Isopropanol, Euparal

[icho_mann]

Hallo,
ich frage jetzt einfach nochmal, da es bei mir jetzt schon zum zweiten mal passiert ist.
Endweder das Isoprop. oder das Euparal entziehen meinen Schnitten Wasser (oder was auch immer),
so dass diese sich zusammen ziehen und damit für die Mikroskopie ziemlich nutzlos sind.
Diesen Weg ist auch mein Gurkenschnitt gegangen....
Womit hängt das zusammen???
Grüße
Jonathan

[***]

Beitragsinhalt auf Wunsch des Autors gelöscht

[Klaus Herrmann]

Hallo Jonathan,

Womit hängt das zusammen???

Ich vermute mal.... mit Deiner Ungeduld

Nach der Färbung Schnitte sorgfältig mit dest Wasser waschen in 3 Portionen;  Färbung nass kurz beurteilen unterm Mikroskop, eventuell mit 70%igem Ethanol differenzieren, einmal kurz in 96% Ethanol und dann 2 mal je 1 min und noch 1 mal 2 min in 100%Isopropanol entwässern, dann noch feucht vom Isoprop in Euparal eindecken. Deckglas beschweren und aushärten lassen. Ca 1 Woche bei RT.

Euparal ist in Isopropanol gelöst und entzieht natürlich auch Wasser. Zudem wird Rot durch den verdünnten Alkohol extrahiert (wenn noch Wasser im Schnitt ist).

In der Ruhe liegt die Kraft!

[icho_mann]

Hallo Jonathan,

Womit hängt das zusammen???

Ich vermute mal.... mit Deiner Ungeduld

Nach der Färbung Schnitte sorgfältig mit dest Wasser waschen in 3 Portionen;  Färbung nass kurz beurteilen unterm Mikroskop, eventuell mit 70%igem Ethanol differenzieren, einmal kurz in 96% Ethanol und dann 2 mal je 1 min und noch 1 mal 2 min in 100%Isopropanol entwässern, dann noch feucht vom Isoprop in Euparal eindecken. Deckglas beschweren und aushärten lassen. Ca 1 Woche bei RT.

Euparal ist in Isopropanol gelöst und entzieht natürlich auch Wasser. Zudem wird Rot durch den verdünnten Alkohol extrahiert (wenn noch Wasser im Schnitt ist).

In der Ruhe liegt die Kraft!

hm...
Naja ist halt schade um die Schnitte...
Ich werde es ab jetzt beachten!
Grüße
Jonathan

[Detlef Kramer]

Lieber Jonathan,

das wesentliche hast Du doch gut herausgearbeitet. Ich möchte aber noch etwas zu der Problematik hinzufügen:

Die Form einer pflanzlichen Zelle ist nicht nur durch die Zellwand bestimmt, sondern sehr oft durch ein Gleichgewicht zwischen Zellwand und Innendruck (Turgor). Wenn jetzt durch die Fixierung, egal mit was, der Turgor wegfällt, nimmt die Zelle die Form ein, die ausschließlich durch die Zellwand bestimmt ist. Stell Dir einen Fahrradschlauch oder einen Wasserball vor: vollgepumpt sind sie schön rund, lässt man aber die Luft heraus, fallen sie zu einer wenig definierten Form zusammen. Das gilt hauptsächlich für junge, wenig verholzte Gewebe mit hohem Anteil an Parenchym.

Ich habe das in meinem ganzen, langen Berufsleben, in dem ich mich intensiv mit dem primären Bau der Wurzel befasste, berücksichtigen müssen - meine EM-Aufnahmen sahen sehr oft nicht so aus, wie man das erwartet hätte.

Herzlichen Gruß

Detlef

[icho_mann]

Lieber Jonathan,

das wesentliche hast Du doch gut herausgearbeitet. Ich möchte aber noch etwas zu der Problematik hinzufügen:

Die Form einer pflanzlichen Zelle ist nicht nur durch die Zellwand bestimmt, sondern sehr oft durch ein Gleichgewicht zwischen Zellwand und Innendruck (Turgor). Wenn jetzt durch die Fixierung, egal mit was, der Turgor wegfällt, nimmt die Zelle die Form ein, die ausschließlich durch die Zellwand bestimmt ist. Stell Dir einen Fahrradschlauch oder einen Wasserball vor: vollgepumpt sind sie schön rund, lässt man aber die Luft heraus, fallen sie zu einer wenig definierten Form zusammen. Das gilt hauptsächlich für junge, wenig verholzte Gewebe mit hohem Anteil an Parenchym.

Ich habe das in meinem ganzen, langen Berufsleben, in dem ich mich intensiv mit dem primären Bau der Wurzel befasste, berücksichtigen müssen - meine EM-Aufnahmen sahen sehr oft nicht so aus, wie man das erwartet hätte.

Herzlichen Gruß

Detlef

Hallo Detlef,
und der Druck wird von der Vakuole hergestellt.
Diese ist bei der Gurke sehr groß und dadurch verschrumpelt die Zelle bei Wasserverlust?

Grüße
Jonathan

[Detlef Kramer]

Lieber Jonathan,

ja, richtig verstanden: das Schrumpeln sehr wasserreicher Gewebe kann man so erklären. Bei Deinem Sziel ist es natürlich nicht so dramatisch, aber grundsätzlich genau so!

Mach weiter so!

Detlef