Fragen zu einfacher Floureszenz mit Auflichtilluminator

[Aljoscha]

Hallo Siegfried,

Die Reflexe werden weniger, wenn Du einen Filter wählst, der im Bereich 570 - 590 nm sperrt.

Viele Grüße

Alexander

[Siegfried]

Hallo Alexander, Carsten und alle
Ich bin im Moment in der Versuchsphase, noch Spielereien, weil es einfach Spass macht.
Auch die Ausleuchtung mit der Royal Blue LED werde ich noch verbessern.
Hier wieder ein kleiner Fortschritt, 2 Fotos mit meinem Auflichtilluminator von Carl Zeiss Jena am Ergaval, eines Präparates von H.G. Plescher (Lorbeerblattstengel) mit Fluoreszenzeinfärbung. Welche Farbe benutzt wurde, ist nicht angegeben. Nochmals danke an den Mikrofreund, der mir den Auflichtilluminator besorgt hat.
Zuerst immer das Diagramm von Lee und dann das Ergebnis. In Zukunft will ich evtl. auch andere Species anfärben und damit versuchen. Das sind aber alles noch Wunschträume.









  Gruß von Siegfried

[Aljoscha]

Hallo Siegfried,

Das funktioniert doch bereits sehr gut.

Viele Grüße

Alexander

[3nzo]

Hallo Siegfried,
Ich denke, dass diese Filter nicht für Fluoreszenz geeignet sind.
Das erste Foto ist rot, weil der Filter rot ist, stattdessen sollte er blau sein. Anstelle der Zellwände sollten die Chloroplasten rot sein.
Um den Durchtritt anderer Farben zu verhindern, ist ein Blau-Violett-Filter von beträchtlicher Dicke erforderlich. Nach der Blockierung des Blaus erhält man so eine sehr schwache, vom Chlorophyll abgegebene Leuchtkraft.
Beste grüße.

Enzo

[Siegfried]

Hallo Enzo und alle
So nun bin ich erst einmal wieder ausgebremst, aber aufgeben ist natürlich keine Option. Ich bekomme noch diese Woche von einem Forumsmitglied Zeiss Glasfilter, dann sehe ich weiter. Wer mir weitere Hinweise geben kann, nur zu. Heute wird es sowieso nichts mehr, mein Auto hat nach langer Zeit mal wieder einen Platten.
Das Leben ist eben kein Wuschkonzert. Grieg mer aber in den Griff.
   Gruß von Siegfried

[Aljoscha]

Hallo,

Warum der Filter blau sein soll, erschließt sich mir nicht. Den Sperrfilter wähle ich passend zu der erwarteten Fluoreszenz. Dass ein roter Filter nur rot durchlässt ist nicht verwunderlich. Die These, dass er damit untauglich sei, allerdings schon.

Die beiden Bilder zeigen einen mit Fluorochromen gefärbten Schnitt. Da ist nichts mit Chlorophyll und dessen Autofluoreszenz. Bei Anregung mit einer blauen LED ist ein blauer Sperrfilter völlig daneben. Der Sperrfilter muss im Bereich Grün, Gelb oder Rot gewählt werden, je nachdem, was man darstellen will.

Richtig ist: je kurzwelliger die Sperrfrequenz gewählt wird, desto mehr Farben kann man im Bild haben. Deshalb ist bei Hobby-Mikroskopikern die UV-Anregung so beliebt. Sie erlaubt Fluoreszenz über den gesamten sichtbaren Bereich, alle Farben können vorhanden sein. Das gibt hübsche Bilder. Je langwelliger die Anregung ist, desto eingeschränkter wird das mögliche Farbspektrum der Emission.

Will man konkrete Details darstellen, wählt man den Sperrfilter möglichst eng. Oft werden Bandfilter eingesetzt. Im Profi-Labor wird durchaus mit Rot angeregt (Beispiel: Texas Red). Da kann nichts anderes als wieder Rot oder IR rauskommen. Viele Fluorochrome werden mit Grün angeregt. Dazu gehören neben Ethidiumbromid auch einige Rhodamin-Derivate.

