Calcofluor White Niederschlag in Lösung

[mlippert]

Hallo,

ich habe jetzt endlich, nach langem Suchen und viel investiertem Geld, ein Gramm Calcofluor White M2R auftreiben können. Ich hab eine Stammlösung hergestellt, aus 30 mg in 10 ml A dest., was auch gut funktionierte. Die gelben Kristalle haben sich gelblich in Wasser gelöst. Nach 4 Tagen jetzt hole ich die Lösung aus dem dunklen Schrank, und sie ist voll mit einem weißen, fluoreszierenden Niederschlag. Sie färbt noch, aber die Lösung an sich leuchtet jetzt unterm Mikroskop schon stark. Mikrobielle Verunreinigung ist nicht erkenbar. Hat jemand eine Idee was hier vor sich geht?

Grüße,
Micha

[jochen53]

Hallo Micha,

was ist Calcofluor White M2R? Gibt es dazu ein Daten- oder Sicherheitsdatenblatt zur Zusammensetzung?
Wenn es das ist, was ich vermute, dann könnte es sich dabei um eine Zubereitung aus einem otischen Aufheller und Calciumcarbonat als Trägersubstanz handeln. Wir haben in der früheren Firma so einen Rohstoff kiloweise verwendet, der hieß UVITEX OB-C (früher CIBA, jetzt BASF), das war eigentlich ein opt. Aufheller zur Einarbeitung in Polymere. Das Calciumcarbonat soll die Dosierung so kleiner Mengen und die gleichmäßige Verteilung im Polymer erleichtern. Derselbe Wirkstoff ohne CaCO₃ hieß UVITEX OB. Es gibt eine ganze Reihe solcher Fluoreszenzstoffe, die wasserlöslichen werden in Waschmitteln und z.B. in Lecksuchfluids verwendet und fast alle kommen heute aus China.
Ich bin mir nicht sicher, ob es sich dabei überhaupt um einen wasserlöslichen opt. Aufheller handelt. Die intensive hellblaue Fluoreszenz wurde optimal mit 366 nm angeregt.

Viele Grüße, Jochen

[Klaus]

Hallo Micha,

ich habe eine CFW Stamm- Lösung vor 3 Wochen angesetzt und zunächst im Kühlschrank aufbewahrt. Nach 10 Tagen: kein Niederschlag. Weil ich sie nicht mehr benötigte, ließ ich die Lösung bei Raumtemperatur stehen --> voluminöser Niederschlag. Die Stammlösung war übrigens immer leicht trüb. Sie soll sich aber im Dunklen bei 4 Grad Celsius lange (1/2 Jahr) halten.

Vielleicht hilft das weiter?

Gruß

Klaus

[mlippert]

Hallo Jochen,

Calcofluor white ist eine Reinsubstanz und der "heiße Scheiß" in der Detektion von Pilzzellwänden und teilweise auch Insektenteilen. Es gibt unendlich viele Bilder dazu hier im Forum und im Netz:

https://en.wikipedia.org/wiki/Calcofluor-white

Das Zeug ist sehr schwer zu bekommen und wird aktuell in USA persönlich für einen abgefüllt und dann über VWR oder Sigma zu horrenden Preisen ausgeliefert. Daher will ich vermeiden, dass ich da was falsch mache.

Ich habe die Lösung tatsächlich dunkel, aber nicht kalt gelagert! Ich werde nachher mal versuchen, ob ich es mit NaOH wieder in Lösung bekomme. Das mit der Kälte ist ein super Tipp! Hast Du auch probiert die Stammlösung zu aliquotieren und einzufrieren?

Grüße,
Micha

[jochen53]

Hallo,

das Zeug ist tatsächlich wasserlöslich und international unter dem Namen Fluorescence Brightener 28 bekannt. Unter diesem Namen findet man mehr Informationen.
Wie bei Feinchemikalien üblich, kommt das heute alles aus China. Hat nicht irgendjemand hier Kontakte zur Papierindustrie, speziell weißes Druck- und Kopierpapier, da ist doch überall sowas drin?

https://www.chemicalbook.com/ChemicalProductProperty_EN_CB8486659.htm
https://www.chemsrc.com/en/SupplierProduct/4404-43-7_1137723.html
https://www.pylamdyes.com/products/optical-brighteners

Viele Grüße, Jochen

[Florian D.]

Hallo,

ich sehe, dass das Zeug auch unter dem Namen Fungi-Fluor Kit als 0.05% Lösung vertrieben wird. Dort steht auch, dass Kaliumhydroxid als "clearing agent" enthalten ist.

