HISTOLOGIE: Kleinhirn (Cerebellum), 'Dendritenbaumen' im Semidünnschnitt

Ronald Schulte · August 18, 2018, 19:40:00 NACHMITTAGS

Heute sah ich in ein Cerebellum (Kleinhirn) Schnitt einige wunderschöne Purkinje Zellen die Ihren Dendritenbaumen zeigten. Das muss ich doch im Forum zeigen dachte ich mir!

Bild 1 zeigt die Schnittebene im Kleinhirn eine Ratte.

Aus das Buch: ,,diFiore's Atlas of Histology" habe ich mir ein Bild geholt die etwas mehr erzählt über die verschiedene Zellen und Schichten die im Kleinhirn zu beobachten sind.
,,diFiore's Atlas of Histology" hat ISBN: 978-1451113419. Ein pdf hätte ich wenn eine das Buch haben möchte.

Das Kleinhirn wurde Fixiert mit eine Mischung von Formaldehyd und Glutaraldehyd (2%/2,5%) nach Rezept von Karnovsky https://www.emsdiasum.com/microscopy/technical/datasheet/15720.aspx.
Das Fixierte Gewebe wurde eingebettet in Technovit 7100 und dann geschnitten am LKB 2218 Historange Rotationsmikrotom mit Retraktion. Geschnitten wurde hier mit ein Leica Hartmetall Messer in ,D' Schliff. Farbungen sind ausgefuhrt mit Toluidin Blau (1%) in Natriumtetraborat (1%).
Die Schnitte decke ich immer in Depex ein. Depex hat ein sehr günstigen Brechungsindex und lässt sich leicht verarbeiten. Es kann, am Anfang, etwas ,tricky' sein weil es schnell kleine Luftblasen mit einschliesst aber wenn die richtige Technik gefolgt wird um ein Deckglas aufzulegen dann ist es ein Problemloses Harz.
Bilder sind gemacht am Leitz Orthoplan mit Canon 700D Kamera. Adaption über ein Canon Pancake 40mm Objektiv und Leitz Periplan 10x18 Okular; https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=28849.

Bild 3 zeigt ein Übersicht. Objektiv Leitz plan fluotar 4x
Links das Kleinhirn, rechts das Gehirn.

Bild 4 zeigt ein Übersicht aber schon was mehr Detail. Objektiv Leitz plan fluotar 10x
Die Molekular und Granular Schichten sind hier schon gut zu erkennen. Auch die Dendritenbaumen von die Purkinjezellen kommen gut voran.

Bild 5 zeigt rechts zwei Purkinje Zellen, in die Mitte den Granular Schicht und Linksoben Axone in viele Formen. Punkte sind Quer geschnittene Axone und Streifen sind ein Teil von Axone. Objektiv Leitz plan apo 40x

Bild 6 zeigt rechtsoben Purkinje Zellen, in die Mitte den Granular Schicht und Links Axone in viele Formen. Punkte sind Quer geschnittene Axone und Streifen sind ein Teil von Axone. Modifizierte Toluidin Färbung. Objektiv Leitz plan fluotar 25x.

Bild 7 zeigt ein Dendritenbaum von eine Purkinje Zelle.
Objektiv Leitz plan apo 63x na 1.4.

Bild 8 zeigt ein Dendritenbaum von eine Purkinje Zelle.
Objektiv Leitz plan apo 63x na 1.4.

Viel Spaß beim Anschauen und schöne Gruße von Ronald

reblaus · August 18, 2018, 21:14:23 NACHMITTAGS

Toll!

Gruß

Rolf

Jürgen H. · August 19, 2018, 14:17:57 NACHMITTAGS

Lieber Ronald,

wie immer bei Dir: Tolle Präparate und liebevolle Erläuterungen.

Du machst also weiter in Technovit und nicht in LR White? Oder ist das nur ein alter Block?

Verwendest Du den Kit von emsdiasum? Ganz schön teueres Zeug. Aber das Ergebnis lässt sich eben auch sehen....

Was hast Du denn bei Deiner modifizierten Toluidinblaufärbung beigemischt?

Würde es sich lohnen, die Axonschicht einmal mit dem 63er abzubilden? Sehe ich da Gliazellen?

