Nelken- und Wintergreen-Öl- spät aber es geht

[Gerd Schmahl]

Hallo,
ich hatte vor 7 Monaten nach einem Mittel zum Aufhellen von Chitin gesucht und war in der Literatur auf Nelkenöl gestoßen. Auch Wintergreen-Öl wurde empfohlen.Beides brachte aber keine all zu erfolgreichen Ergebnisse bei meinen doch recht dunklen Vogelflöhen, zumindest zunächst nicht. Die Aufhellung war zu gering und schien auch gar nicht weiter fort zu schreiten. Die Proben hatte ich anfangs alle paar Tage kontrolliert, aber es tat sich nicht wirklich was. Es gab sogar die Meinung, die Aufhellung beruhe nur auf optischen Effekten und sei somit nicht nachhaltig.

Irgendwann habe ich aufgegeben und die beiden Schnappdeckelgläser vergessen. Sie standen bis heute auf der Fensterbank. Ich war sehr erstaunt, als ich sah wie hell und transparent die Tiere heute waren und das in allen beiden Gefäßen.

Das angehängte Foto ist direkt in Wintergreen-Öl entstanden. Ich habe die Flöhe danach aber kurz in Xylol abgespült und in Malinol eingedeckt. Bis jetzt sehen sie weiterhin sehr schön transparent aus. Jetzt bin ich sehr gespannt, ob das auch so bleibt oder mit dem sich verteilenden Öl auch die Transparenz wieder nachlässt.

Schön sieht man im Polarisationskontrast mit Rot I die quergestreifte Muskulatur in den Beinen, aber auch im Kopfbereich.

Zum Schluss noch eine Warnung: Nelkenöl greift Glas an. Es sollte nicht auf Frontlinsen gelangen. Man könnte ja auf die Idee kommen, es direkt als Immersionsöl zu verwenden. Das wäre nicht gut. Mein Schnappdeckelglas sieht, dort wo das Öl stand, wie Milchglas aus und auf diese Wirkung wird auch von SCHLÜTER, W. in "Mikroskopie für Lehrer und Naturfreunde" hingewiesen.

Die Fotos:
Bild 1: nach 7 Monaten in Wintergreen-Öl - X-Pol + Rot I ; Stitch aus 2 Fotos mit dem SPLan4-Objektiv
Bild 2: Ausgangszustand
Bild 3: Detail mit SPlan10 in X-Pol

LG Gerd

[hhuijbre]

Dear Gert,

a very interesting result. By coincidence I had also some bird fleas in clove oil since June and there is no change yet. They are in plastic tubes on my desk and out of reach of sunlight. Could it be that UV light in the window sill has a bleaching effect?
Very strange that glass is affected by clove oil. You would almost think there was something alkaline mixed in. I do remember reading somewhere that old clove oil clears better.

Best wishes,

Hans

[Gerd Schmahl]

Dear Hans,
It may be that sunlight helped in this case. And I pickled the fleas on February 10th. That's more than half a year ago.
Best wishes ,
Gerd

[Gerd Schmahl]

Hallo,
Nelkenöl scheint in der Tat nicht so gut zu gehen wie das Wintergreen.
Bild 1: ein Weibchen. Das sah unter dem Stereomikroskop noch ganz gut aus, hat aber innerlich schwarze Bereiche
Bild 2: ein Männchen. Das sieht nun richtig böse aus. Ich weiß nicht, was hier passiert ist. Vielleicht waren hier Bakterien und Pilze am Werk?
Beide Präparate sind schon in Malinol eingedeckt. Das Wintergrenn-Präparat von gestern habe ich inzwischen auch in Malinol, aber das sieht immer noch gut aus.
LG Gerd

[rolo-m]

Hallo Gerd,
mit Photoshop geht noch ´was.
LG Roland

[Gerd Schmahl]

