikrofoto in die Runde werfen, wie man so schön sagt. Präpariert wurde eine Eibe (genau kann ich sie noch nicht bestimmen), hier kurz eine Zusammenfassung der Verfahrensweise:

-Bleichen in chlorhaltiger Lösung
-Wässern für 48 Stunden
-Färben mit FCA (direkt auf Objektträger)
-Nach ca. 8 min kurzes Differenzieren in 60% Ethanol
-Ein Teil der Schnitte wurde in Includal A eigedeckt, der andere zwecks Fotografie in Wasser
-Bildbearbeitung

Und hier das Ergebnis:
40x


Leider liegt der Schnitt wie so oft nicht plan und einige Artefakte kann man auch entdecken...

Heute werde ich mich nochmal an die Eibe wagen. Ich werde sie jedoch diesmal mit einer Kombination aus Astrablau und Safranin anfärben.

Wie steht ihr zu meinen Ergebnissen?

Viele Grüße
Sebastian

[derda]

Hallo Sebastian,

sieht doch ganz gut aus. Das Wässern nach dem Bleichen kann ruhig kürzer ausfallen. Ich wechsele einfach häufiger das Wasser und nach wenigen Minuten (~10) kann man mit dem Färben beginnen.

Das beim Schneiden mal Teile herausreissen ist normal. Mach einfach viele Schnitte und suche unter dem Stemi den besten heraus.

Das fotographische Ergebnis befiredigt noch nicht ganz. Zwar hast du den Hintergrund schön gesäubert, es fehlt aber irgendwie an Schärfe. Insgesamt gesehen macht das Bild einen milchig trüben Eindruck.

Viele Grüße

Erik

[Bernhard Lebeda]

Hallo Sebastian

ich schliesse mich im wesentlichen Erik an.

zwei Anmerkungen hätte ich:

ich bin etwas verwundert über das Färbeergenbnis, ich hätte mehr orange des Chrysoidins erwartet. Das sieht doch eigentlich jetzt schon eher nach Astrablau/Safranin aus! Da wird übrigens das differenzieren viel wichtiger sein.

Zum Foto: ich denke was Erik kritisiert liegt eben an der nicht Planität des Schnittes. Ich hätte hier einen Fokus Stack gemacht.

Ansonsten finde ich das Bild sehr gut!!


Weiter so!


Viele Mikrogrüsse

Bernhard

[Rolf-Dieter Müller]

Hallo Sebastian,

ich kann mich nur den vorhergehenden Anmerkungen anschließen.

Der Schnitt ist sehr schön, aber das Gesagte hinsichtlich des Bleichens und der Differenzierung sollte unbedingt berücksichtigt werden.

Wenn Sie wirklich Etzold FCA genommen haben, ist mit der Differenzierung in wasserhaltigem Alkohol das Chrysoidin ausgezogen.

Gerade bei Taxus-Zweigen wird die Cuticula intensiv mit Chrysoidin angefärbt und das ist leider nicht mehr zu sehen. Deshalb sollten Sie unbedingt bei Etzold FCA auf Differenzierung verzichten.

Falls Sie es noch einmal probieren möchten, finden Sie eine gelungene Etzold FCA-Färbung hier: http://www.mikroskopie.de/mikforum/read.php?2,21864,21864#msg-21864

Ich denke daran kann man sich ganz gut orientieren.

Viele Mikrogrüße
Rolf-Dieter Müller

[carpe diem]

Hallo,
vielen Dank für eure (ihre) Hilfe. Für das Differenzieren etc. muss ich wohl noch ein gewisses "Gefühl" entwickeln (ich betreibe dieses Hobby seit rund einem Jahr...). Aber Übung macht ja bekanntlich den Meister!

Gutes Gelingen!
Sebastian

[Fahrenheit]

Lieber Sebastian,

ein schöner Schnitt und ein schönes Bild mit dem 4er-Objektiv!

Hinsichtlich des Wässerns und der (hier nicht notwendigen Differenzierung) schließe ich mich meinen Vorrednern an.

Vielleicht schreibst Du noch etwas zur Schnitttechnik - ich nehme an, Du hast freihand oder auf einem Zylindermikrotom geschnitten?

Was die Anfärbung der Cuticula durch das Chrysoidin angeht, möchte ich Rolf-Dieter vorsichtig widersprechen. Ich denke, die Cuticula ist sehr wohl angefärbt und am Rand Deines Schnittes ist der zu erwartende kräftige Orangeton auch zu erahnen.
Ich vermute, den Schuldigen in der geringen Vergrößerung gefunden zu haben. Die Abbildungsleistung der Übersichtsobjektive ist bei einfachen Kondensoren oft nicht so gut. Das gleiche Problem habe ich an meinem Leica DME ebenfalls.

Bitte versuche doch einmal, einen Bildausschnitt Deines Präparates mit dem 10er oder ggf. dem 40er Objektiv zu machen, etwa an einer der hier gekennzeichneten Stelle:


Damit sollte es einfacher sein, die Färbung zu beurteilen - wie gesagt, ich vermute, dass Du durch das unnötige Differenzieren in 70%igem Ethanol keinen all zu großen Schaden angerichtet hast.  

Herzliche Grüße
Jörg

 

[carpe diem]

Hallo Jörg,
anbei dein "gefordertes" Foto  . Es stammt jedoch von einen anderen Schnitt aus der Serie. Es zeigt die Cuticula bei einer 400-fachen Vergrößerung, wie du es wolltest. Meine Schnitte entstehen immer freihand, als Einbettmedium verwende ich Möhren.

Hier also das Bild (quick and dirty): 


Ich hoffe, ich konnte helfen
Sebastian

[Fahrenheit]

Lieber Sebastian,

vielen Dank für das neue Bild. Es zeigt einen gut gelungenen Schnitt und würde durch einen Focus Stack komplett scharf werden.

Die Färbung der Cuticula kommt sehr schön heraus, sie sollte nur Chrysoidin-orange und nicht Fuchsin-rot erscheinen.
Hier hat Rolf-Dieter wohl doch das schärfere Auge gehabt.

Versuche es beim nächsten Mal ohne Differenzierung und erhitze den Objektträger mit dem Färbeansatz in den 8 Minuten Einwirkzeit einmal bis kurz vor dem Sieden, dann färbt das Chrysoidin sicherer an.

Zum Ende der Färbezeit den Schnitt mit Wasser spülen und dann sofort in Isopropanol überführen. Die erste Charge nach 30 Sekunden wechseln, um die Wasserkonzentration so schnell wie möglich zu verringern.

Herzliche Grüße
Jörg

[Siggi O.]

Meine Schnitte entstehen immer freihand, als Einbettmedium verwende ich Möhren.

Hallo Sebastian,

nur damit sich bei Dir kein falscher Begriff festsetzt, man spricht hier von einem Umschließungsmittel.
Weitere Infos bekommst Du hier.
http://www.mikroskopie-muenchen.de/cut-hand.html#bett

Viele Grüße
Siggi