Moos - FITC Autofluoreszenz

[zidnei]

Hallo liebe Mit-Mikroskospierenden,

Ich wollte mal ein Bild teilen, das ich mit meinem (für mich) neuen Fluoreszenz-Mikroskop BX61 mit BX-RFLA und meiner (für mich) nicht neuen C-Mount Mikroskopkamera aus Fernost gemacht habe. Angeregt wurde mit FITC. Das Moos ist unbehandelt und ich habe nur Wasser unter das Deckglas.

Handelt sich um einen Stack aus  42 Fotos mit ZereneStacker (PMAX Methode), UPlanApo 10x. Musste die Qualität natürlich schon runterschrauben damit ich es hochladen konnte.

Das abgebildete Moos habe ich leider vorher nicht bestimmt.

Ich freue mich über Feedback.

[rhamvossen]

Hallo,

Sehr schön! MfG,

Rolf

[Daniel Scheibenstock]

Hi,

Schön einen weiteren Fluoreszenznutzer im Forum zu haben. Gerne mehr💪

Liebe Grüße Daniel

[Bernhard Lebeda]

Angeregt wurde mit FITC. Das Moos ist unbehandelt und ich habe nur Wasser unter das Deckglas.

Das verstehe ich nicht ganz! Fluorescein ist doch ein Farbstoff, wieso dann Autofluoreszenz?

LG Bernhard

[Michael K.]

Hallo,


Auch wenn ich nie mit Autofluoreszens etwas zu tun haben werde, finde ich das Bild sehr schön.


LG
Michael

[Peter_le]

Das verstehe ich nicht ganz! Fluorescein ist doch ein Farbstoff, wieso dann Autofluoreszenz?
LG Bernhard

Damit wird die Filterkombination gemeint sein, die für FITC gedacht ist. Dann muss man nicht die Wellenlängen nennen.

Grüße
Peter

[Bernhard Lebeda]

Das verstehe ich nicht ganz! Fluorescein ist doch ein Farbstoff, wieso dann Autofluoreszenz?
LG Bernhard

Damit wird die Filterkombination gemeint sein, die für FITC gedacht ist. Dann muss man nicht die Wellenlängen nennen.

Grüße
Peter

ah verstehe!

Besten Dank

LG Bernhard

[Rawfoto]

Guten Abend

Gratulation zum neuen Mikroskop, schönes Bild, es zeigt nach meinem Verständnis aber keine Fluoreszenz, da müsste ein helle Reaktion sichtbar sein.

Ich zeige was die KI zu FITC zeigt:

Fluoresceinisothiocyanat (FITC) ist ein weit verbreiteter, kostengünstiger fluoreszierender Farbstoff, der primär zur Markierung von Proteinen, Antikörpern und anderen Biomolekülen in der Mikroskopie und Durchflusszytometrie verwendet wird. Er absorbiert blaues Licht (Anregungsmaximum $\sim$495 nm) und emittiert helles grünes Licht (Emissionsmaximum $\sim$519-520 nm).


Ich gehe davon aus das kein FITC zum Einsatz gekommen ist. Es ist einfach die Bezeichnung die auf dem Würfel steht.

Liebe Grüße

Gerhard

[Carsten Wieczorrek]

Hallo,
es wäre aber schon einfacher/deutlicher die Anregungswellenlänge zu nennen. Autofluoreszenz bei grünen Blättern hätte ich mir auch eher rot vorgestellt.
Grüße
Carsten

[zidnei]

Vielen Dank für eure Antworten.

Tut mir leid für meine undeutliche Ausdrucksweise.
Hier nochmal eine ausführlichere Schilderung, wie ich es verstehe. Ich freue mich über jede Korrektur, ich habe mich mit dem Thema leider noch nicht sehr tief befassen können...Man entschuldige also die etwas schlampige Verwendung des Vokabulars, ich versuche mich zu bessern.

Also ich habe einen Semrock Brightline LF488-A-OMF Filterwürfel bei meinem Mikroskop dabei gehabt, der wohl eigentlich auf eine 488nm Laser-Lichtquelle ausgelegt ist. Der Anregungsbereich sollte also theoretisch relativ genau um diese 488nm, mit einem Emissionsbereich um 500-550nm sein. Ist also ein für GFP/FITC ausgelegter Filterwürfel.

Meines Verständnisses nach sollte man hier dann schon von (Auto-)Fluoreszenz sprechen können - sind halt hier eher Bestandteile der Zellwände die man im Emissionsbereich sieht.
Im Anhang ist noch ein Foto von einem Querschnitt einer Kiefernadel - Hier sieht man ganz gut dass die Cuticula und lignifizierten Bereiche des Leitgewebes bei Anregung um die 488nm auch stark emittieren.

Meine anderen Filterwürfel sind auch alle aus dieser auf Laser optimierten Serie.
Ich benutze allerdings "leider nur" eine normale Hg-100W Lampe im U-LH100HG - anscheinend nicht optimal mit meinen Würfeln - es scheint aber in meinen bisherigen Versuchen auch immer genug im Anregungsbereich durchzukommen...

Liebste Grüße,
zidnei

[Rawfoto]

Guten Morgen,

Ja, jetzt siehst du schon einmal etwas. Um Pflanzen in Autofluoreszenz zu sehen benötigst du andere Filterwürfel. Blau, Blauviolett oder Violett sind da optimal. In diesem Bereich gibt es für dein Olympus 8 verschiedene.

Freundliche Grüße

Gerhard