Zygnema - Autofluoreszenz

Ralf · April 29, 2012, 16:16:18 NACHMITTAGS

Hallo,

habe mal eine Zygnema unter UV-Licht (Durchlicht) untersucht. Mit 365 nm Anregung kann man die Autofluoreszenz des Chlorophylls beobachten, aber offensichtlich nur teilwesie. In der Mitte des Chloroplasten ist keine Fluoreszenz zu sehen. Hat jemand eine Idee woran das liegen könnte ?

7an · April 29, 2012, 17:35:16 NACHMITTAGS

Hallo Ralf,

Meines Wissens kommt die Autofluoreszenz von Chloroplasten aus den konjugierten Doppelbindungen des Chlorophylls zustande. Diese Chlorophyllfluoreszenz muss nicht homogen sein, da Chlorophyll im Plastiden nicht homogen verteilt ist.

Dies wäre meine Erklärung, aber mit Botanik habe ich nicht soviel am Hut.

Schöne Grüße,
Jan

Bernd Kaufmann · April 30, 2012, 10:09:06 VORMITTAG

Zitat von: Ralf in April 29, 2012, 16:16:18 NACHMITTAGS
Hallo,

habe mal eine Zygnema unter UV-Licht (Durchlicht) untersucht. Mit 365 nm Anregung kann man die Autofluoreszenz des Chlorophylls beobachten, aber offensichtlich nur teilwesie. In der Mitte des Chloroplasten ist keine Fluoreszenz zu sehen. Hat jemand eine Idee woran das liegen könnte ?

Hallo Ralf,

ein sehr schönes Bild! Zu Deiner Frage selbst kann ich leider nichts beitragen, aber eine Frage zur UV-Anregung habe ich: Wie sieht das praktisch aus, bzw. wie realisierst Du das? Wenn ich richtig informiert bin, arbeiten wir ja mit dem gleichen Mikroskoptyp.

peter-h · April 30, 2012, 10:41:30 VORMITTAG

Hallo Ralf,

zu Deiner Frage kann ich leider keine Antwort geben, aber es kommt eine Frage von mir.
Wie ist die Hintergrundbeleuchtung zu verstehen? Gab es ein Sperrfilter? Die Nichia mit 365nm sendet leider auch noch einen Teil im Bereich über 400nm aus. Kommt daher der aufgehellte Hintergrund?

Schöne Grüße
Peter

Ralf · April 30, 2012, 11:39:57 VORMITTAG

Zitat von: Bernd Kaufmann in April 30, 2012, 10:09:06 VORMITTAG

Wie sieht das praktisch aus, bzw. wie realisierst Du das? Wenn ich richtig informiert bin, arbeiten wir ja mit dem gleichen Mikroskoptyp.

Hallo Bernd,

das sieht bei mir so aus:

Ein Arbeitskollege hat mir freundlicherweise sowohl den passenden Messingblock (wichtig zur Kühlung) gedreht, als auch die Nichia 365 nm UV LED darin eingebaut. Die Vorichtung wir dann eeinfach auf die Leuchtfeldblende gesetzt.

Ralf · April 30, 2012, 11:44:11 VORMITTAG

Zitat von: peter-h in April 30, 2012, 10:41:30 VORMITTAG
Hallo Ralf,

zu Deiner Frage kann ich leider keine Antwort geben, aber es kommt eine Frage von mir.
Wie ist die Hintergrundbeleuchtung zu verstehen? Gab es ein Sperrfilter? Die Nichia mit 365nm sendet leider auch noch einen Teil im Bereich über 400nm aus. Kommt daher der aufgehellte Hintergrund?

Schöne Grüße
Peter

Hallo Peter,

ich verwende keine Filter. Ich habe zwar alle gängigen Filter getestet, aber ohne jedweden Filter erhalte ich das meiner Meinung nach beste Ergebnis. Tatsächlich hat die LED einen nennenswerten Blauanteil. Im hier gezeigten Beispiel habe ich den eigentlich blauen Hintergrund per manuellem Weißabgleich mit der Kamera korrigiert.

Bernd Kaufmann · April 30, 2012, 12:07:37 NACHMITTAGS

Hallo Ralf,

vielen Dank für die schnelle und gut bebilderte Antwort. Da regt sich schon wieder mein sowieso nur mühsam unterdrücktes Sammler-Gen. Mal sehen, wie lang ich da widerstehen kann.

TPL · April 30, 2012, 12:08:57 NACHMITTAGS

Zitat von: Ralf in April 30, 2012, 11:44:11 VORMITTAGich verwende keine Filter.