Schöne Grüße und Danke für Deinen großartigen Beitrag!

Jürgen

Ronald Schulte · August 19, 2018, 19:07:49 NACHMITTAGS

@Rolf, danke für dein Lob.

@Jürgen,
Nee Jürgen, das LR White bleibt wohl nur bleibt Technovit auch und auch mein Epon geht vorläufig nicht weg. Alle Harzen haben so seine eigen vor- und nachteile.
Dieses Bock ist schon fünf Jahre alt nur war es noch nicht angeschnitten (da liegen noch sicher zwanzig Blöcke die alle noch ,neu' sind und warten auf das Messer).
Ich war nur für einige Forumsmitglieder am Schneiden und da kam dieses auch vorbei.

Welchen ,Kit' meinst du?

Zitat: ,,Was hast Du denn bei Deiner modifizierten Toluidinblaufärbung beigemischt"? Wusste ich das nur, es kommt aus Steinfurt. Der aber wusste gar nicht das er es hätte und meinte das es rein Toluidin B war. Ist aber richtig anders so wie du sehen kannst. Manche Gewebe Sorten Färbt es gar nicht schlecht und ich wollte eigentlich die Rezeptur haben. Es stammt von Chroma in Münster und ein Anruf nach dort hat mehr Fragen geliefert wie antworten. Die wissen es einfach nicht! Ich habe selber schon versucht mit verschiedene Rottönen bei zu mischen aber ohne Resultat. Chroma musste es wissen aber die haben leider keine Ahnung.

Die 63x Bilder habe ich eigentlich extra nicht eingestellt weil es nicht so die Scharfe Bilder liefert wie ich es wünsche. Das kommt hier weil den Schnitt 2µm Dick ist. Grund dafür ist das es ein ziemlich großen Schnitt ist und dann kann es nicht mehr so dünn geschnitten werden. Wenn ich richtig dünn (für Technovit so um die 0,8µm) schneiden möchte dann muss ich ein viel kleineres Block herstellen und dann am Ultra mit Glasmesser schneiden. Darum mache ich meist verschiedene Blöcke von das gleiche Gewebe. Man weis ja nie ob das Gewebe schöne Schnitte liefert!

Bild 9 Axionschicht mit Gliazellen. Linksunten die Granular Schicht.
Objektiv Leitz plan apo 63x na 1.4.

Bild 10 Axionschicht mit Gliazellen. Rechtsunten die Granular Schicht.
Objektiv Leitz plan apo 63x na 1.4.

Gruße Ronald

Jürgen H. · August 20, 2018, 09:45:06 VORMITTAG

Danke, Ronald, für die Ergänzung. Besonders das zweite Bild finde ich auch hervorragend.

ZitatWelchen ,Kit' meinst du?

Den,auf den Du bei emsdiasum verlinkt hast, bezüglich der Karnovsky Fixierung. Über diese Fixierung habe ich wegen des großartigen Detailreichtums, den sie erhält, auch schon einmal nachgedacht. Aber wenn ich mir diese Preise ansehe... Natürlich sind das alles in Ampullen eingeschmolzene Reagenzien.

Schöne Grüße

Jürgen

Fahrenheit · August 20, 2018, 10:13:47 VORMITTAG

Lieber Ronald,

danke für den spannenden Bericht! Deine Präparate und Bilder sind lehrbuchreif!

Herzliche Grüße
Jörg

Ronald Schulte · August 20, 2018, 15:19:12 NACHMITTAGS

@Jörg, danke für dein Lob.

@Jürgen,
Oh ich hatte noch gar nicht bemerkt was EMS so alles berechnet aber was ich so sehe wird es nicht gerade billig, kommt Versand und Steuer noch dazu.
Ich habe die meisten Stoffe bei ein Forumsmitglied bestellt. Das Glutaraldehyd kommt von ein Freund aus Amsterdam, da musst du mal Rundfragen und kreativ sein.

Gruße Ronald

Ralf Feller · August 20, 2018, 21:07:35 NACHMITTAGS

Hallo Ronald,
endlich mal wieder Histologie,
und ein wirklich schöner Beitrag!

