Aufhellung von Chitinteilen mit Wintergreen-Öl

[plaenerdd]

Hallo,
wie aufmerksame Leser vielleicht wissen, suche ich nach Möglichkeiten Chitinteile aufzuhellen, ohne die Objekte (z.Z. Flöhe) dabei zu mazerieren. Speziell die Muskeln sollen mit Polarisationsoptik sichtbar gemacht werden. Jjetzt ist mein wintergreen-Öl eingetroffen, das auch dafür empfohlen wurde.
 hier im Forum habe ich schon ein wenig geguckt, was da so zu wintergreen als Aufhellungsmittel für Chitin so geschrieben wurde.
Jetzt bleiben bei mir 2 Fragen, die ich nicht eindeutig beantwortet fand:
1. Kann man seine Objekte aus 70%igem Alkohol direkt in das Öl tun, oder muss man vorher vollständig entwässern.
2. Ist die aufhellende Wirkung überhaupt nachhaltig im Sinne einer Entfärbung oder geht sie wieder verloren, wenn man in ein anderes Medium überführt, weil das Öl die Proteine nur maskiert?

Ich möchte, anschließend gerne über Xylol in Malinol einzuschließen.

LG Gerd

[liftboy]

Hallo Gerd,

mein Öl ist noch unterwegs :-(
Zum entfärben kann ich aber sagen, dass der Vorgang permanent und nicht reversibel ist. Ich hab das mit meinen Präparaten, die im Hoyers eingedeckt sind auch; die Präparate werden mit der Zeit immer heller und durchsichtiger, bis die Farbe ganz raus ist. Liegt wohl am Chloralhydrat.

Grüße
Wolfgang

[hhuijbre]

Hello,

I used wintergreen oil to make fly maggots completely transparent. If they were then returned to alcohol, they returned to their original state. This process is therefore completely reversible. I expect that if an object is transferred from an essential oil (wintergreen oil or also clove oil) to a resin, the mixture of oil and resin will temporarily have a higher refractive index. If the essential oil eventually evaporates from the resin, the transparency should also decrease.

Best wishes,

Hans

[plaenerdd]

Hallo Wolfgang,
mit Chlorhydrat ist das nicht zu vergleichen. Chlorydrat mazeriert die Weichteile ähnlich wie NaOH oder KOH, nur langsamer. Auch zerstört es Farben.

Nelkenöl sollte schon dauerhaft entfärben, denn das Öl wird deutlich braun, aber ob das beim Wintergreen-Öl auch so ist, weiß ich noch nicht wirklich. Habe eher vom Gegenteil gehört, wie Hans ja auch schreibt.
Nach einem Monat in dem Nelkenöll, ist das Ergebnis aber noch nicht so richtig überzeugend. Die Beine sind schon recht durchsichtig und ich konnte die Muskeln gut sehen. Der Körper ist aber immer noch sehr dunkel. Laut SCHLÜTER, W. soll aus Nelkenöl direkt in Kanadabalsam eingedeckt werden, ohne Xylol dazwischen. Mal sehen, ob das auch mit Malinol funktioniert, das dem ja sehr ähnlich ist. Nelkenöl härtet die Objekte aber auch stark.

Hallo Hans,
That's what I suspected. Will probably be similar to oil on a sheet of paper. This becomes transparent, but only as long as the oil is in there.

Do you convert directly from the 70% alcohol into the wintergreen oil?

Best wishes
Gerd

[Jürgen Boschert]

Hallo Gerd,

von der Milbenpräparation her kenn ich noch, dass man die Tierchen in einem Zwischenschritt in Milchsäure einlegt. Die hellt auf und entspannt die Muskulatur, sodass sich die Tierchen entfalten und eine natürliche Haltung einnehmen.

[plaenerdd]

Hallo Jürgen,
Danke für den HInweis. Ja, von Milchsäure habe ich auch schon gelesent, aber noch nie probiert. Habe gerade mal geschaut: Beim großen "A" gibt 's 80%ige Milchsäure. In welcher Konzentration benutzt man die Milchsäure?
LG Gerd

[Jürgen Boschert]

Hallo Gerd,

ich habe seinerzeit die Angaben von Stehli aus Mikroskopie für Jedermann verwendet. Da war es 75%-ige Milchsäure; eingedeckt wurde dann in Faure´scher Lösung oder Polyvenyllactophenol.

[Peter Reil]

Hallo Gerd,

ich kann nur von Hydromatrix berichten. Das Zeugs ist echt gut, einfach anwendbar und hellt leider auch die Präparate auf.
Bei Pilzen ist das aber nicht erwünscht.

Wie stark das bei "Käfer"-Chitin zutrifft, kann ich nicht beurteilen.

