Diatomeen-Auflösungstest

Begonnen von ammererlutz, November 28, 2022, 17:04:03 NACHMITTAGS

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ammererlutz

Hallo mal wieder in die Runde,
Anhand von einem Diatomeen Testpräparat habe ich mal das 100er Zeiss PlanNeofluar am Axioskop 2 getestet (NA 1.3), Kondensor H/ D/ Ph/ DIC, NA 0.9

wäre da noch mehr herauszuholen ?

Ich muss gestehen, die Darstellung der Striae und der Poroide mit dem 100er Objektiv war extrem schwierig, im HF/ Ph überhaupt nicht erkennbar, die Striae/ areolae von Navicula oblonga im DIC gerade noch erkennbar, die Poroide von Pinnularia nobilis auch im DIC nicht erkennbar. Die einigermaßen brauchbarsten Erebnisse lieferte nur Pol mit leicht schräger Beleuchtung. Dimensionen von 0,1 µm sind wohl auch für gute Optiken extrem, aber gäbe es da noch bessere Resultate ? ( zB mit achrom-aplan 1.4 Kondensor ?)

Bilder:
400xDIC
1000xDIC
1000x Pol-schräg Navicula oblonga und Pinnulara nobilis jeweis mit Details

EDIT: "Diatomeen" aus "Diatnomeen" gemacht (F.S.)








mit freundlichen mikroskopischen Grüßen,
Lutz

"Mikroskope und Fernrohre verwirren eigentlich den reinen Menschensinn" ( Goethe)

anne

Hallo Lutz,
das sind hervorragende Ergebnisse. Steigern könntest Du es noch mit COL.
Das ist hier gut beschrieben:
https://www.klaus-henkel.de/rfb-col.html
lg
Anne

Jürgen Boschert

Hallo Lutz,

wie Anne, denke ich auch, dass Du hier -richtungsselektiv- die Auflösung nur noch durch schiefe Beleuchtung oder COL. oder mit UV steigern könntest (s. HP von Peter Höbel
Beste Grüße !

JB

rhamvossen

Hallo Lutz,

Wenn du COL erreichen willst mit dem Plan Neofluar 100, dann brauchst du einen Dunkelfeld Kondensor 1.2-1.4. Aber die von dir gezeigte Diatomeen kann man schon mit ein normaler 40er Achromat in Kombination mit ringförmiger schiefe Beleuchtung auflösen. Beste Grüsse,

Rolf

ammererlutz

Danke für die Tipps,

ich hab jetzt einige Zeit mit dem Basteln von Zentralblenden verbracht, für das 40:1 und das 100:1 Objektiv. Leider sind im Vergleich zur bereits angewandten schrägen Beleuchtung im Pol-Licht keine weiteren Verbesserungen feststellbar gewesen.
Einen Dunkelfeldkondensor 1.4 besitze ich leider nicht.
Gibt es Vergleichsaufnahmen, wie viel ein 1.4 Immersions-Kondensor (H oder D )im Vergleich zum 0.9 Universal noch bringt ? 
mit freundlichen mikroskopischen Grüßen,
Lutz

"Mikroskope und Fernrohre verwirren eigentlich den reinen Menschensinn" ( Goethe)

sushidelic

Hallo Lutz,

einen direkten Vergleich habe ich nicht, aber ein Ergebnis mit 1.4 Dunkelfeldkondensor als COL (und 60x/1.42 Apo, 2x Optovar, fast geschlossene Polfilter, 450nm monochromatisches Licht, mono Kamera).

Das ist das Maximum, was ich an Poren aus der Pinnularia rausholen konnte.

Liebe Grüße,
Michael

anne

Hallo Lutz,
genau diese Bilder hatte ich im Kopf. Man muss aber bedenken, dass Michael wirklich ein begnadeter Mikrokfotograf ist und Du hier das Maximum des Möglichen siehst.
lg
anne

ammererlutz

#7
Zitat von: sushidelic in November 30, 2022, 08:18:05 VORMITTAG
Hallo Lutz,

einen direkten Vergleich habe ich nicht, aber ein Ergebnis mit 1.4 Dunkelfeldkondensor als COL (und 60x/1.42 Apo, 2x Optovar, fast geschlossene Polfilter, 450nm monochromatisches Licht, mono Kamera).

Das ist das Maximum, was ich an Poren aus der Pinnularia rausholen konnte.

Liebe Grüße,
Michael

Puh, naja, das ist schon was anderes! Danke für das beeindruckende Bild.

