Diatomeen Ausschnitte im Phasenkontrast

Begonnen von Soki, November 12, 2020, 09:51:21 VORMITTAG

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Soki

Hallo zusammen,

beim Durchsehen der wunderschönen Präparate von Anne habe ich mir gedacht, ich könnte einfach mal ein paar Ausschnitte von Diatomeen anfertigen. Also habe ich mir zwei passende Exemplare ausgesucht und einen gefälligen Ausschnitt gestacked.
Witzigerweise erinnern mich die Ausschnitte ein wenig an eine Discokugel und eine Landesflagge:)
Die Bilder sind, bis auf Nachschärfen nach der Verkleinerung, völlig unbearbeitet (nur intern durch den Neutral Modus->JPG).

Das erste Bild wurde mit dem Neofluar 100 1,3 PH3 (160mm) angefertigt (19 Einzelbilder), das zweite Vergleichsbild mit leicht abweichender Perspektive mit dem Planapo 100 1,3 PH3 (160mm) (21 Einzelbilder). Die Kameraeinstellungen waren gleich.

Das dritte Bild wurde mit dem Planapo 100 1,3 PH3 (160mm) aufgenommen (12 Einzelbilder).

Das war mein zweiter Stackingversuch mit dieser hohen Vergrößerung, ich habe auch leider zu wenig Einzelbilder angefertigt. Ich hoffe trotzdem, dass sie die/der ein- oder andere interessant findet:)

Vielleicht kann ja sogar jemand nur anhand der Bilder eine Bestimmung wagen.


Grüße,

Simon

Päule Heck

Hallo Simon,
was mir auffällt: Ich glaube, wenn Du mit dem 100er Objektiv arbeitest, kommst Du mit (nur) 17 Aufnahmen für's Stacken nicht hin. Das erkennst Du deutlich bei den ersten beiden Fotos. Da sind, besonders im oberen linken Bereich, "Schichtungen" entstanden, wo eigentlich nur einzelne Linien zu sehen sein dürften.  Ich selbst stacke da mit mindestens 100 Fotos.
Zur Bestimmung : Bei den ersten beiden handelt es sich um eine Coscinodiscus spec., bei der letzten um eine Actinoptychus spec. Genaueres möchte ich auf die Schnelle nicht wagen, gehe dem aber noch nach.....
Herzliche Grüße
Päule


Bob

Zitat von: Päule Heck in November 12, 2020, 19:01:30 NACHMITTAGSDa sind, besonders im oberen linken Bereich, "Schichtungen" entstanden, wo eigentlich nur einzelne Linien zu sehen sein dürften.

Hallo Päule,
da hast Du eine interessante und vermutlich richtige Beobachtung gemacht. Ich hätte auf Phasenkontrast-Heiligenscheine getippt, aber das sind sie wahrscheinlich nicht, diese Ringe. Das Stacking-Ergebnis bringt ein generelles Problem der heutigen Zeit zutage: Bilder, Videos, Töne und natürlich Brüste ;D sind optimiert und es wird zunehmend schwieriger, Original und verschönbesserte Fälschung auseinander zu halten.

Viele Grüße,

Bob

Soki

Hallo Päule,

da hast du natürlich Recht. Ich hätte allerdings nicht gedacht, dass ich sooo weit daneben liege. Ich dachte eher an 40-50 Stück. Ich werde das Ganze nochmals mit etwa 100 Bildern machen.
Danke für den Tipp und die Bestimmung:)

Grüße,
Simon

D.Mon

Hallo Simon,

mir gefallen die Bilder gut und ich bin schon  gespannt, auf die verbesserten Varianten.

Viel Grüße
Martin
Bitte per "Du" - Martin alias D.Mon
--
Glück kann man nicht kaufen.
Aber man kann ein Mikroskop kaufen und das ist eigentlich dasselbe!
--
Mikroskope: Motic Panthera U, Lomo MBS-10
Kamera: Sony ILCE-6400

deBult

#5
Hello Adi, Bob, Paule and Simon,

I'm working on my first (stacked) diatom pictures as well (see separate thread).
I need some " step by step" guidance please (as I do not yet know the correct terminology finding guidance in the Microfibel and this forum was no succes: most info found is on post processing software, not on how to get the pictures).

Step 1: how do I compute this depth of field/ sharpness zone (Schartentiefe) based on the "na" of the objective (most of my pictures are via my 20* na 0.70).

Step 2: I understand correctly I need 5-7 pictures within this sharpness zone?
           I assume I do this via little turns of the fine focus knob?

Step 3: How many steps do I need in total?

