Zählkammer Neubauer improved

[rlu]

Hallo,

wir machen gerade vom Verein aus Versuche zur Zellzählung.
Eine Zählkammer funktioniert grundsätzlich so: ein etwas dickerer Objektträger hat Gitterlinien eingraviert, diese Gitterlinien ergeben Quadrate. Die kleinsten Quadrate haben eine Fläche von 0,0025mm². Die Höhe ist vorgegeben meist 0,1 mm. Daraus ergibt sich das Volumen. Wenn man die Zellanzahl pro Volumen kennt, dann kann leicht auf die Konzentration pro ml oder Liter hochgerechnet werden. Jetzt zählt man natürlich nicht ein Quadrat aus, sondern mehrere.
Hier soll eine alternative Zählmethode vorgestellt werden, die ich mir überlegt habe. Da ich weder im Labor arbeite, noch PTA/BTA/CTA/MTA bin, bin ich für Anregungen dankbar.

Ich habe leider nichts näheres zur Neubauer improved gefunden, d.h. was sich der Erfinder genau dabei gedacht hat. Diese Zählkammer scheint mittlerweile der Standard zu sein, wenn per Hand ausgezählt wird.
Es gibt eine Anleitung von Marienfeld, die aber bei dem Punkt Auszählung nicht konkret wird.
Die Anleitung von der Firma Brand ist detaillierter. Dabei muß auf allen Seiten die mittlere Begrenzungslinie beachtet werden, was anstrengend ist.
Ich habe beide Anleitungen unten angehängt.

Die neue Idee ist, die umfassenden Bereiche, die wie Stäbchen aussehen, in zwei zusammenhängende Bereiche umzugruppieren. Dadurch wird die Übersichtlichkeit erhöht und das Auszählen vereinfacht. Die Neubauer improved ist von drei Linien begrenzt. Die inneren blauen Balken sind Bestandteile der Quadrate.



Umlegen der Stäbchen zu einem zusammengehörigen Bereich. Der hellblaue Bereich wandert nach links, der lila Bereich nach oben.
Das einzelne blaue Kästchen von rechts unten nach links oben. Der Flächeninhalt hat sich dadurch nicht geändert.


Gezählt(schwarze Punkte) wird, wenn die Zellen links oder oben im blauen Bereich zu liegen kommen. Und wenn sie im inneren blauen Bereich liegen.
Wenn sie Kontakt mit den farbigen Feldern(rot, gelb, grün) rechts oder unten haben, dann nicht.
Auch dann nicht, wenn sie den blauen Bereich gleichzeitig berühren. Zellen, die die blaue Ecke oben links berühren, werden gezählt.
Der Bereich aus 4x4 Kästchen, der mäanderförmig zum Zählen mit dem Objektiv durchfahren wird, ist dadurch sehr übersichtlich.



Anleitung von "Marienfeld"

Anleitung Marienfeld Zählkammer

Anleitung von "Brand"

Produktkatalog Brand Life Science Katalog Seite 12 -Neubauer Zählkammer

[Bob]

Hallo Rudolf,
mit dem Zählen habe ich mich noch nicht beschäftigt und kann Deine Methode daher nicht beurteilen. Meine Erwartung wäre, dass das auf dem Papier viel eindeutiger aussieht als in Wirklichkeit, und die mitzählen/nicht mitzählen- Entscheidungen im mikroskopischen Bild gar nicht so leicht zu treffen sind. Was möchtet Ihr denn konkret zählen, und magst Du mal ein Foto von den Objekten in der Zählkammer zeigen, damit man sich darunter eher etwas vorstellen kann?
Mit der kostenlosen Software Fiji/Image J kann man übrigens automatische Zählungen durchführen, falls das zum Vergleich interessant wäre.