Hallo Ralf,
dann ist es mit dem Mikroskopieren aber bald vorbei. Die Nichia mit 365 nm gehört in die Laserklasse 3B und verursacht Schäden im bestrahlten Gewebe. Vielleicht habe ich ja etwas missverstanden, aber ich würde damit sofort aufhören und die Sache klären.

Gutgemeinte und besorgte Grüße,
Thomas

Klaus Herrmann · April 30, 2012, 12:18:34 NACHMITTAGS

Hallo Ralf,

die Warnung von Thomas möchte ich heftig unterstreichen:

ZitatVielleicht habe ich ja etwas missverstanden, aber ich würde damit sofort aufhören und die Sache klären.

Hast du nicht eine Filterschublade unterm Tubus? (Für 18 mm Filter.) Ich hätte geeignete Filter zb ein LP 520, das hier besseren Fluokontrast bringen sollte und Schutz für deine blauen Augen bietet!

Ralf · April 30, 2012, 12:39:18 NACHMITTAGS

Lieber Thomas, lieber Klaus,

ich weiß schon, dass man nicht mit ungeschütztem Auge in das UV Licht schauen darf. Hatte dies für selbstverständlich gehalten und daher nicht erwähnt, dass ich mit dieser Anordnung ausschließlich über das Kamerabild mikroskopiere.

Trotzdem Danke für eure Besorgnis, es hätte ja auch anders sein können!

Nomarski · April 30, 2012, 12:59:59 NACHMITTAGS

Hallo Klaus,

ZitatIch hätte geeignete Filter zb ein LP 520, das hier besseren Fluokontrast bringen sollte und Schutz für deine blauen Augen bietet!

Bei der Anregungswellenlänge wäre ein LP397 als Sperrfilter geeigneter und wird auch meist verwendet. Sowas hast du bestimmt auch noch.

Ansonnsten wäre noch ein Zusatzanregungsfilter ganz sinnvoll, wenn man nur mit UV und nicht noch mit Violett, Blau und anderen Farben anregen will.

Viele Grüße
Bernd

Klaus Herrmann · April 30, 2012, 13:14:48 NACHMITTAGS

Hallo Bernd,

ZitatLP397 als Sperrfilter geeigneter und wird auch meist verwendet. Sowas hast du bestimmt auch noch

Aber natürlich! Werde ich Ralf zum Test schicken.

# Ralf: leider habe ich keinen λ -Schieber übrig! Aber den von Bernd vorgeschlagenen Sperrfilter verpacke ich gleich!

Bernd Kaufmann · April 30, 2012, 13:21:37 NACHMITTAGS

Hallo zusammen!

UV entsprechender Wellenlänge, das Gewebeschäden verursacht, ist ja nicht nur bei künstlichen Lichtquellen vorhanden, sondern auch im natürlichen Licht, wo es z. B. auch Kunststoffe zerstören kann. Das bringt mich zur Frage, ob denn Kamerasensoren "immun" gegen UV sind. Gerade bei Kompaktkameras und Spiegelreflexkameras mit Livebild oder Spiegelvorauslösung trifft ja dann im Zweifel starke UV-Strahlung direkt auf den Sensor und das nicht nur kurzzeitig, sondern bei längeren Sitzungen eben auch schon mal grenzwertig lang. Gibt es dazu irgendwelche Erfahrungen, oder Hinweise der Hersteller?

Daraus ergibt sich eventuell eine weitere Frage: Wie schnell verläuft denn die Autofluoreszenz? Könnte man gegebenenfalls "vorbelichten" und dann erst die Kamera für die Aufnahme zuschalten?

Nomarski · April 30, 2012, 13:26:24 NACHMITTAGS

Hallo Klaus,

ZitatAber natürlich! Werde ich Ralf zum Test schicken.

Dann mach mal, allein schon zum Schutz der Augen.

Normalerweise können solche Autofluoreszenzen auch schon mit 450nm Anregung erzeugt werden, wozu auch dein LP520 geeignet wäre.

Oder hat es einen besonderen Grund, daß 365nm genommen werden muß?

Gruß
Bernd

treinisch · April 30, 2012, 13:45:04 NACHMITTAGS

Hallo Ralf,

mal auf die Ursprungsfrage zurück, und auch auf die Gefahr hin mich zu blamieren, Zygnema hat doch
zwei sternförmige Chloroplasten, wenn ich mich nicht irre? Sollte dieses ,,dazwischen" denn dann überhaupt
chlorophyllig fluoreszieren?

Die Farbe könnte ja auch ein Artefakt des Weißabgleiches sein?

Viele Grüße

Timm

Zygnema - Autofluoreszenz

7an