Viele Grüße

Alexander

[peter-h]

Für mich gibt es nur UV-Anregung. Warum? Es kann ein sehr großes Farbenspektrum erfaßt werden was bis nahe ins Blaue geht. Da eine Betrachtung auch nur über den Monitor erfolgt ist die Gefahr fürs Auge bei Null. Selbstverständlich ist am Mikroskop ein Schutzschild.

Sori vom Wurmfarn.


Gruß
Peter

[3nzo]

Hallo Siegfried,
Vielleicht habe ich es nicht verstanden, andererseits verwende ich Google Translate
Ich hatte gedeutet, dass Sie die Chlorophyll-Fluoreszenz mit Blau untersuchen wollten.
In diesem Fall sind ein blau-violetter Anregungsfilter und ein orangefarbener Barrierefilter erforderlich. Wenn Sie stattdessen Ultraviolett verwenden, benötigen Sie einen Erreger, der die UV-Strahlen durchlässt, und eine Barriere, die sie blockiert.
Die Filterpaare sind in der Tabelle am Ende der Broschüre aufgeführt, die Michael Ihnen in einer vorherigen Nachricht mitgeteilt hat.
https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?action=dlattach;attach=38052
Viel Spaß und viele Grüße.

Enzo

[Siegfried]

Hallo Enzo, Alexander und Peter H.
@ Enzo--
Du hast mein Anliegen schon richtig verstanden, ich hatte ja am Anfang von der Sichtbarmachung von Chlorophyll mittels Fluoreszenz geschrieben. Danach bin ich dann zu den Präparaten mit Fluoreszenfärbung gekommen. Ich bin eben noch ganz am Anfang, dadurch noch etwas an zu vielen Facetten interessiert. 
@ Alexander und Peter H.-
Ihr habt doch schon sehr viel Wissen bei diesem Thema, das merkt man und sieht man.
Danke für euere Hinweise. Ich mache weiter, es gibt noch viel zu lernen. Warte jetzt u.A. erst mal auf die Glasfilter.
  Gruß von Siegfried

[Siegfried]

Hallo zusammen
Kleines Update meiner Bemühungen. Das Thema Fluoreszenz ist ja so vielfältig, überhaupt wenn man nur einfach mal alles mit kleinem Aufwand aus Neugierde ausprobieren will, natürlich mit dem Wissen der Gefährlichkeit von UV-Licht. Ich setze prinzipiell bevor ich die LED einschalte meine Schutzbrille auf und schaue nicht durch die Okulare, sondern nur auf den Monitor.

https://de.xtool.com/products/professional-laser-safety-glasses-for-180nm-540nm-wavelength-laser-protection-goggles?currency=EUR&variant=43770757775649&utm_medium=cpc&utm_source=google&utm_campaign=Google%20Shopping&stkn=b84be624d410

So heute 2 Aufnahmen eines Präparates von H.G. Plescher"Casuarina equisetifolia Nadel in Fluoreszenzfärbung"
405nm und Zeiss Glasfilter gelb-orange und Objektiv 5x. Die Genaue Bezeichnung des Filters bringe ich noch in Erfahrung.
1.Foto mit Auflicht und ja, ich habe es auch einmal mit Durchlicht probiert. Gleicher Filter.
2.Foto.
Im Präparat sind mehrere Schnitte, daher auf den Fotos auch unterschiedliche Schnitte.







      Gruß von Siegfried
PS: bevor Nachfragen kommen, hier meine verwendete LED (Taschenlampe)- mit selbst gefertigten Adaptern angepasst an Auflichtilluminator oder 
    Durchlichtrohr und langen Belichtungszeiten.
    https://www.amazon.de/Taschenlampe-Ultraviolett-Stufenlose-Schwarzlicht-Wiederaufladbare/dp/B08NYJ9SDG

[Siegfried]

Noch ein kleiner Nachtrag zum 3. Advent.



    Gruß von Siegfried

[3D Alfons]

Hallo zusammen
Da hatte BW OPTIK mal eine prima Idee.
Den Anregunsfilter im Kühlkörper vor die blaue LED so das es bei mehreren Jena Mikroskopen einfeschoben werden konnte 
Sperrfilter dann in eine Filteraufnahme
Hat wohl niemanden interessiert so das es eingestellt wurde.
GRÜßE