Viele Grüsse
Florian

[mlippert]

Ja, dann ist es noch teurer. Das KOH ist aber nicht in der Lösung sondern normalerweise eine 10-20% Lösung mit der man Haut und Haare vorbehandelt um sie aufzulösen, so dass die Pilze sichtbar werden. Dauerhafter ontakt mit KOH zerstört CFW wohl.
Ich bezweifle, das CFW irgendwo noch kommerziell groß verwendet wird. Die üblichen Verdächtigen bieten eher Uvitex & Co. an. VWR bezieht es jedenfalls aus USA.

[Ralf Feller]

Hallo,

ich habe Calcoflour vor Jahren bei Hund als Mycoval gekauft,
ist bis heute haltbar und liefert gute Ergebnisse.

Wird auch bei Jülich beschrieben, verkauft???

https://www.juelich-bonn.com/site/microscopes/mykoval/

https://www.hund.de/de/instrumente/mikroskope/anwendungsgebiete/dermatologie.html

https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=1871.0

Es gibt auch etwas hier:
https://www.magnacol.co.uk/starter-kits/FluorDyeStarterKitDeluxe.html

Habe es gekauft, auch den optischen Aufheller, aber noch nicht ausprobiert.


LG, Ralf

[Rene]

Hi Micha, it precipetates at pH <6 or so. So keep it slightly alkaline with a bit of bicarbonate or so. Most recipes for fungal use use it with KOH anyway. Solubility is low.
Haven't got my working recipes at hand, but I dilute it very much. Really, your gram of CWhite will last forever.
The stuff will keep quite well, even on the bench in a brown bottle. I do store my stocksolution (1 mg/ml) in the fridge and haven't seen it detoriating since 2005. Just to be sure that it doesn't verschimmelt, I have added a bit of formaldehyde (0.25%), even though I don't know whether that is really necessary.

Good luck, René

[mlippert]

Hi Rene,

adding some preservative is a good idea. I think I'll freeze the aliquoted stock. Is it really the pH or do the sodium ions play a role? Typically, people recommend adding some NaOH. Would a low conc. of KOH do the same? I don't want a potassium salt falling out.

Best,
Mike

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
schön, dass es diesen Thread gibt. Wollte auch gerade einen starten, da ich das Zeugs suche. Für meinen Achromatium-Artikel habe ich bei Heribert Cypionka gelesen, dass er die Verpilzungsexperimente auch mit diesem Chalkofluor gemacht hat. Also muss das Zeugs her.

Ich habe vor vielen Jahren diesen Magnakol-Starterkit gekauft. Eine ziemliche Sauerei: die Farbstoffe kommen in kleinen Tüten. Und wer schon mal Fluoreszenz-Farbstoffe aus Tüten in kleine Glasflaschen umgefüllt hat.....

Da war eine Flasche "Optical Brigthener 25 ml" dabei. Habe ich nie benutzt, weil ich nicht wusste, was ist das und wofür kann man es verwenden. Leider steht hinter dem "Brigthener" kein weiteres Kürzel mehr. Ob das Zeugs Chalcofluor ist? Da werde ich wohl mal Pilze färben müssen.

Grüße
Carsten


EDIT : habe bei Magnacol eine Anfrage gestartet

[mlippert]

Das kann alles mögliche sein. Früher war CFW wohl eine normale Substanz, die als Aufheller verwendet wurde und günstig war. Mein Eindruck ist, dass es heute im Prinzip eine Spezialchemikalie für die Mikroskopie ist Im Prinzip ist es aber egal was da drin ist. Die meisten optischen Aufheller funktionieren irgendwie. CFW hat nur den Vorteil, relativ hell zu leuchen, wenigstens prinzipiell verfügbar zu sein (enige hellere sind de facto gar nicht beschaffbar) und - man kann es wohl irgendwie auch blau statt UV anregen. Ging bei mir aber nicht! Evtl. geht das wirklich nur in Kombination mit Evans Blue.
Ich habe auch eine Flasche von diesem Hobbythek Aufheller, den werde ich auch mal testen. Den gibt's für einen Appel und ein Ei bei Ebay.

Grüße,
Micha

[Carsten Wieczorrek]

Hallo Micha,
Helligkeit wäre mir nicht so wichtig. Wichtig ist die Pilz-Spezifität.
Carsten

[mlippert]

Spezifisch sind sie wohl alle, nehme ich an. Müssen ja an Zellulose haften. Du brauchst aber zwingend eine UV Anregung!

[Carsten Wieczorrek]

Ja, das ist mir bekannt, aber 365 nm werden da wohl langen. Carsten