Gänseblümchen - PEG - Wacker-Färbung

[gewo]

Ich habe mich etwas intensiver mit der PEG-Einbettung beschäftigt und dabei mußten einige Knospen von Gänseblümchen aus dem Garten herhalten.

1. Knospe in 25%ige PEG-Lösung /70% Ethanol) - 24 -72h Raumtemperatur
2. 40%ige PEG-Lösung (Deionat) - 24h Raumtemperatur
3. 60%ige PEG-Lösung (Deionat) - 24h Raumtemperatur
4. 80%ige PEG-Lösung (Deionat) - 24h bei 60°C im Dörrautomaten
5. 100% PEG - 24h bei 60°C im Dörrautomaten
6. Eingießen in Kunststoffförmchen (Inlet aus Pralinenschachtel)
7. Abkühlen (1h bei Raumtemperatur)
7. Zuschneiden der PEG Blöckchen

Schneiden auf Reichert OmE Mikrotom mit selbst aufbereitetem C-Messer 20µm - mit Klebeband-Methode - ich habe Scotch Crystal clear verwendet

Da ich noch keine Methode gefunden habe, die Schnitte ohne Verschiebung auf einen Objektträger zu transferieren, verbleibt der Schnitt auf dem Klebeband.

Klebeband mit Schnitt zuschneiden und PEG in mit Wasser gefülltem Uhrglas entfernen.

Färbelösung (W3A SIM III) auf Klebeband auftropfen - Färbezeit 5 Minuten - Klebeband mit Schnitt in Wasser mehrmals abspülen - ggf. mit 70%igem Ethanol differenzieren - kurz in 30%igem Ethanol spülen - Wässern ca. 1 Minute

Klebeband mit Schnitt mit der Unterseite auf Objektträger und mit wenig Glyzerin eindecken.

Die Bilder zeigen einen Ausschnitt des Präparates im Durchlicht und in Fluoreszenz mit Violett-Anregung (Olympus RFCA mit DMV Cube) - Blauanregung funktioniert nicht, da der Kleber des Klebebandes nach der Färbung auch Fluoreszenz zeigt. Bei der Violett-Anregung ist diese Fluoreszenz wesentlich geringer und mittel Bildbearbeitung in den Griff zu bekommen, sodaß der Hintergrund schwarz wird.

Ich wäre dankbar, Hinweise zu bekommen, wie die Schnitte vom Klebeband auf den Objektträger transferiert werden können und fixiert werden.

Ausschnitt aus Panorama aus 12 Bildern mit jeweils 13 gestackten Bildern aufgenommen mit Olympus BH2 Mikroskop mit S Plan Apo 20 Objektiv und RFCA Einrichtung:
Durchlicht:


Aufsicht Fluoreszenz - Violett-Anregung:



Liebe Grüße
Gerhard

[gewo]

Ergänzung

So sieht der gesamte Schnitt aus - aufgenommen mit S Plan Apo 4 Objektiv - Panorama aus 13 Bildern

[M Beier]

Hallo Gerhard,
wunderschöne Schnitte!
Ich gehe mal davon aus, dass die roten Strukturen die Pollen sind. Bei PEG ist ja wirklich viel Geduld erforderlich, aber ohne gäbe es ja nur Einzelteile.
Gruß Maria

[Peter Reil]

Hallo Gerhard,

sehr schöner, gelungener Schnitt!
Da ich selbst auch mit PEG hantiere, weiß ich, dass so was nicht einfach ist. Vielleicht versuche ich das auch mal mit dem Klebeband.

Freundliche Grüße
Peter

[gewo]

wunderschöne Schnitte!
Ich gehe mal davon aus, dass die roten Strukturen die Pollen sind. Bei PEG ist ja wirklich viel Geduld erforderlich, aber ohne gäbe es ja nur Einzelteile.

Hallo Maria,
ja das sind die Pollen.
Freut mich, dass es gefällt - danke.

sehr schöner, gelungener Schnitt!
Da ich selbst auch mit PEG hantiere, weiß ich, dass so was nicht einfach ist. Vielleicht versuche ich das auch mal mit dem Klebeband.

Hallo Peter,
ich freue mich, dass die Schnitte gefallen - danke.

ligrü
Gerhard

[Nordlicht]

Hallo Gerhard,

deine Schnitte des Gänseblümchens gefallen auch mir sehr gut.

Ich würde dein Art der PEG-Einbettung auch gerne einmal probieren.
Leider steht mir kein "Dörrautomat" zur verfügung.
Was hälst du von der Idee es mit einer Heizplatte (geregelt) und kürzeren
Zeiten zu probieren?

Grüße Matthias

[Rawfoto]

Hallo Gerhard

PEG zerfällt wenn du in diesem Fall ohne Klebeband übertragen willst, da musst du zum Beispiel auf Kunststoff umsteigen (Kulzer, gibt es auch in Wien).

Ich frage mich ob dein Farbschleier nicht vom Eindeckmittel kommt. Eine UV Methode könnte helfen, Jürgen ist da gerade am Experimentieren und hat schon ausgezeichnete Ergebnisse.

Deine Hellfeldaufnahme finde ich sehr gut, Gratulation👍👍👍👍👍

Liebe Grüße

Gerhard

[gewo]

deine Schnitte des Gänseblümchens gefallen auch mir sehr gut.

Ich würde dein Art der PEG-Einbettung auch gerne einmal probieren.
Leider steht mir kein "Dörrautomat" zur verfügung.
Was hälst du von der Idee es mit einer Heizplatte (geregelt) und kürzeren
Zeiten zu probieren?

Dankeschön Matthias.
Funktioniert auf Heizplatte auch - sollte nur nicht zu heiß werden. Ich würde nicht über 60°C gehen.
Wie weit du mit der Verkürzung gehen kannst, weiß ich noch nicht. Ich habe bei Gänseblümchen bei der Halbierung der Zeit keinen Unterschied feststellen können.

PEG zerfällt wenn du in diesem Fall ohne Klebeband übertragen willst, da musst du zum Beispiel auf Kunststoff umsteigen (Kulzer, gibt es auch in Wien).

Hallo Gerhard
Wie kann ich mir das mit Kunststoff vorstellen - habe da keine Ahnung.

Ich frage mich ob dein Farbschleier nicht vom Eindeckmittel kommt. Eine UV Methode könnte helfen, Jürgen ist da gerade am Experimentieren und hat schon ausgezeichnete Ergebnisse.

Deine Hellfeldaufnahme finde ich sehr gut, Gratulation👍👍👍👍👍

Der Farbschleier kommt definitiv vom Kleber, der Farbe beim Färben bindet, die sich nicht vollständig entfernen läßt. Ohne Färbung zeigt der Kleber keine Fluoreszenz. Habe ich mit einem Blindtest gemacht - W3A auf Klebeband - einige Minuten einwirken lassen - Wässern - 70% Ethanol - 30% Ethanol - Wasser - Eindecken mit Glyzerin. Glyzerin zeigt definitiv keine Fluoreszenz.

Freut mich, dass dir das Hellfeld-Bild gefällt.

[Fahrenheit]

Lieber Gerhard,

sehr schön geworden!

Beste Grüße
Jörg

[gewo]

Lieber Gerhard,

sehr schön geworden!

Beste Grüße
Jörg

Dankeschön lieber Jörg

ligrü
Gerhard