Den Histoatlas habe ich mir aus dem Netz heruntergeladen, danke für den Tipp.

Den Link zu der Firma EMS finde ich sehr interessant,
die sind zwar viel teurer als Morphisto, doch interessieren mich die Histo Knife H.

Du hast mir vor einem Jahr einmal einige deiner alten Wechselklingen geschenkt,
die waren nie vergessen. Ich habe nur auf einen sehr gut gelungenen Block gewartet
und der war jetzt da. Die Klingen (D-Schliff) schneiden wirklich viel besser als das was uns
heute Morphisto liefert. Ich bin ohne Probleme in Technovit auf 0,75µ gekommen.
Vielleicht haben die Amies ja noch so etwas. Ein Hartmetallmessser wie du es benutzt ist
ja sehr teuer.
Hast du mal bei EMS bestellt?
Alles andere was die so anbieten scheint mir hoffnungslos überteuert,
es sei denn die Sachen sind klasse.

Gruß nach Holland, Ralf

Ronald Schulte · August 21, 2018, 10:09:57 VORMITTAG

@Ralf,

Wenn du den Atlas wie ein pdf hast dann kannst du die einfach in PS öffnen. Dann kommen viele kleine ,thumbnails' und davon kannst du eins anklicken und dann öffnet die Abbildung wie ein neues PS Foto. Jetzt kannst du einfach die Abbildung bearbeiten. Viel einfacher wie die Seite scannen.

Ja EMS ist die letzten Jahre für uns ziemlich teuer geworden. Ich habe mal meine Paraffin Megakasetten da geholt mit die Rostfest stahlen Gießformen. Firmen hier in Holland kaufen auch dort und dann kommt noch mehr an Gewinn drüber. Darum habe ich es selber Importiert. Problem hier ist das Import aus die USA unter 22 euro gratis ist, von 22 bis 150 euro die MwSt. berechnet wird und alles mehr wie 150 euro kommt MwSt. und Gebühren dazu. Also du zahlst auch MwSt. über die Versand kosten. Ja somit wird es erst richtig teuer. Detail ist das ich meine beide Elektrische Mikrotome aus die USA habe.

Zu die Schnitte kann ich dir nur Gratulieren aber ich wusste selbstverständlich schon das die alten ,D' Schliff Messer die besten sind um Histologisches Gewebe in GMA Kunststof (Technovit) zu schneiden. Ich habe den umstellungsfehler (von ,D' Schliff nach ,C' Schliff) die Kulzer damals vorgenommen hat schon besprochen mit den Vertreter von Kulzer. Die hat das Schneideproblem Persönlich am Mikrotom beobachtet und zugegeben dass das so nicht geht. Kulzer hat eine neue Firma gesucht die Messer herstellen mit die Mitteilung um mich auch zu informieren in die Entwickelung. Das hat die Firma auch gemacht und ich habe zweimal Muster bekommen womit ich testen sollte. Alle Versuche aber waren schlecht bis dramatisch schlecht. Das Problem in die Anfertigung liegt bei die Maximalen Einstellwinkel die die Schleifmaschinen haben. Mann ist nicht in die Lage um ein Einmalklingel zu fabrizieren die kostentechnisch verkaufbar sind. Dann wurde es still. Für mich persönlich nicht so schlimm weil ich ja noch ausreichend Messer habe. Den Vertreter von Kulzer ist jetzt Pensioniert und damit ist ein Lösung für das Schneideproblem suchen auch aufgehört. Kulzer hat die Verkaufrechte an Morphisto verkauft/vergeben und jetzt fangen die bekannte Probleme wieder von vorne an.
Ich habe sogar ein Mail von Morphisto bekommen das die Messer noch immer im ,C' Schliff geliefert werden und es eigentlich nur ein Problem ist die ich habe. Andere Kunden können damit gute Schnitte machen. Ich habe schon vorgeschlagen um ein Test Session zu belegen aber habe nichts mehr vernommen.

Hier ein Zitat von den Mail die ich bekommen habe. Namen habe ich weggeputzt.
Ich bin froh das ich noch die alten ,D' Schliff habe aber was mache ich wenn die verbraucht sind!
Ein neues Hartmetall ist auch richtig teuer.

