Einfluss des PH-Wertes auf Färbungen mit Acridinorange

[Aljoscha]

Hallo,

Mit einer kleinen Versuchsreihe habe ich drei Proben mit Acridinorange gefärbt. Als Probe wurde Speichel verwendet. Dieser wurde mit etwas Ringer-Lösung verdünnt auf den Objektträgern ausgestrichen. Nach der Lufttrockung auf einer Wärmeplatte (37° C) wurde mit Methanol fixiert. Die Färbelösungen wurden auf PH 4 (Acetat-Puffer), PH 7 (PBS) und PH 13 (KOH) eingestellt.

Die Ergebnisse der drei Färbungen unterscheiden sich deutlich.

PH 7 bringt die gleichen Ergebnisse wie Acridinorange in Aqua dest. Die Epithelzellen sind grün, ihre Zellkerne gelb und die Bakterien orange bis rot.

PH13 sieht ähnlich aus aber die Epithelzellen sind deutlich verformt. Dieser PH-Wert ist für diese Art Probe nicht geeignet.

PH 4 produziert ein komplett anderes Bild. Die Epithelzellen sind in den Okularen noch schwach zu erkennen, auf dem Foto verschwinden sie. Dafür treten ihre Zellkerne sehr markant in grün hervor. Es sind sogar Details innerhalb der Zellkerne erkennbar. Die Bakterien sind gelb bis grün.

Auffällig ist auch die unterschiedliche Stärke der Fluoreszenz bei Blauanregung. Das spiegelt sich in der erforderlichen Belichtungszeit wieder. PH 7 wurde 1 Sekunde belichtet, PH 13 dagegen 6 Sekunden und PH 4 sogar 8 Sekunden.

Alle Aufnahmen entstanden mit einem NPL Fluotar 40/1.30 ÖL. Auf Stacking und aufwendige Bildbearbeitung habe ich hier verzichtet. Daher finden sich in den Bildern unscharfe Stellen.

Viele Grüße

Alexander