Fluoreszenz: Welche Beleuchtung ?

David 15 · August 25, 2013, 17:24:41 NACHMITTAGS

Hallo zusammen ,

In naher Zukunft möchte ich mich mit der Fluoreszenzmikroskopie beschäftigen. Die Frage die sich mir dabei stellt ist, welche Beleuchtung soll ich einsetzten ? Lieber eine HBO Beleuchtung oder lieber einen LED Umbau ? Das Manko ist ja, dass ich mit der oft beschrieben Royal blue LED ja nur Blauanregung nutzen kann. Mit der HBO hingegen alle Wellenlängen Bereiche. Die HBO sind aber wiederum ziemlich teuer und auch nicht ungefährlich.

Welche Breiche würden sich mit Blauanregung abdecken lassen bzw. was kann ich mit der Blauanregung alles fluoreszieren ??

Ich habe da leider nicht viel Ahnung von, aber ich weiß, dass hier einige sehr viel daüber Wissen !

Es würde mich freuen wenn ihr mir helfen könntet

Fluoreszierende Grüße
David

Nomarski · August 25, 2013, 17:37:36 NACHMITTAGS

Hallo David,

das kenne ich, da gibt es etwas, das für irgendetwas gut ist und das muß man dann auch unbedingt haben.

Du willst also irgendwas zum Fluoreszieren bringen, weißt aber noch nicht genau was. Zum Einstieg kann ich dir das Chlorphyll im Tümpelmaterial empfehlen, das bei normaler Beobachtung grün erscheint, in der Fluoreszenzanregung aber rot glüht.
Dazu brauchst du entsprechende Filtersätze und einen speziellen Auflicht-Kondensor für diese Anwendung. Ist denn da schon was vorhanden? Am einfachsten geht es im Durchlicht mit einem BG-12 Anregungsfilter und einem OG530 Kantenfilter.
Dazu noch dieser Link, ich hoffe, er hilft dir etwas weiter.
http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=10933.0

Viele Grüße
Bernd

David 15 · August 25, 2013, 17:56:08 NACHMITTAGS

Hallo Bernd,

Danke für deine Antwort.

Es sollen eigentlich fast nur Pflanzenschnitte zum Fluoreszieren gebracht werden. Gelegentlich auch mal die ein oder andere Alge aus dem Tümpel.

Die Frage ist nun ob Blauanregung für diese Zwecke ausreichend ist, also eine blau LED ?

Viele Grüße
David

Nomarski · August 25, 2013, 18:04:30 NACHMITTAGS

Hallo David,

die Blauanregung ist eine Art der Anregung, die auch bei Pflanzenschnitten funktioniert, du hast es ja gesehen.
Die Blaue LED kostet als solche keine 10 Euro, jedoch muß sie als Lichtquelle an der richtigen Stelle untergebracht werden, damit die Anregung auch optimal funktionieren kann.
Hinzu käme noch die elektrische Anpasschschaltung, die man auf verschiedene Arten realisieren kann. Die einfachste ist das Netzteil mit geeignetem Vorwiderstand zur Strombegrenzung, damit die LED nicht zerstört wird.

Viele Grüße
Bernd

Frank D. · August 25, 2013, 19:07:26 NACHMITTAGS

Zitat von: David 15 in August 25, 2013, 17:56:08 NACHMITTAGS
....
Es sollen eigentlich fast nur Pflanzenschnitte zum Fluoreszieren gebracht werden. Gelegentlich auch mal die ein oder andere Alge aus dem Tümpel.

Die Frage ist nun ob Blauanregung für diese Zwecke ausreichend ist, also eine blau LED ?

...

Hallo David,

das Mikroskopische Kollegium Bonn hat zu diesem Thema einen informativen Beitrag veröffentlicht, wobei hier der Versuch zur Ermittlung der Anregungswellenlängen von Chlorophyl für Dich interessant sein dürfte. http://www.mikroskopie-bonn.de/bibliothek/botanik/index.html#a928

Herzliche Grüße
Frank

reblaus · August 25, 2013, 19:15:39 NACHMITTAGS

Hallo David -

Am ökonomischsten dürfte eine Ausrüstung mit einer kräftigen weißen 3000 mA LED sein - die ist auch ohne Fluo sehr nützlich. Dann brauchst Du einen blauen Erregerfilter auf die Leuchtfeldblende oder den Schwenkhalter und über dem Objektiv einen gelben bzw. roten Sperrfilter. Der Blauanteil einer starken weißen LED ist zwar nicht so hoch wie der einer schwächeren aber reinrassigen blauen, doch fürs Erste völlig ausreichend!

