Färben von Bakterien auf Epithelzellen

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
es wurden hier ja schon etliche Fluoreszenz-Bilder gezeigt, bei denen auf Epithelzellen sitzende Bakterien deutlich kontrastiert leuchten. Bei einigen Farbstoffen, z. B. Acridinorange, fluoreszieren die Bakterien sogar in einer anderen Farbe wie der Zellkern oder der Rest der Zelle.
Es gibt aber scheinbar nicht viele Farbstoffe, die das können. Ich habe daher mal ganz tief in meiner Farbschublade gwühlt und mit ca. 20 mikroskopischen Farbstoffen Epithelzellen sauer und basisch feärbt und untersucht, ob da irgendetwas in Fluoreszenz zu sehen ist.

Erfreulicherweise fluoreszieren die allermeisten Farbstoffe mit Zellen zumidest "irgendwie", wenn auch nicht sehr stark. Allerdings färben die nicht spezifisch, meistens leuchtet die ganze Zelle, ohne das man viel erkennen kann, wie hier im ersten Beispiel:

Bild 1: Xylenolorange, 450 nm, Würfel 510 nm, 0,6 Sekunden belichtet



Dann gibt es natürlich die "guten" Farbstoffe wie Höchst und Dapi. Die sind aber extrem teuer und sehr schwer zu bekommen.

Bild 2: Hoechst 33342, 390 nm, Würfel 450 nm, 1/4 Sekunde Belichtung



Auch von Ethidiumbromid haben wir hier schon Bilder gesehen, bei denen die Bakterien erkannt werden können, wie hier:

Bild 3: Ethidiumbromid, 430 nm, Würfel 510 nm, 0,5 Sekunden Belichtung


Ich habe aber noch eine Reihe anderer, teilweise einfacher zu beschaffender Farbstoffe gefunden, die das auch können.

Und damit wünsche ich frohe Festtage und viel Spaß beim Betrachten,
Carsten



Bild 4: Auramin O, 430 nm, Würfel 510 nm, 1/6 Sekunde Belichtung



Bild 5: Acridinrot, 430 nm, Würfel 510 nm, 1 Sekunde Belichtung



Bild 6: Acriflavin, 430 nm, Würfel 510 nm, 0,8 Sekunden Belichtung



Bild 7: Bromocresolpurple (basisch), 430 nm, Würfel 510 nm, 0,6 Sekunden Belichtung



Bild 8: Coriphosphin, 430 nm, Würfel 510 nm, 1 Sekunde Belichtung

[Daniel Scheibenstock]

Hallo Carsten,

Da sind doch ein paar sehr brauchbare Kandidaten dabei. Bild 6 und 8 schauen sehr gut differenziert aus. Ich habe mal Bengalrosa gekauft ich werde mal später etwas beisteuern zu der Sammlung,

Liebe Grüße Daniel

[Spectrum]

Hallo Carsten, hallo Daniel,
Super! Sehr interessant und immer weiter so.
Da ergeben sich ja zahlreiche neue Möglichkeiten...
Grüße Holger

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
Bengalrosa? Ich habe hier Rose Bengal Avocado. Hat es nicht in die Topliste geschafft.
Carsten

[Spectrum]

Rose bengal, bzw Acid Red 94 ist gemeint:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0143720808000314

[Aljoscha]

Hallo Carsten,

Sehr schön! Danke fürs Zeigen.

Besonders Acriflavin und Coriphosphin scheinen ja sehr gute Ergebnisse zu liefern. Beides ist problemlos zu beschaffen und im Fall Acriflavin auch noch ausgesprochen preiswert.

Muss ich mal ausprobieren. Acriflavin (Trypaflavin) habe ich hier noch irgendwo rumliegen.

Viele Grüße

Alexander

[Daniel Scheibenstock]

......... Alexander schau mal beim Aquarium falls vorhanden ;-)

[rhamvossen]

Schöne und interessante Bilder, Carsten. Beste Grüsse,

Rolf

[Daniel Scheibenstock]

Hallo zusammen und noch frohe Weihnachten,

Anbei die versprochenen Bilder von Bengalrosa.

Anregung Grün (546nm/580/590) rotes Bild
Anregung Blau (485/510/520) grünliches Bild
Und ein Bild in schiefer Beleuchtung als Referenz,

Liebe grüße Daniel

[Aljoscha]

Hallo Carsten,

wie hast Du diesen Farbkontrast zwischen Zellkernen und Bakterien mit Acriflavin hingekriegt? Was ist dein Färbeprotokoll?

Ich kriege Grün und bei hoher Konzentration und langer Einwirkdauer noch Gelb aber kein Rot.

Danke und viele Grüße

Alexander

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
allen erst einmal ein frohes Neues.

Mein Färbeprotokoll für Acriflavin sieht so aus:

- Vorratslösung verdünnen, bis gerade eine Farbe visuell wahrnehmbar ist
- mit Eisessig auf pH 4 einstellen
- Färbedauer 1 h
- abspülen mit dest. Wasser

Ich habe das nocheinmal nachgestellt, hier das Resultat:

Bild 1: Epithelzellen mit Acriflavin, Anregung 430 nm, Filterwürfel 450



Bild 2: Epithelzellen mit Acriflavin, Anregung 430 nm, Filterwürfel 510 + G247



Schöne Grüße
Carsten

[Aljoscha]

Hallo Carsten,

Die Verdünnung und die Färbedauer sind ein Thema. Ich hatte mit höherer Konzentration und kürzer gefärbt. PH hatte ich auch auf 4 eingestellt, allerdings mit Acetat-Puffer.

Wobei deine neuen Bilder die Bakterien auch eher gelb/orange als rot zeigen. Ist aber ein esoterisches Problem. Gelb kann man von Grün hinreichend unterscheiden. Insgesamt scheint Acriflavin für solche Färbungen sehr gut geeignet zu sein.

Viele Grüße

Alexander

[rlu]

Hallo,

mit welchem Fluoreszenz-Farbstoff weist man eigentlich TBC-Bakterien nach?
Ist die Färbung dann spezifisch?


Liebe Grüße
Rudolf

[Peter T.]

Hallo Rudolf,

lichtmikroskopisch ist die historische Methode die Ziehl-Neelsen-Färbung.
Fluoreszenz weiß ich nicht.

Am spezifischten ist aber der uns ja bestens bekannte PCR-Test. Ist aber natürlich nichts Mikroskopisches.

[rlu]

Hallo Peter,

vorab schon mal vielen Dank.
Wir haben im Verein auch schon mal die Ziehl-Neelsen Färbung durchgeführt.

So ein Fluoreszenz-Mikroskop hat mich auch deshalb fasziniert, weil man schnell diese Bakterien nachweisen kann. Tja, mal warten was die Praktiker sagen.

habe gerade folgende Hinweise gefunden:
wiki/Auramin-Rhodamin-Färbung

Uni Erlangen Nachweis TBC

Liebe Grüße
Rudolf