Altes Leitz Ploemopak richten

[Jürgen H.]

Hallo Andreas,

Welche Objektive verwendest du? Hast du eine Bertrand-Linse im System, damit du auf Verunreinigungen checken kannst?

Verwendet habe ich ein 25/65er PlApo.Bertrand habe ich nicht, allerdings ein Einstellfernrohr.
Ich bin gespannt auf Dein Fluoreszenzbild. Bei mir führt eine einfache Durchlichtfluoreszenz mit dem BG 38 auf dem Lichtaustritt ohne den Ploemopak zu schärferen Bildern...

Viele Grüße

Jürgen

[andr_brno]

Hallo Jürgen,
ich habe dich nicht vergessen. Aaaber - die Floureszenz des Chlorophylls kann ich nicht ordentlich fotografieren. Ich hänge dir zwei Bilder an, ein Moosblättchen mit 22er Wasserimmersion im Durchlicht, Filterwürfelstellungen 1 (UV), die Chloroplasten sind scharf. Das sieht auch mit Filter 4 relativ gut aus (halt recht rot in rot), obwohl er "wolkig" gealtert ist, wie du weißt. Dann der Versuch mit Auflicht blau, mit oder ohne blauem Anregungsfilter (ist bei der blauen LED egal), Filterwürfel 4. Optisch kann ich Strukturen in den Chloroplasten erkennen, die Begrenzung ist scharf, der Hintergrund schwarz.
Die Kamera macht mit einer Belichtungszeit von rund 1 sec unscharfe rote Flecken vor rötlichem Hintergrund draus.
Mehr kann ich mit meinen technischen Mitteln nicht herausholen - vielleicht ginge was mit Justage von ASA-Werten und manueller Vorgabe der Belichtungszeit. Dazu fehlt mir die Muße.
Schwierig ist auch der Effekt, dass die beleuchteten Chlorplasten schnell "ausbleichen" - bis man an der Kamera herumgefummelt hat, ist die ganze Pracht schon verblasst.
Ich kann dir gerne per Mail noch weitere Ergebnisse zum Veergleich schicken, sende mir gerne eine Nachricht.
Grüße
Andreas

[Jürgen H.]

Lieber Andreas, herzlichen Dank für Deine beiden Bilder. ich möchte vermuten, dass Du nicht nur eine Belichtungszeit von 1 Sekunde, sondern auch eine recht hohe Isozahl verwendet hast? Bei meinem Ploemopak bekomme ich kaum ein fotographierfähiges Bild heraus, es ist einfach sehr lichtschwach. Zeigen kann ich nur eine Alternative: Foto mit Ortholux, Durchlicht, Glaserregerfilter BG 12 4 mm, Weißlicht LED, Sperrfilter K 530, Pl APO 170/25, Fluokondensor 1,4 mit Wasser emergiert, Coolpix 4500, Belichtung 1/2 Sek.,  ohne Weißabgleich vor der Photographie. Präparat Niere, 2mü, H-E Färbung.

Die Mängel sind unverkennbar. Zum Teil sind sie auf mangelnde Fähigkeiten zurückzuführen. Die Coolpix bereitet mir enorme Schwierigkeiten, das Präparat wirklich scharf zu stellen. So ist auch bei mir der visuelle Eindruck weitaus besser. Aber der Versuch genügt, um für mich die Schlussfolgerung zu ziehen, dass in meinem Fall die Durchlichtlösung vorzugswürdig ist, die Mühe, den Ploemopak zu richten, scheint sich nicht zu lohnen. Es mag auch an der Beleuchtung liegen, die bei mir ja "über zwei Ecken" sprich Spiegel erfolgt -ich habe ja noch das Umschaltortholux...

Viele Grüße

Jürgen

[Jürgen H.]

Ergänzung: Das Hellfeldbild habe ich mit dem gleichen immegrierten Fluokondensor ohne Abblendung und ohne Leuchtfeldblende aufgenommen. Das sähe mit dem Berek anders aus.