Wegen künftiger Ausbaumöglichkeiten es wäre nützlich, wenn du hier auch gleich den aktuellen Stand deiner Ausrüstung mitteilst. Nachdem du einen Revolver dafür gesucht hast, scheinst du ja beim Phomi oder Universal angelangt zu sein. Wenn ja, solltest du genau beschreiben mit welcher Beleuchtung das derzeit ausgerüstet ist. Auflicht durch Umschalten oder direkt von hinten? Ist ggf. ein Auflichtkondensor vorhanden?

Viele Grüße

Rolf

David 15 · August 25, 2013, 20:32:37 NACHMITTAGS

Hallo,

Danke für eure Tipps !

@Bernd

Zitatjedoch muß sie als Lichtquelle an der richtigen Stelle untergebracht werden, damit die Anregung auch optimal funktionieren kann.

Ich glaube da weiß ich schon an wen ich mich dann wenden muss

@Rolf

Ja mein neuestes Ungetüm ist ein Phomi

Ich habe vor an dieses einen Fluoreszenz Auflichtkondensor zu montieren und das Licht über eine seitliche Lichteinspiegelung einzuspiegeln. Als Lampengehäuse habe ich an einen ''Bunker'' gedacht. Das ist aber alles noch in Planung !

Viele Grüße
David

Hugo Halfmann · August 25, 2013, 21:36:09 NACHMITTAGS

Hallo David,

ich habe am WL statt des Luftschutzbunkers die Leuchte 60 in Betrieb, ich fand sie handlicher. Die darin befindliche "Lkw"-Birne habe ich durch eine königsblaue LED ersetzt. Funktioniert prima - allerdings nur mit Anregungsfilter! Die Angaben der Hersteller bzgl. der emittierten Wellenlänge sind zu optimistisch, da ist immer Streulicht anderer Wellenlänge.

Dr. Jekyll · August 25, 2013, 21:57:15 NACHMITTAGS

Hallo David,

Für Auflichtfluoreszenz kannst Du auch eine 100W Halogen- Beleuchtung nutzen, funktioniert bei mir bestens.

Gruß
Harald

Nomarski · August 25, 2013, 22:21:42 NACHMITTAGS

Hallo David,

gegen 100 Watt in Halogen setze ich 1 Watt in LED als Royal Blue.

100 : 1.

Viele Grüße
Bernd

Hugo Halfmann · August 25, 2013, 22:48:46 NACHMITTAGS

...und 100W Halogen werden sehr, sehr heiß...

Frank D. · August 25, 2013, 23:15:20 NACHMITTAGS

Hallo,

beim III RS mit 100W Halogen oder Weißlicht-LED wäre eine zusätzliche Auflicht-Hellfeldbeleuchtung möglich.
Heiß spielt keine große Rolle, und Energieverbrauch ..... gut, wenn sich in Davids Wohnung nur noch Energiesparlampen befänden, wäre das ein Thema.

Nur für Blauanregung hat sicherlich die LED die Nase vorn, für gelegentliche Beobachtungen im UV, violett, blau und grün, die HBO50, mit allen ihren Nachteilen. Für ständige Beobachtungen mit diesen Wellenlängen wäre ein 4-fach LED Wechsler angebracht.

Herzliche Grüße
Frank

Klaus Herrmann · August 25, 2013, 23:32:44 NACHMITTAGS

Hallo David,

was das Bild von Bernd zeigt ist mein Standard 16 mit dem IV FL-Auflichtkondensor und Bernds Royalblue-LED Adaption. Perfekte Lösung!
Hab ich noch und gebe sogar ab!

Guy Marson · August 26, 2013, 02:23:30 VORMITTAG

Hallo David,

Die Nichia NCSU033B(T) ist bei UV-Auflicht das Leuchtmittel meiner Wahl. Kostet zwar etwas mehr (75.-) aber die macht satte 300mW@365nm Strahlungsleistung (oder mehr, je nach Ranking).
Schutzfilter für die Augen nicht vergessen!
Ciao,
Guy

David 15 · August 26, 2013, 08:20:56 VORMITTAG

Hallo,

Danke für eure Hilfe ( Auch per PN )

Ich tendiere dann doch eher zur blauen LED und einem kleineren Lampengehäuse

@Klaus

Das Fluoreszenverfahren soll an einem Phomi bewerkstelligt werden. Das ist nun mein Gerät für alles

Aber ein zweites Gerät, eins für Hellfeld und PH und ein anderes für Fluoreszenz wäre auch nicht schlecht...

Pfui, nein David... Ich habe jetzt schon keinen Platz mehr

Jetzt heißt es erstmal die nötigen Teile beschaffen und sich dann langsam in dieses schöne Verfahren einzuarbeiten

Viele Grüße
David