Viele Grüße,

Bob

[rlu]

Hallo Bob,
wir haben ja auch die Mikrobiologie im Namen, wie ihr und wollen etwas mehr mit dem Thema machen. Es geht um die Zählung von Hefezellen mit verschiedenen Verfahren. Wenn man sich darauf einläßt ein faszinierendes Thema. Man arbeitet mit extrem genauen und geeichten Meßgeräten und sehr kleinen Volumina, also mit einer Zählkammer. Ich werde danach noch ein paar Bilder reinstellen, wie die Aussehen, wie sie aufgebaut sind. Und von meiner Erfahrung mit China-Ware berichten. Früher wurden die Zählungen der Blutbilder von Hand und mit dem Mikroskop gemacht. Heute gibt es Zellzähler und Software wie Fiji. Ich werde dann hellhörig, wenn man eigentlich garnicht mehr so richtig weiß wie man das händisch machen kann und warum man es so macht. D.h. man kennt nur den Ort und nicht mehr den Weg, den man gegangen ist. Also muß man den Weg wieder selber gehen. Darum geht es ja hier im Forum im besten Sinne.
Liebe Grüße
Rudolf

[rlu]

Vorschlag - wie man dann zählen könnte. Wenn man sich in einem Kästchen befindet, zählt man die Zellen, die sich auf der unteren Linie befinden nicht mit.
Die Zellen, die auf der untersten Linie von dem 4x4 Bereich liegen, gehören ja schon zum gelben Bereich.

[rlu]

Hier sieht man eine Zählkammer nach Türk. Der Mittelbereich beinhaltet das Zählnetz und liegt etwas tiefer und zwar hier bei dieser Kammer um 0,1mm. Links und rechts davon befinden sich zwei extrem genau gefertigte und plangeschliffene Stege, die um 0,1mm höher liegen. Das dazu passendes Deckglas ist dicker ist als ein normales Deckglas und wurde plan geschliffen. Die Stege werden mit Alkohol, Wasser oder Fett benetzt, über das wie und mit was kann man diskutieren. Dann wird das Deckglas vorsichtig hin und her bewegt. Wenn fast kein Abstand mehr zwischen Deckglas und Steg besteht, dann bilden sich bunt schimmernde Newtonsche Ringe aus. Das sind Interferenzen und ein Zeichen, dass eine gute Verbindung vorhanden ist. Es gewährleistet ein definiertes Volumen.
Die Gitterlinien sind so fein, dass man sie kaum sehen kann. Die Zählkammern unterscheiden sich von der Einteilung, der Anzahl der Linien und der Höhe und damit vom Volumen pro Klein-Quadrat.


Beschreibung von Marienfeld wie eine Zählkammer aufgebaut ist. Siehe Link zum Dokument.

[rlu]

Hier eine billige China Zählkammer, von der der Verkäufer behauptet, es wäre eine Neubauer improved
Die Stege sind nicht einmal beschliffen


So sieht dann das Zählnetz aus

[piu58]

> Früher wurden die Zählungen der Blutbilder von Hand und mit dem Mikroskop gemacht.

Ich arbeite im Krankenhaus: Es gibt immer noch manuell differenzierte Blutbilder. Die Automaten können Retikulozyten nicht  erkennen, das ist in der Hämatologie aber von großer Bedeutung.

[Bob]

Hallo Uwe,
war es nicht auch so, dass die Automaten mit dem Blut von Neugeborenen nicht zurechtkommen? An sonsten soll die Zählung vom Automaten wohl genauer sein, ein eine größere Anzahl gezählt wird.
@Rudolf: Mich macht es auch kribbelig, wenn die Ergebnisse solcher Automaten verwendet werden, und freiwillig die Möglichkeit einer Kontrolle aufgegeben wird. Wenn man sich oft genug mit Messungen befasst hat, ist das Grundvertrauen ruiniert...

Viele Grüße,

Bob

[güntherdorn]

nun muss ich auch noch "meinen senf dazugeben"....
mit dem arbeite ich seit 14 jahren z.b. auch für behörden.
ciao,
güntherdorn