[purkinje]

Hallo Jürgen,
meinst Du mit dem "Fluokondensor" den hier: Kondensor 72r? Falls ja, glaube ich nicht dass ein Berek mit Immersionskappe ran kommen würde.
Beste Grüße Stefan

[Jürgen H.]

Lieber Stefan, ja der 72r, ein Kondensator mit 1,4 Ap.ohne Leuchtfeldblende, insoweit anders als beim Berek.
Zum Vergleich zwei Aufnahmen mit dem Derek 1,4, Glyc Immersion, Bel. 1/2 Sek beim Fluobild, sonst im Wesentlichen ähnliche Bedingungen, gleich sind sie ja nie.Das Fluobild ist vollständig unbearbeitet, nur etwas verkleinert.

Viele Grüße

Jürgen

[Spectrum]

Hallo Jürgen,
Wie sieht denn ein Bild des HE Schittes in Auflichtfluoresz mit deinem Ploemopak aus?
Das Bild des Moosblättchens sah ja zumindest was den schwarzen Hintergrund angeht, gar nicht mal so schlecht aus.
Aber hier kommen ja doch einige Variablen gleichzeitig ins Spiel (verschiedene Lichtquellen, Präparate, verschiedene Emissionsfilter...)
Da fällt ein Vergleich erstmal schwer.
LG Holger

[Jürgen H.]

Lieber Holger,

anbei noch zwei Bilder: Wesentlich besser wird der Kontrast über einen schwarzen Hintergrund, wenn das Spektrum des Erregerlichtes weiter eingeschränkt wird, indem ich mit einer 470nm LED beleuchte: Das erste der beiden folgenden völlig unbearbeiteten Bilder zeigt das Nierenpräparat mit Durchlichtfluoreszenz! - über den Berek 1,4 Glyc. aber durch den Teilerspiegel des Ploemopak, den Sperrfilter des Ploemopak und den K530.

Hingegen ist die Auflichtfluoreszenz über den Auflichtstrahlengang viel zu lichtschwach. Bei diesem Versuch habe ich den BG 12 4 mm einfach in den Auflichtstrahlengang gehalten. Der ist hierfür eventuell etwas zu dick. Ohne den BG 12 geht es aber gar nicht: Dann bekomme ich ein absolut vergrüntes Bild.

Viele Grüße

Jürgen

[Spectrum]

Hallo Jürgen,
Ok,
In Bild Nr.1 im sehen wir ein Bild im Durchlicht, mit der blauen LED als Beleuchtung (das sieht ja schonmal ganz gut aus).
Hier sieht man auch den Vorteil gegenüber deiner Aufnahme mit weißer LED. Der Hintergrund ist aufgrund des viel "sauberen" Anregungslichts viel dunkler, in Relation zu dem Fluochrom.

Bild Nr.2 ist genau mit derselben Konstellation, aber diesmal über den Auflichtstrahlengang des Ploemopak beleuchtet, richtig?
Und bei zweiterem hast du massive "Vergrünung", auch über dem ansonsten bei Durchlicht dunklem Hintergrundbild...
Und das Grün verschwindet dann nur mit dem BG12?

Wo kommt dieser Grünschleier der nur bei Auflicht so deutlich auftritt, her?

Das sieht mir nach irgendeiner ungewollten Fluoreszenz oder Sreulicht im Auflichtstrahlengang aus, die nur bei Beleuchtung von oben auftritt.

Ist der Grünschleier auch noch zu sehen wenn du den Objekträger und den Kondensor entfernst, bzw. einfach nur ein schwarzes Stück Papier zwischen Kondensor und Objekttisch hälst?
Wenn das auch nichts an der Situation ändert muss das Problem im Ploemopak selbst liegen.
Und zwar auf der Strecke des Anregungslichts zwischen LED und Objekt.
LG Holger