Hallo Herr Schulte,

ich habe Ihre Anfrage noch einmal an Kulzer weitergegeben. Wir hatten glaube ich im letzten Jahr darüber auch schon einmal korrespondiert. Soweit ich weiss, sind die Messer leider nicht wieder verändert worden. Da allerdings viele Kunden die Histoblades kaufen und damit gute Schniztte herstellen können, bin ich etwas verwudnert, dass das bei Ihnen nicht klappt?

Mit freundlichen Grüßen,
(hier folgt einen Namen)

Gruße Ronald

Jürgen H. · August 21, 2018, 14:14:36 NACHMITTAGS

Hallo Ralf und Ronald,

ihr redet doch von Einmalmessern, oder? Die hier

http://www.pfmmedical.co.uk/?product=microtome-blade-sh35w

kennt ihr wahrscheinlich, oder? Ich hab sie nicht probiert, schneide meine kleinen Viecherl in Technovit ja mit Glasmessern. Aber wenigstens lt. pfm sollen diese Einmalmesser kunststofftauglich sein.

Schöne Grüße

Jürgen

Ronald Schulte · August 21, 2018, 16:29:23 NACHMITTAGS

Jürgen,

Die Messer in dein Link meine ich nicht aber das sieht wohl interessant aus. Ich habe leider kein Feather Messerbehalter und in mein Kulzer Behälter passt es nicht. Die Kulzer einmalklingeln sind nur sechs Zentimeter lang und kein acht wie die Feather. Vielleicht hat Ralf noch eins in die Schublade. Man musste die Messer einfach mal testen.

Die Messer Winkel die ich meine sind die Alten Kulzer ,D' Schliff Messer und die neuen ,C' Schliff. Die schneiden einfach nicht.

Ralf Feller · August 21, 2018, 20:04:34 NACHMITTAGS

@Jürgen,
danke für den Hinweis!

@Ronald,
ich habe leider nur den Feather-Klingenhalter für die Low-Profil Klingen,
ein neuer Klingenhalter würde ja auch einige hundert Euro kosten,
da rechnet sich ja fast schon der Preis für ein Hartmetallmesser.
Ich habe aber heute noch einmal bei Morphisto angerufen,
es gibt inzwischen mehr unzufriedene Kunden und man sagte mir,
dass das Problem noch einmal mit dem Klingenhersteller besprochen wird.

Gruß, Ralf

Ronald Schulte · August 21, 2018, 20:51:49 NACHMITTAGS

Ralf,

Ein Holländische Kollege hat ein Reichert-Jung Einmalklingeln Behälter und der möchte auch gerne Technovit schneiden. Weil ich Ihm von die Histoknife Probleme erzählt habe kann es sein das die Feather SH35W bei Ihm passen und vielleicht wäre das ein gutes Alternativ. Ich schreibe mal was Firmen und Ausländische Histo Forums an um raus zu kriegen ob die Messer tauglich sind. Dann wurde ich auch gerne mal ein Preis hören.

Gut das du mal wieder das Problem erwacht hast. Scheinbar werden Firmen nur aktiv wenn mehrere Kunden sich beklagen.
Für Forumsmitglieder die mitlesen und nicht genau wissen was die Unterschiede sind habe ich die Messer mal seitlich fotografiert und beschriftet.
Erstmal ein Zeichnung wie verschiedene Schliffe aussehen.

Gruße Ronald

Jürgen H. · August 21, 2018, 21:22:05 NACHMITTAGS

Ein wenig komisch kommt mir der Satz bei der Featherklinge vor: Suitable for use with the pfm medical disposable blade holder HP TC (030065). Nur: diesen Klingenhalter scheint es bei pfm nicht mehr zu geben. Jedenfalls finde ich ihn nicht. Wie kann pfm die Klingen vertreiben ohne einen passenden Klingenhalter anzubieten?

Ich habe leider auch nur den üblichen low profile Halter.

Schöne Grüße

Jürgen

ps.

der zugehörige Klingenhalter bei pfm hat sich gefunden, passt aber leider für uns gar nicht:

https://www.pfmmedical.com/de/produktkatalog/zubehoer_mikrotome/oberteil_einwegklingenhalter_hp_tc/index.html