Paraffinschnitte aus dem Streckbad auf den Objektträger übertragen

[Aljoscha]

Hallo,

Heute habe ich mich wieder einmal an Paraffinschnitten von Pflanzen versucht. Die Idee war, die Schnitte aus dem Streckbad auf einen Adhäsions-Objektträger zu übertragen, zu entparaffinieren und anschließend zu färben.

Gescheitert bin ich an der Übertragung auf den Objektträger. Wenn ich versucht habe, einen Schnitt aufzunehmen, hat der dich sofort zusammengerollt oder zusammengefaltet. Auf dem Objektträger kam dann ein Klumpen an. Wie kann ich das besser machen?

Viele Grüße

Alexander

[Jürgen H.]

Hallo Alexander,

Wann genau rollt oder klumpt der Schnitt? Bei der Aufnahme mit dem OT, also beim Aufziehen auf den OT oder schon bei Schneiden?



zumAufziehen zwei Methoden:

Entweder Du schmeißt den Schnitt  in ein Wasserbad mit ca 40 Grad warmen Wasser, und fischst den Schnitt anschließend mit dem OT heraus.

Oder Du beschichtest einen Ot mit einer dünnen Wasserschicht und legst den Schnitt mit einer Pinzette und mit einer tangentialen Bewegung auf den beschichteten OT. In beiden Fällen kommt der OT danach auf die  Wärmeplatte, auch bei ca 40 Grad.

In beiden Fällen muss der Schnitt mit der glänzenden  Seite nach unten aufs Wasser. Entmineralisiertes abgekochtes Wasser verwenden.

In dem Moment, in dem der Schnitt auf dem Wasser warm wird, sollte er sich vollständig ausbreiten und glätten.

Erst wenn der Schnitt vollständig abgetrocknet ist, weiter auf der Wärmeplatte bei steigender Temperatur erhitzen bis er gerade glasig wird.

Ich gehe davon aus, dass Dein Wasserbad nicht warm genug war. Die Temperatur sollte ein paar Grad unter dem Schmelzpunkt des Paraffins liegen. Wenn dieTemperatur zu hoch ist, zerfließt der Schnitt, wenn siezu niedrig ist, entfaltet sich der Schnitt nicht.

Wenn sich allerdings der Schnitt schon auf dem Messer einrollt oder stark krumpelt, stimmt vermutlich der Freiwinkel des Messers am Mikrotom nicht. Oder die Schneide ist nicht scharf oder verdreckt, verklebt.


Viel Erfolg

Jürgen

[Aljoscha]

Hallo Jürgen,

mit dem Objektträger herausfischen werde ich mal probieren. Alle Versuche die Schnitte mit Werkzeug auf den Objektträger zu übertragen sind fehlgeschlagen. Die Wassertemperatur dürfte dabei auch eine Rolle gespielt haben. Das waren eher 35 Grad.

Mit dem Einrollen beim Schneiden habe ich auch noch Probleme. Das passiert selbst beim geringstmöglichen Freistellwinkel des Messers. Da hilft es aber, den Schnitt mit einem Pinsel zu führen.

Viele Grüße

Alexander