My current way of working is to
* Focus, Kohler,
* Move to where the specimen/object is just OUT of focus,
* Via little steps of the fine focus knob "walk through" the sharpness-zone of the object, taking a picture each step. In most (diatom) cases I need 10-20 steps with my 20* objective is this OK?

Your feed back is appreciated (READING the German language is OK for me)

Best, Maarten
Reading the German language is OK for me, writing is a different matter though: my apologies.

A few Olympus BH2 and CH2 stands with DIC and phase optics.
The correct number of scopes to own is N+1 (Where N is the number currently owned).

othum

Dear Maarten,

a frequently used approximation for the depth of field is 550nm/(NA)². I personally only take 2 photos within this range. Of course: the more the better, especially if you have to sort out some pics because of other problems.

And yes: I do that via the fine focus knob. Personally, I doubt, if all microscopes used can in reality achieve the small adjustments necessary for taking 10 or so pictures within the calculated sharpness zone of a NA 1.4 lens...

All the best, Oliver
Zeiss Axiovert S100 HF/Ph/DF, Auflicht-FL
Zeiss Axioskop 50 HF/Ph/Pol, Auflicht-HF/DF/Pol
Kamera: Pentax K-1

Bob

Hallo zusammen,
ADi hatte oben für n.A. 1,3 eine Schrittweite von 0,1my empfohlen. Übliche Feintriebe haben Skalierungen von 2my. Von Hand kann man das also nicht perfekt so vorwärtsdrehen. Und ob der Tisch durchgehend linear folgt ist noch eine andere Frage. Übliche Schrittmotoren haben 200 Schritte pro Umdrehung. Bei 0,1mm pro Feintriebumdrehung bekäme man 0,5 my Schritte. Man braucht also einen besonders feinen Schrittmotor und noch eine Untersetzung.

Viele Grüße,

Bov

anne

#8
Hallo Simon,
tolle Bilder!!!!
Um das PlanApo PH3 beneide ich Dich, ein tolles Objektiv!
Aber bitte erlaube die grundsätzliche Frage:

Warum um alles in der Welt fotografiert Ihr Diatomeen im Phasenkontrast?

Das kann in Ausnahmefällen absolut schöne Bilder geben, aber in Punkto Schärfe muss man damit nach meiner Erfahrung immer Abstriche machen!
Wenn man richtig knackscharfe Bilder will, dann im Hellfeld oder im DIC oder Hellfeld mit etwas Schräglicht, so wie Rolf das macht.

Zu der Anzahl Schritte muss ich hier auch noch etwas sagen. Man kann an den wenigsten Feintrieben so exakte und kurze Schrittweiten umsetzen, bei mir geht es am Olympus im Verhältnis sehr gut.
Aber ich mache Bilder mit dem 100 er Objektiv aus maximal 50 Bildern, meistens liege ich zwischen 30 und 50 Bildern.

Allerdings ist Päule hier der Meister, er macht wesentlich mehr Bilder.

Man sieht es aber dem Bild sehr genau an, wo zuwenig Schritte gemacht wurden und kann dann ja in einem zweiten Durchlauf versuchen genau an diesen Stellen mehr Schritte zu machen.

Hier nur mal beispielhaft ein Bild im Hellfeld mit dem 100er Objektiv, mit etwas Schräglicht, ca. 30 Bilder, nicht bis ins Detail knackscharf.



lg
anne

Soki

Hallo Martin,

das freut mich:). Ich bin auch schon gespannt, was ich da noch so hinbekomme.

Hallo Adi,

danke sehr:)

Die Formel zur Schärfentiefe ist mir bekannt, allerdings wird diese hauptsächlich in Verbindung mit Auflichtfotografie genannt (diese gilt natürlich theoretisch auch für Durchlicht). Bei so hohen Aperturen ist das allerdings praktisch nicht mehr anwendbar. 

Hey Marteen,

I read your thread and I really like your pictures. You are definitely on the right way. I also think that 2 to 3 images within the specific zone are enough. I'm not experienced in diatom photography, so I'm holding back with tips and let the experts go first:)

Hallo Anne,

ich habe das Objektiv erst seit kurzem (<60€ bei ebay) und bin glücklich mit meinem Schnäppchen.
Im Phasenkontrast habe ich in diesem Fall fotografiert, weil ich nur die PH3 Version dieser Objektive habe.
Ich finde Diatomeen im Phasenkontrast allerdings in Allgemeinen sehr ästhetisch, wenngleich die Detailzeichnung und Schärfe nicht ansatzweise mit Hellfeld bzw. Schiefer Beleuchtung mithalten kann.
Für wissenschaftliches Arbeiten mit Diatomeen, so habe ich gelesen, spielt der Phasenkontrast wohl keine (große) Rolle. Stimmt das?