Von der monochromen Kamera und  monochromatischem Licht mal abgesehen, verstehe ich das recht, das wäre zB  der Kondensor 1,4 H/D/Ph/Dic ( einen anderen finde ich mit 1.4 bei Zeiss online nicht, falls kompatibel mit Axioskop2 ) ( für stolze 2400 €), dann nimmst du die D  Einstellung, Ölimmersion des Kondensors, die Zentralblende auf einem Objektträger ( oder Filterscheibe)  wie im COL Artikel beschrieben am Flterhalter plus 90° gekreuzte Polfilter ?
mit freundlichen mikroskopischen Grüßen,
Lutz

"Mikroskope und Fernrohre verwirren eigentlich den reinen Menschensinn" ( Goethe)

sushidelic

Hallo Lutz,

bei der numerischen Apertur von 1.42 des Objektives und dem 1.4er Dunkelfeldkondensor ergibt sich automatisch die ringförmige Beleuchtung, ich habe also gar keine weitere Blende benutzt.

Der Aufbau in Richtung Kamera war:

- 450nm Interferenzfilter auf dem Lichtaustritt
- Polarisator drehbar
- Dunkelfeldkondensor 1.4 Öl
- Präparat
- 60x 1.42 Öl
- Analysator fast komplett gekreuzt
- 2x Optovar
- Direktprojektion des Zwischenbildes auf Kamera ASI 183MM Pro (mono Astrokamera mit 2.4µm Pixeln)

Das Ergebnis ist gestackt, beim Crop allerdings nur über einen sehr kleinen Fokusbereich.

LG Michael

Aljoscha

Hallo,

Strukturen von 0,1 Mikrometern? Das entspricht 100 nm. Sichtbares Licht hat Wellenlängen von 400 - 700 nm. Die fraglichen Strukturen sind also kleiner als die Wellenlänge des Lichtes. Wie sollen sie aufgelöst werden?

Viele Grüße

Alexander

sushidelic

Hallo Alexander,

es lassen sich sehr wohl Punkte unterhalb der Wellenlänge des Lichtes trennen.

Die Formel zur Berechnung des theoretischen Auflösungsvermögens lautet

Lichtwellenlänge / (NA objektiv + NA Kondensor)

Das ergibt bei 450 NM und 2x 1,4 etwa 160nm. Bei Col/Pol geht das sogar noch etwas darunter, da der Kontrast gesteigert wird.
In diesem Bereich ist aber logischerweise nur noch eine quantitative Aussage möglich, da alle Strukturen an der Auflösungsgrenze nur noch als runde Punkte erscheinen wegen der Beugungseffekte. Man kann in meinem Bild also keine Rückschlüsse ziehen, ob die Poren nun rund oder eckig sind, obwohl sie eindeutig rund erscheinen.

LG Michael

momotaro

#11
Hallo Lutz,

der achromatisch-aplanatische Kondensor 1,4 H D Ph DIC (424208-0000-000) ist nur kompatibel zu den Mikroskopen Axio Imager bzw. Axio Observer.

Einen Dunkelfeldkondensor, nämlich den Ultra condenser 1.2/1.4 (0.75-1.0) (465500-0000-000), gibt es schon um 909,16 € für das Axiolab, Axio Scope.A1 und Axioscope 5, 7. Dazu wird noch der Kondensorhalter Z für 266,56 € benötigt. In Summe 1.175,72 €.

LG Helmut
,,Die Kunst ist lang, das Leben kurz, das Urteil schwierig, die Gelegenheit flüchtig." — Johann Wolfgang von Goethe Wilhelm Meister's Lehrjahre (1786–1830)

ammererlutz

#12
Zitat von: momotaro in November 30, 2022, 20:44:15 NACHMITTAGS
Hallo Lutz,

der achromatisch-aplanatische Kondensor 1,4 H D Ph DIC (424208-0000-000) ist nur kompatibel zu den Mikroskopen Axio Imager bzw. Axio Observer.

LG Helmut

danke , dann geht das sowieso nicht, muss ein älteres 1.4 Kondensor Modell sein, das in meiner Axioskop2 Anleitung als kompatibel beschrieben ist.
mit freundlichen mikroskopischen Grüßen,
Lutz

"Mikroskope und Fernrohre verwirren eigentlich den reinen Menschensinn" ( Goethe)

Bob

Hallo zusammen,
bei direkten Vergleichen würde ich vorschlagen, auch den Brechungsindex des Eindeckmittels zu berücksichtigen. Ich meine, dass der bei manchen Testplatten nicht übermäßig hoch war, man mit anderem Eindeckmittel also mehr herausholen kann.

Viele Grüße,

Bob