Hallo Roland,
ja, das Weibchen geht auch noch, aber das Männchen... Da ist auch visuell nichts zu machen.
Ich hatte die Bilder auch nicht groß weiter bearbeitet, weil sie es nicht wirklich wert waren. Mir ging es vor allem darum zu zeigen, dass die Aufhellung in Wintergreen besser funktioniert als die mit Nelkenöl.
LG Gerd

[Gerd Schmahl]

Hallo,
nach 4 Monaten Eindeckung hier noch mal ein paar Fotos von den inneren Organen, die im Gegensatz zu Mazeration in NaOH-Lösung, bei der Aufhellung in Wintergreenoil erhalten bleiben.
Zu nächst ein Übersichtsfoto, welches zeigt,dass diese Aufhellung der Mazerationsmethode nicht nachsteht:


Hier eine Übersicht der von mir lokalisieren inneren Organe im Hinterleib:

Hier noch einmal etwas detaillierter Teile des Verdauungssystems:


Hier mal eine schöne Tracheenverästelung, die man allerdings auch nach der Behandlung mit NaOH findet, da sie mit Chitin verstärkt sind:


Die Organe liegen natürlich im Raum über und unter einander. So richtig interessant wird es deshalb beim Durchfokussieren. Hier der Bereich um die Spermatheka (Samentasche) als animiertes GIF verschiedener Schärfeebenen. Im Mazerationspräparat bleibt davon nur die Spermatheka selber übrig:


Ich hoffe mit diesen Bildern die Leistungsfähigkeit dieser Methode und auch die Dauerhaftigkeit der Aufhellung dokumentieren zu können.

LG Gerd Schmahl

[purkinje]

Hallo Gerd,
sehr schöne und interessante Doku, danke sehr.
"Tissue clearing" ist ja auch bei den heutigen Superresolutionsmikroskopikern ein 'heißer Scheiß'.
Wintergreen-Öl, mit zusätzlich Benzylbenzoat auch Spalteholz clear genannt wird bis heute in manchen Protokollen benutzt:
Can Developments in Tissue Optical Clearing Aid Super-Resolution Microscopy Imaging?
Werner Spalteholz 'translucente' anatomische Präparate müssen wohl das 'must-see' im Dresdner Hygienemuseum gewesen sein.
Beste Grüße Stefan

[rlu]

Hallo Gerd und Stefan,

Tissue Clearing ist schon super interessant.
Ganz abgesehen von dem wirklich schönen Präparat.

- Ist da noch Wintergreenöl drin oder wurde es mit Xylol ausgewaschen? -
- Ist wahrscheinlich auch eine Frage, wie groß die "Spülöffnungen" waren, d.h. wie schnell die Flüssigkeit ausgetauscht werden konnte.

Ich frage deshalb, weil der erwähnte "Spalteholz" es als Clearing-Medium verwendet hat.
Hier scheint es als Aufhellungsmittel zu wirken.

Würde sich Wintergrünöl mit Malinol oder Euparal überhaupt vertragen?

Liebe Grüße
Rudolf

[Gerd Schmahl]

Hallo Rudolf,
leider habe ich nicht genau Protokoll geführt, wie lange die 3 Wintergreen-Flöhe im Xylol lagen, ich bin mir aber recht sicher, dass ich welches benutzt habe.

Im SCHLÜTER,W.: "Mikroskopie für Naturfreunde und Lehrer" steht zumindest für Nelkenöl, dass man direkt von Nelkenöl in Kanadabalsam eindecken kann, ohne den Zwischenschritt Xylol.

Ich werde in den nächsten Tagen noch mal ein paar Flöhe in Wintergreen-oil überführen, aber mit Ergebnissen rechne ich frühestens in 2..3 Monaten.

LG Gerd

[purkinje]

Hallo Gerd,
nur als kleine Ergänzung zu deinem Beitrag
               Brechungsindex
Kanadabalsam   1,53 - 1,55
Nelkenöl       1,53
Wintergreen-öl 1,50 - 1,54
Beste Grüße Stefan             

[Gerd Schmahl]

Hallo Stephan,
danke für diese Ergänzung. z.Z. badet wieder ein Vogelfloh in Wintergreen...
LG Gerd