Mit ruhiger Hand kann ich einen Teilstrich des Feintriebs in etwa vier Teile aufteilen. Kann mir jemand sagen, wie groß ein Schritt beim Zeiss GFL ist?

Dein Bild ist klasse! Die Plastizität ist sehr deutlich. Ich werde mich definitiv noch mehr auf das Hellfeld konzentrieren.


liebe Grüße an alle,
Simon

othum

Hallo Simon,

Zitat von: Soki in November 13, 2020, 12:04:19 NACHMITTAGS
Im Phasenkontrast habe ich in diesem Fall fotografiert, weil ich nur die PH3 Version dieser Objektive habe.

ich hoffe, Du weisst, dass man nicht unbedingt Phasenkontrast machen muss, nur weil man Ph-Objektive hat? Damit kannst Du natürlich auch ganz normale Hellfeld-Aufnahmen machen, oder schiefe Beleuchtung, etc. Gerade zum Stacken ist Phasenkontrast eher suboptimal und, wie Anne schon schrieb, auch nicht notwendig.

Beste Grüße, Oliver
Zeiss Axiovert S100 HF/Ph/DF, Auflicht-FL
Zeiss Axioskop 50 HF/Ph/Pol, Auflicht-HF/DF/Pol
Kamera: Pentax K-1

Soki

Hallo Oliver,

das weiß ich natürlich. Beim Neofluar 16 PH2 bekomme ich im Hellfeld auch ein tolles Bild, da habe ich aber kein Vergleich zum Hellfeldpendant. Beim 40er sehe ich schon Unterschiede zugunsten der Hellfeldvariante. Hier haben wir auch schon eine Apertur von 0,75.
Gestern habe ich auch den Zeiss Planapo 40 1,0 mit dem 40 1,0 PH3 verglichen und konnte noch deutlichere Unterschiede feststellen.

Ich denke aber, dass bei einer Apertur von 1,3 das Ganze wenig Sinn hat und die Bildqualität durch den Phasenring leidet.
Wie sind deine Erfahrungen?

Grüße,
Simon

othum

Hallo Adi,

Zitat von: Adalbert in November 13, 2020, 18:06:18 NACHMITTAGS

Ja, aber ich verwende einen mit 400 Schritten pro Umdrehung gesteuert von einem Controller, der 256 Mikroschritte erlaubt.

So einen (ähnlichen) Motor verwende ich auch. Problem: der Motor kann diese feinen Abstufungen leisten, das Mikroskop sie aber nicht unbedingt umsetzen, zB durch Torsion in der Wellenverbindung zwischen Motor und Feintrieb. Daher glaube ich, dass viele Mikroskopen diese feinen Schritte nicht reproduzierbar umsetzen können. Man hat dann am Ende natürlich die eingestellten n Bilder pro m Strecke, aber nicht in äquidistantem Abstand.

Beste Grüße, Oliver
Zeiss Axiovert S100 HF/Ph/DF, Auflicht-FL
Zeiss Axioskop 50 HF/Ph/Pol, Auflicht-HF/DF/Pol
Kamera: Pentax K-1

othum

Hallo Simon
Zitat von: Soki in November 13, 2020, 17:31:48 NACHMITTAGS

Ich denke aber, dass bei einer Apertur von 1,3 das Ganze wenig Sinn hat und die Bildqualität durch den Phasenring leidet.
Wie sind deine Erfahrungen?

Jetzt stehe ich auf dem Schlauch. Natürlich leidet die Abbildungsqualität durch den Phasenring im Objektiv. Aber im Phasenkontrast wird sie doch NOCH schlechter als im Hellfeld? Daher macht Ph nur Sinn, wenn man dadurch zusätzliche/andere Informationen generiert.

Beste Grüße, Oliver
Zeiss Axiovert S100 HF/Ph/DF, Auflicht-FL
Zeiss Axioskop 50 HF/Ph/Pol, Auflicht-HF/DF/Pol
Kamera: Pentax K-1

D.Mon

Hallo zusammen,

dieser Thread entwickelt sich ja zum absoluten Lehr und Lernthema.
Ich finde das sehr interessant (auch wenn ich nur einen Bruchteil davon selbst umsetzen kann).

Schöne Grüße
martin
Bitte per "Du" - Martin alias D.Mon
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Glück kann man nicht kaufen.
Aber man kann ein Mikroskop kaufen und das ist eigentlich dasselbe!
--
Mikroskope: Motic Panthera U, Lomo MBS-10
Kamera: Sony ILCE-6400