Leitz ICT mit Fluoreszenz kombinieren... Leiden da die Prismen??

[EugenOnegin]

Hallo liebes Forum,

vielleicht könnt ihr mir bei einem anwendungsbezogenen Problem helfen. Ich würde gerne den Leitz ICT nach Smith mit Auflichtfluoreszenz (200 Watt HBO) kombinieren. Dafür würde ich gerne die NPL-ICT-Objektive am neuen Ploempak installieren und jsutieren.

In den Leitz-Dokumentationen habe ich keine Informationen zu dieser Kombination finden können. Jetzt mache ich mir ein wenig Sorgen, ob die Wollaston-Prismen vielleicht unter der UV-Strahlung leiden könnten (sich also z.B. Verfärbungen ergeben)...

Hat da vielleicht jemand von euch Erfahrungen oder Tipps? Bzw. weiß jemand, ob das von Leitz so vorgesehen war?

Herzliche Grüße und vielen Dank für eure Hilfe

Fabian

[Peter V.]

Hallo,

ich bin mir fast sicher, dass Du da von niemandem verlässlichen Informationen bekommen wirst. Ich würde es nicht wagen!

Herzliche Grüße
Peter

[Diana1982]

Würde der Polarisator ohne Vorpolarisator das überhaupt vertragen? Wegen der Wärme?
Muss da selbst "dumm" fragen...

LG Diana

[olaf.med]

Hallo Fabian,

den verwendeten Kristallen in den Wollaston-Prismen macht die UV-Strahlung definitiv nichts, allenfalls den Kittschichten, aber selbst da halte ich es für unbedenklich, da die Kitte ja auch in den normalen Optiken Verwendung finden. Kurz, ich würde es wagen, allerdings unbedingt mit dem von Diana angesprochenen Vorpolarisator!!! Wenn Du keinen besitzt könnte ich evtl. aushelfen.

Herzliche Grüße,

Olaf

[EugenOnegin]

Lieber Peter, liebe Diana, lieber Olaf,

herzlichen Dank für eure Antworten, damit bin ich schon mal ein gutes Stück weiter. Wegen des Vorpolarisators stehe ich gerade etwas auf dem Schlauch. Bei der AUFlichtfluoreszenz sollte der Polarisator des Kondensors doch eigentlich gar nicht vom UV-Licht durchstrahlt werden, oder? Mir würde da nur der Analysator einfallen als relevantes Bauteil einfallen (den man ja schnell aus dem Strahlengang entfernen könnte, falls Fluoreszenz angewendet wird). Vielleicht habe ich auch grade nen Knick in der Optik 

Herzliche Grüße und vielen Dank für eure Hilfe

Fabian

[Klaus Herrmann]

Hallo Fabian,

diese Kombi PH mit AL-Fluoreszenz gab es bei Zeiss. Das UV-Licht der HBO kommt ja nicht direkt auf den Polarisator und auch nicht durch den Analysator, der ja über dem Teilerspiegel des Filterblocks sitzt HBO 200 ist natürlich eine Kanone, aber mit einem erst mal lose eingelegten Polfilter kannst du erst mal testen.
Andere Frage ist: passiert dem Kitt im Prisma und in den Objektiven was. Da hilft mir der Blick in die Kristallkugel leider nix. Wenn würde ich nicht mit 200 W dran gehen. heute hat man eher 50 W oder LEDs.

[JB]

Hallo Fabian,

Die Verwendung von DIC und Epi-Fluoreszenz ist an modernen Mikroskopen recht verbreitet (z.B. bei Nikon seit den 1980ern). Die Einrichtungen sind aber dann so aufgebaut, dass kein Licht von der Auflichtbeleuchtung auf den Analysator faellt. Der Analysator wird ganz oben im Stahlengang eingebaut, oberhalb eines Sperrfilters. UV-Licht wuerde den Analysator zerstoeren.

DIC und Fluoreszenz werden bei den oben beschriebenen Mikroskopen abwechselnd verwendet. Z.B. erst ein DIC-Bild um die Morphologie der Zelle darzustellen, dann die verschiedenen Fluoreszenzkanaele. Gleichzeitige Verwendung im selben Bild ist nicht sinnvoll; bei der Fluoreszenz wuerde der Analysator zu viel Emissionslicht schlucken. Ausserdem leidet durch das Wollaston-Prisma im Objektiv die Aufloesung im Hellfeld (Doppelbild!). Leitz hatte deshalb extra einen Analysatorschieber fuer die Ausloeschung des Doppelbildes bei Verwendung im Hellfeld. https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=19684.msg149844#msg149844

Sie koennen also ICT und Fluoreszenz an einem Mikroskop verwenden - aber mit 2 Saetzen von Objektiven.

Meine Beobachtung ist, dass DIC heutzutage wieder weniger verwendet wird (insbesondere wenn die Morphologie der Objekte einfach ist = Zellkulturen; fuer komplexe Objekte wie Embryos ist DIC erste Wahl) und Phasenkontrast wieder Einzug haelt.

Beste Gruesse,

Jon

[ortholux]

Lieber Fabian,

Leitz hat sowas werkseitig ausgeliefert. Ich habe das schon mit dem alten Ploemopak und dem neuen gesehen.

Wolfgang

[olaf.med]

Hallo Fabian,

als Mensch mit eingeschränktem Pol-Gesichtsfeld hat in meiner Wahrnehmung jeder Kondensor (auch der Opak-Illuminator, der ja nur ein Auflicht-Kondensor ist) einen eingebauten Polarisator. Ich bitte also meine Bemerkungen bzgl. des Vorpolarisators für Deine Anwendung zu streichen.

Herzliche Grüße, Olaf

[ortholux]

Holger hat sowas mal gezeigt: https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=11425.0

Wolfgang

[Diana1982]

Ich bitte also meine Bemerkungen bzgl. des Vorpolarisators für Deine Anwendung zu streichen.

...und bitte auch meinen Denkfehler...war irgendwie bei Durchlicht und hab nur 200W HBO gelesen...und da ich erst einen verschmorten Polarisator hatte, den ich austauschen musste, gingen "alle Alarmglocken" an.

Viel Spaß bei Deinem Vorhaben 

LG Diana

[peter-h]

Liebe Fluoreszenzler,

bei längerer UV-Bestrahlung wäre ich sehr vorsichtig. Wer kennt schon die Kittschicht bei Prismen?
Selbst eine kleine UV-LED kann einen Schaden anrichten wie im Bild zu sehen. Die LED hatte nur 250mW opt. Ausgangsleistung und hat sich trotzdem für immer in das Präparat, bzw. das Medium  eingebrannt.

Grüße
Peter

[othum]

Hallo Peter,

Liebe Fluoreszenzler,

bei längerer UV-Bestrahlung wäre ich sehr vorsichtig. Wer kennt schon die Kittschicht bei Prismen?

Dem kann ich mich nur anschliessen.
Ich hatte in diesem Thread über verbrannten Linsenkitt berichtet:
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=32312.msg238892#msg238892

Und da war es "nur" eine HBO100 und eine von Zeiss dafür vorgesehene (!) Linse...

Beste Grüße, Oliver

[EugenOnegin]

Liebe Alle,

vielen Dank für eure hilfreichen Beiträge. Es wird wohl auf einen Versuch hinauslaufen Insgesamt soll die Fluoreszenz nur eine Sekunden zum Antikörpernachweis verwendet werden, das Risiko werde ich wohl eingehen.

Herzliche Grüße und nochmal vielen Dank für eure Unterstüzung

Fabian