Gruß
Peter

[jochen53]

Hallo,
darf ich fragen, ob das Wintergreen Öl ein natürliches Produkt oder ein synthetisches ist? Laut Römpp bersteht es zu etwa 99 % aus Methylsalicylat (Salicylsäuremethylester), das auch in Arzneimitteln und früher in Bubble Gum Kaugummis als Wirk- und Aromastoff verwendet wurde.
Davon hätte ich noch ein Fläschchen rumstehen.
Viele Grüße, Jochen

[hhuijbre]

Dear Gert,

as an entomologist I am reasonably familiar with making slides of insects. However, the literature on this is quite confusing. I quote here "BIRGER NEUHAUS, THOMAS SCHMID & JENS RIEDEL
Collection management and study of microscope slides: Storage, profiling, deterioration, restoration procedures, and general recommendations" in which it is well explained. In general, there are two techniques for making insects transparent:

3.1.2 Chemical maceration
Internal organs of small invertebrates are often macerated, viz, chemically destroyed, and only the cuticular exoskeleton studied by light microscopy. This classical process has been confused with “clearing” in numerous publications. However, clearing is a totally different, physical phenomenon that, unlike chemical maceration, does not destroy the structural integrity of a specimen (see chapter 3.1.3 Physical clearing). To complicate matters even further, “clearing” in histology also means clearing from water.

3.1.3 Physical Clearing
Stained or unstained tissue is “cleared” by a clearing agent that remains in the specimen during mounting and is part of the permanent mount. The classical clearing is a physical phenomenon and acts via the refractive index of the clearing agent being close to that of the specimen; therefore, structural characters of a specimen become less visible, whereas stains stand out optically.

While Chemical maceration procedures are well documented, Physical clearing procedures are much rarer and often confusing. Both clove oil and wintergreen oil have a refractive index approximately equal to the internal tissues of an insect. So you can make insects transparent with both oils. If you embed via xylene, which has a much smaller refractive index, you lose some of the transparency. It is precisely the mix of resin and oil that clarifies optimally.

I would try to completely remove the water, then in wintergreen oil and enclose in Canada balsam with few drops of wintergreen oil. I am not sure if malinol can be mixed with wintergreen oil and has exactly the same refractive index as Canada balsam

Perhaps you can also consult the authors of the above article

Best wishes,

Hans

[plaenerdd]

Hallo Jochen,
ich gehe davon aus, dass wintergreen-Öl ein Naturprodukt ist. Das sind jedenfalls die roten Beeren und grünen Blätter auf der Flasche.

Hallo Hans,
ja so ähnlich habe ich das auch verstanden. Der Brechungsindex ist sehr entscheidend, aber auch die Mischbarkeit mit dem Harz. Nelkenöl lässt sich jedenfalls ungestraft mit Malinol mischen. Mit dem wintergreen-Öl muss ich es erst noch ausprobieren.

Das mit dem vollständigen Entwässern ist zweischneidig: Ich müsste die Tiere erst bei 70% Ethanol strecken und arrangieren (vor allem die Beine ausrichten) und dann mit höher prozentigem Alkohol härten, bevor ich sie vollständig entwässere, denn danach sind sie nicht mehr so beweglich sondern hart und brüchig. Aber das mache ich ja auch bevor ich in Xylol gehe, denn das hat auch diese härtende Wirkung wie hochprozentiger Alkohol und Nelkenöl.

LG Gerd

LG Gerd

[jcs]

Eine sehr umfangreiche Arbeit zum Klären von verschiedenen Gewebetypen (inkl. Fruchtfliege als Beispiel eines Insekts) findet man hier
https://repositum.tuwien.at/bitstream/20.500.12708/15292/2/Pende%20Marko%20-%202020%20-%20Large-scale%20light-sheet%20imaging%20in%20combination%20with...pdf

Auf Seite 23 ist eine Tabelle, die eine Vielzahl an möglichen Substanzen aufführt, die für solche Zwecke geeignet sind. Viele dieser Chemikalien sind vermutlich nicht ganz einfach zu bekommen, aber einige sind auch "haushaltsüblich".

LG

Jürgen

[Aljoscha]

Hallo,

Wintergreen Oil ist Salicylsäuremethylester. Die Substanz kann sowohl aus Pflanzen gewonnen als auch recht einfach synthetisch hergestellt werden.

Viele Grüße

Alexander

[jochen53]

Hallo Alexander,
genau so ist es auch entstanden. Salicylsäure mit einem Überschuß an Methanol und einem guten Schuß Schwefelsäure ein paar Stunden unter Rückfluß gekocht, in Wasser gegossen, mit Sodalösung ausgewaschen, im Scheidetrichter abgetrennt und im Vakuum destilliert.
Jochen

[Tommmy]

Hallo Gerd!

Hier einmal ein ganz anderer Gedankenansatz.

In der Uni in Leipzig wurden wir Studenten immer auf die Persönlichkeit von Werner Spalteholz verwiesen, dessen anatomische Präparate von Einzigartigkeit zeugten. Er hatte ein Verfahren entwickelt, diese Präparate durchsichtig zu machen.

Nun stellt sich mir die Frage, ob, was bei anatomischen Präparaten geht, nicht auch bei Flöhen gehen sollte.....

Es gibt ein Buch von Ihm, was ich auch besitze, aber nicht finde :-(, was diese Methode beschreibt.
Definitiv ist dieses Buch aber über die Fernleihe der Bibliotheken erhältlich.

Hier mal zu recherchieren sollte sich lohnen!